多激酶通路抑制剂的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请要求于2012年9月26日提交的系列号61/706,684、于2013年1月28日 提交的系列号61/757, 331和于2013年3月14日提交的系列号61/785, 992的优先权权益。 每个这些申请均全部引入本文作为参考。
[0002] 在本公开中引用的所有文献均全部引入本文作为参考。
技术领域
[0003] 本发明涉及对位于多个信号通路中的激酶有抑制活性的激酶抑制剂及其治疗用 途。
【背景技术】
[0004] 癌症化学疗法最初依赖于具有广泛细胞毒性的药物。由于得到了有关癌症细胞生 物学的更多的了解，研发了靶向疗法，其抑制了信号蛋白（通常是激酶）的活性，所述信号 蛋白参与重要细胞功能的调节并在癌细胞中独特或过度表达。仅对特定的革G酶有活性的化 合物是在研发这种药物中通常所寻求的，但是由于越来越多的激酶组（kinome)成为实验 可得的，因此很显然，许多这些药物对额外的激酶也具有活性。有效性差异以及全身毒性通 常可归咎于这些额外的抑制活性。此外，癌症通常会对这类靶向疗法产生抗性，并且是在相 当短的时间内。因此，需要进一步且更有效的药物。
【附图说明】
[0005] 图1.代表图，其通过流式细胞计数显示了 D〇HH2细胞的细胞周期分析。
[0006] 图2.激酶组图，其显示了由实施例78评估的激酶抑制活性/氨基萘啶酮的选择 性、化合物1抑制的那些激酶子集和达沙替尼抑制的那些激酶子集。达沙替尼数据摘自文 献。
[0007] 图3.化合物1治疗后，对PARP裂解的分析。
[0008] 图4.化合物1对抑制PLCg2的磷酸化的剂量响应，其使用蛋白质印迹法。
[0009] 图5.比较不同的示例性化合物对PLCg2的抑制。
[0010] 图6.在未刺激的Ramos细胞以及用抗IgM抗体和增加剂量的化合物1刺激的 Ramos细胞中的PLC- γ 2的磷酸化。
[0011] 图7Α.比较不同的示例性化合物对SRC磷酸化的抑制。
[0012] 图7Β.通过流式细胞计数测定化合物1对SFK磷酸化的抑制。Ramos细胞用H2O 2/ 抗-IgG/FaB刺激10分钟。在刺激之前，将化合物1在含5% FBS的RPMI培养基中培养2 小时。将细胞在4°C的BD渗透/洗涤缓冲液中储存过夜后，将该细胞用FACS分析进行评 估，其使用抗-PSRC抗体和FITC-缀合的山羊抗-兔二抗。
[0013] 图8.比较不同的示例性化合物的pBTK抑制。凝胶图像上方的标签表示化合物编 号、经刺激的（S)和未经刺激的（U)对照组。
[0014] 图9.同时抑制BTK和SFK的氨基萘啶酮呈现出对培养基中的肿瘤细胞生长的相 对控制。
[0015] 图10.该图显示了通过各种治疗对肿瘤异种移植物生长的抑制。在两周的给药方 案中，从第3天开始，以20mg/kg的浓度静脉内给药利妥昔单抗。
[0016] 发明详述
[0017] 本文所公开的实施方案提供了化合物，尤其是氨基萘啶酮，其可逆地抑制两种或 多种激酶，该激酶位于两个或多个不完全独立但补充的信号通路中，所述信号通路参与细 胞增殖和存活的调节。第一通路的抑制起因于布鲁顿酪氨酸激酶（BTK)的抑制（特别是 在血液来源的细胞中）或是X染色体上的骨髓激酶（BMX)的抑制（特别是在上皮或内皮 来源的细胞中）。第二通路（即SRC家族的激酶通路）的抑制起因于对一种或多种SRC家 族的激酶（SFK)或其任意组合的抑制，所述SRC家族的激酶例如SRC、LYN或造血细胞激酶 (HCK)。本文所公开的实施方案还包括使用所公开的化合物以抑制一种或多种位于一或两 个通路中的靶激酶的方法，使用所公开的化合物以间接抑制位于一或两个通路中的一种或 多种靶激酶下游的信号递质的激活、活性或产生的方法，使用所公开的化合物以抑制细胞 的功能、增殖或存活的方法，其中一种或多种靶激酶在该细胞中被激活，以及使用所公开的 化合物以治疗与细胞异常或不期望的功能、增殖或存活有关的疾病或障碍的方法，其中一 种或多种靶激酶在该细胞中被激活。该疾病或障碍包括那些实质上的免疫或肿瘤疾病或障 碍。其它实施方案包括合成所述化合物的方法、合成中间体的方法以及中间体本身。
[0018] 细胞内信号包括一个复杂的蛋白质相互作用的网络。尽管通常以简化形式所呈现 的内容涉及从细胞外或内源的刺激到最终的细胞响应的线性路径，但是事实上存在多个可 能的分支点、会聚点和反馈回路。在正常生理学中，这可用作整合来自多重刺激的信号。许 多病理学病症（包括各种癌症和免疫性疾病）与失调的信号传导相关。因此，即使是不存 在具体的刺激，感受器或任意下游信号传导递质也可能会被异常激活，引起不恰当的细胞 激活，导致不受抑制的细胞增殖或病理表现的功能。通过抑制该异常或不适当激活的信号 传导蛋白的活性，已经有可能治疗所造成的病状。但是，在一些情况下导致用于正常生物反 应的不同下游中间体激活的其它信号通路使得该治疗更加复杂。所述下游中间体包括磷脂 酶c-y (PLC-γ )、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K)、促分裂素原激活蛋白（MAP)激酶、Grb2/S0S 复合物（生长因子受体结合蛋白2与Ras-鸟嘌呤交换因子SOS复合）、FAK (粘着斑激酶）、 AKT (蛋白激酶B)、STAT3(信号转导子和转录激活子3)和NF-κ B (核因子激活B细胞κ 轻链增强子）等等。如果第二通路已被激活，那么靶通路抑制剂的有效性将会降低或丧失。 即使是最开始仅有单一信号通路被激活，其抑制作用可对另一通路提供选择性压力以使所 述另一通路被激活并对第一通路的抑制剂产生抗性。因此，使用同时抑制多个相关靶点的 药物是非常有利的。
[0019] 主要一类信号传导蛋白是酪氨酸激酶。这些激酶磷酸化其底物中的重要的酪氨酸 残基，所述底物自身可含有激酶或具有其它的酶活性，该活性受磷酸化程度调节。或者，激 酶底物可通过磷酸化敏感结合（phosphorylation-sensitive binding)反过来调节它们的 靶点。信号激酶自身还可具有可被磷酸化的重要酪氨酸残基。在普遍的系统中，存在两种 重要的酪氨酸残基。当这两种酪氨酸残基均未被磷酸化时，则该酶无活性，而当这两种酪氨 酸残基均被磷酸化时，则该酶是充分激活的。当该酪氨酸残基中的一种被磷酸化时，该酶具 有部分活性。所述部分活性可与BTK -样非常低或与SRC-样高。在其它情况下，可存在 单一重要酪氨酸或多种重要酪氨酸。
[0020] 信号通常是由结合事件引发的，该事件暴露那些无法通过的酪氨酸残基，使得第 一激酶被激活。该结合事件还在导致各种信号通路成分的共区域化的激活过程中尤其重 要。该结合事件的实例是通过SYK (脾酪氨酸激酶）结合BCR (B细胞受体）共受体分子CD79A 和⑶79B的ITAM(基于免疫受体酪氨酸的激活）基序以及通过BTK结合3, 4, 5-三磷酸磷 脂酰肌醇（PIP3)，导致质膜内表面附近的的构象变化和共区域化，因此通过SYK促进BTK的 磷酸化。
[0021] 特定激酶的可观察活性水平与分子和群体水平的磷酸化程度以及存在的激酶的 量有关。因此，激酶激活或上调可反映磷酸化程度、表达水平或者二者的增加。同样地，下 调可反映磷酸化程度、表达水平或者二者的降低。通路激活程度反映了所有通路成分的激 活程度的净效应。
[0022] 就此，多种抑制信号激酶的癌症药物已经上市且更多的药物正在研发。这些药物 通常已开发，以抑制与待治疗疾病有关的单一靶激酶。事实上，许多这些药物抑制具有不同 效果的多种激酶。这些额外的抑制活性可导致针对待治疗疾病的药物的有效性，也就是说， 有效性可能不仅仅是由于对最初靶激酶的抑制；或该额外的活性可使该药物用于其它适应 症；或所述额外的活性可导致不希望的副作用和毒性。在一些情况下，这些不同的效应可 归因于相同的额外活性。在其它情况下，这些不同的效应可归因于不同的额外活性。同样 地，在各个实施方案中，存在不仅仅抑制最初靶激酶的氨基萘啶酮，并因此存在抑制这些激 酶相关方法以及治疗疾病或障碍的方法，所述疾病或障碍与所述其它抑制的激酶的激活或 活性相关，无论该相关性是除一个或另外的最初靶激酶与特定疾病或障碍之间的相关性之 外的相关性，还是替代一个或另外的最初靶激酶与特定疾病或障碍之间的相关性。通常，在 该实施方案中，对其它激酶的活性水平（测定为IC 5(I、EC5(I或K i等）与对最初靶激酶类似， 彼此在2倍、5倍或10倍以内。还在各个实施方案中，所述氨基萘啶酮对一、二或多个激酶 缺乏显著活性，当给药至哺乳动物（例如人）时，其活性伴有不希望的副作用和毒性。
[0023] 尽管该市售药物带来了控制各种肿瘤或消退各种肿瘤的成功，但是该靶向疗法的 普遍经历是最终出现抗性。抗性的两种机理是已知的。对于第一个，该治疗选择了能够抵 抗抑制的靶激酶突变体。对于另一个，所述治疗选择了细胞，其中网络中的另一激酶的表 达/激活增加，因此产生补偿信号。补偿信号代替阻断或抑制信号，尤其是在促进细胞的激 活、生成、增殖或存活中，且若没有该补偿信号，信号的阻断或