（红色区域）及矿化 作用（黑色区域）染色。在对照培养物（图8A)中，只有在培养物是W最高密度1.2X105个 细胞/cm2接种时才观察到适度分化成成骨谱系。然而，在暴露于luMGW2580的培养物中， 在W低密度4.OxlO4个细胞/cm2接种时观察到培养物中成骨分化显著稳健增加，运是由红 色区域（AI^L活性）及矿化的骨基质染色（黑色区域）证实。在类似测定中，BM-及CB-MSC 都在2.5碰6￥2580存在下扩增2代，然后^4.0別04个细胞/畑12涂铺。然后培养物分化14 天，分化成脂肪形成及成骨谱系（图18B)。运些培养物中观察到大量脂肪形成及成骨分化， 运分别是由油红0及ALP/矿化染色证实。总么运些数据表明，将BM-及CB-MSC培养物暴 露于GW2580促进它们强烈分化成不同谱系的能力，有可能是因为当与对照培养物相比时， 在暴露于GW2580的培养物中观察到MSC富集及增殖增强。
[0233]表1
[0234]
[023引表2
[0236]
[0237] 参考文献
[023引 1. Yu W.，Chen J.，Xiong Y.，Pixley F. J.，Yeung Y. G.，Stanley E. R. Macrophage proliferation is regulated through CSF-lreceptor tyrosines544,559，and 807. J Biol Chem. 2012:287(17) :13694-704.
[0239] 2. Tagliani E.，Shi C.，Nancy P.，Tay C. S.，Pamer E. G.，Erlebacher A.Coordinate regulation of tissue macrophage and dendritic cell population dynamics by CSF-l.J E邱Med. 2011 ;208 (9) :1901_16.
[0240] 3. Conway JG，McDonald B，Parham J，Keith B，Rusnak DW，Shaw E，Jansen M，Lin P，Payne A，Crosby RM，Johnson JH，Frick L，Lin MH，Depee S，Tadepalli S，Votta B， James I，Fuller K，Chambers TJ，Kull FC，Chamberlain SD,Hutchins JT. Inhibition of colony-stimulating-factor-1signaling in vivo with the orally bioavailable cFMS kinase inhibitor GW2580. Proc Natl Acad Sci U S A. 2005；102(44)：16078-83.
[0241] 4.Pixley FJ，Stanley E民.CSF-lregulation of the wandering macrophage: complexity in action. Trends Cell Biol. 2004:14(11) :628-38.
[024引 5. Dewar AL，Cambareri AC，Zannettino AC，Miller BL，Dohe:rty KV，Hu組es TP， Lyons AB. Macrophage colony-stimulating factor receptor c-fms is a novel target of imatinib.Blood.2005;105巧）：3127-32.
[0243] 6，Bourette RP，Rohrschneider LR. Early events in M-CSF receptor signaling. Grow化Factors. 2000 ;17(3) :155_66.
[0244] 7. Kaplan民N，Psaila B，Lyden D. Niche - to-niche migration of bone-marrow-derived cells.Trends Mol Med. 2007；13 (2)：72-81.
[024引 8. Yin T，Li L llie stem cell niches in bone. J Clin Invest. 2006 ;116巧）： 1195-201.
[0246] 9. Lo Celso C，Scadden DT. The haematopoietic stem cell niche at a glance. J Cell Sci.2011 ;124巧t 21) :3529-35.
[0247] 10. Wilson A, Trumpp A. Bone-marrow haematopoietic-stem-cell niches. Nat 民ev Immunol. 2006 ;6 (2) :93-106.
[0248] 11. Hume DA，Pavli P，Donahue RE，Fidler IJ. The effect of human recombinant macrophage colony-stimulating factor(CSF-1) on the murine mononuclear phagocyte system in vivo. J Immunol. 1988；141 (10)：3405-9.
[0249] 12. Wiktor-Jedrzejczak W，Bartocci A，Ferrante AW Jr，Ahmed-Ansari A，Sell KW，Pollard JW，Stanley E民.Total absence of colony-stimulating factor lin the macrophage-deficient osteopetrotic (op/op)mouse. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990 ; 87(12) :4828-32.
[0巧0] 13. Dai XM，Ryan GR，Hapel AJ，Dominguez MG，Russell RG，Ka卵S，Sylvestre V，Stanley E民.Targeted disruption of the mouse colony-stimulating factor 1 receptor gene results i打osteopetrosis，mononuclear phagocyte deficiency， increased primitive progenitor cell frequencies，and reproductive defects. Blood. 2002 ;99(1) :lll-20.
[0巧 1] 14.Shewchuk，L.M.，Hassell,A.M.，Holmes,W.D.，Veal,J.M.，Emmerson，比K.， Musso，D.L.，Qiamberlain，S.D. &Peckham，G.E. 2004 ;U.S.Pat.Appl.Publ. 79pp.US2004002145.
【主权项】
1. 一种培养间充质细胞谱系细胞的方法，所述方法包括使所述细胞与含CSFlR激酶抑 制剂的培养基接触。2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括： a) 从得自受试者的组织样本收获细胞，其中所收获的细胞包含所述间充质细胞谱系细 胞，及 b) 使所收获的细胞与含CSFlR激酶抑制剂的培养基接触。3. 根据权利要求2所述的方法，其中所述方法还包括c)得到富集所述间充质细胞谱系 细胞的细胞群体。4. 根据权利要求1或2所述的方法，其中所述CSFlR激酶抑制剂为GW2580、KI20227、 HY-13075、cFMS受体抑制剂II、cFMS受体抑制剂III、cFMS受体抑制剂IV或ARRY-382。5. 根据权利要求2所述的方法，其中所述收获的细胞还包含非间充质细胞。6. 根据权利要求5所述的方法，其中所述非间充质细胞包括巨噬细胞。7. 根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述方法是在体外进行。8. 根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述间充质细胞谱系细胞包含间充 质干细胞、间充质细胞祖细胞及基质源性细胞中的至少一种。9. 根据权利要求2所述的方法，其中所述组织样本包括骨髓、密质骨或脂肪组织。10. 根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述细胞与所述培养基接触至少一 小时、至少一天或至少一周。11. 根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中在使所述细胞与所述培养基接触 之前，所述间充质细胞谱系细胞的浓度为至少10个细胞/cm2。12. 根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述间充质细胞谱系细胞保留其 形成脂肪形成、软骨形成及成骨细胞谱系的能力。13. -种培养来自骨髓和/或密质骨的细胞以使细胞培养物富集间充质细胞谱系细胞 的方法，所述方法包括使所述细胞培养物与含CSFlR激酶抑制剂的培养基接触。14. 根据权利要求13所述的方法，其中所述来自骨髓和/或密质骨的细胞包含所述间 充质细胞谱系细胞及非间充质细胞。15. 根据权利要求13或14所述的方法，其中所述CSFlR激酶抑制剂为GW2580、 KI20227、HY-13075、cFMS受体抑制剂II、cFMS受体抑制剂III、cFMS受体抑制剂IV或 ARRY-382。16. 根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述方法是在体外进行。17. 根据权利要求13至16中任一项所述的方法，其中所述间充质细胞谱系细胞包含间 充质干细胞、间充质细胞祖细胞及基质源性细胞中的至少一种。18. 根据权利要求13至17中任一项所述的方法，其中所述细胞与所述培养基接触至少 一小时、至少一天或至少一周。19. 根据权利要求13至18中任一项所述的方法，其中所述间充质细胞谱系细胞保留其 形成脂肪形成、软骨形成及成骨细胞谱系的能力。20. -种细胞培养基，其包含CSFlR激酶抑制剂。21. 根据权利要求20所述的细胞培养基，其中所述CSFlR激酶抑制剂是一种通过与 ATP竞争结合至CSFlR激酶而抑制CSFlR激酶活性的小分子。22. 根据权利要求20或21所述的细胞培养基，其中所述CSFlR激酶抑制剂为GW2580、 KI20227、HY-13075、cFMS受体抑制剂II、cFMS受体抑制剂III、cFMS受体抑制剂IV或 ARRY-382。23. 根据权利要求20所述的细胞培养基，其中所述培养基包含I-IOuMGW2580。24. 根据权利要求20至23中任一项所述的细胞培养基，其中所述培养基还包含至少一 种生长因子。25. 根据权利要求24所述的细胞培养基，其中所述至少一种生长因子选自由FGF、EGF 及IGF组成的列表。26. 根据权利要求20至25中任一项所述的细胞培养基，其中所述培养基包括基础培养 基。27. 根据权利要求26所述的细胞培养基，其中所述基础培养基选自达尔伯克氏改良伊 格尔培养基（01日]?)、高级01^]\1、81〇 81〇1￥、31^^1'他111'8?10、他111'8?12、伊思考夫改良达 尔伯克氏培养基、neurobasal培养基、RPMI1640及MCDB120培养基。28. 根据权利要求20至27中任一项所述的细胞培养基，其中所述培养基还包含补充 剂。29. 根据权利要求28所述的细胞培养基，其中所述补充剂选自： ?胰岛素、转铁蛋白及亚硒酸盐（ITS); ?B27 ; ?地塞米松、胰岛素、EGF、胎球蛋白及白蛋白；及 ?地塞米松、bFGF、白蛋白及胰岛素。30. 根据权利要求20至29中任一项所述的细胞培养基，其中所述培养基还包含脂质。31. 根据权利要求30所述的细胞培养基，其中所述脂质是花生四烯酸、胆固醇、 DL-a-生育酚乙酸酯、亚油酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、油酸、棕榈油酸、棕榈酸及硬脂酸中的至 少一种。
【专利摘要】本公开提供一种培养间充质细胞谱系细胞的方法，所述方法包括使所述细胞与含CSF1R激酶抑制剂的培养基接触。本公开也提供一种培养来自骨髓和/或密质骨的细胞，以使所述细胞富集间充质细胞谱系细胞的方法，其包括使所述细胞与含CSF1R激酶抑制剂的培养基接触。本公开也提供细胞培养基，其包含CSF1R激酶抑制剂，且可用于培养间充质细胞谱系细胞和/或富集间充质细胞谱系细胞。
【IPC分类】C12N5/077, C12N5/0775, C12N5/02
【公开号】CN105026553
【申请号】CN201480012572
【发明人】B·J·肖特, C·杜罗尼奥
【申请人】干细胞技术公司
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2014年3月12日
【公告号】CA2906132A1, WO2014138888A1