脱发，斑形脱发，血清 阴性关节病，关节病，莱特尔氏病，牛皮癣关节病，溃疡性结肠炎关节病，肠病滑膜炎，与衣 原体、耶尔森氏菌和沙门氏菌有关的关节病，脊椎关节病，动脉粥样化病/动脉硬化，特应 性变态反应，自身免疫性大疱病，寻常天疱疮，落叶型天疱疮，类天疱疮，线状IgA病，自身 免疫性溶血贫血症，Coombs阳性溶血贫血症，获得性恶性贫血，青少年恶性贫血，肌痛脑炎 /RoyalFreeDisease，慢性皮肤粘膜念珠菌病，巨细胞性动脉炎，原发硬化性肝炎，隐原性 自身免疫性肝炎，获得性免疫缺陷病综合征，获得性免疫缺陷相关疾病，乙肝，丙肝，普通变 异性免疫缺陷（普通变异性血丙种球蛋白过少），扩张性心肌病，雌性不育，卵巢衰竭，卵巢 早衰，纤维化肺病，隐原性弥漫性纤维化性肺泡炎，炎症后间质性肺病，间质性肺炎，结缔组 织病相关间质性肺病，混合结缔组织病相关肺病，系统性硬化相关间质性肺病，风湿性关节 炎相关间质性肺病，全身性红斑狼疮相关肺病，皮肌炎/多肌炎相关肺病，肖格伦氏病相关 肺病，关节强硬性脊椎炎相关肺病，血管炎弥散性肺病，铁质沉着出血相关肺病，药物诱导 的间质性肺病，纤维化，放射性纤维化，闭塞性细支气管炎，慢性嗜酸细胞性肺炎，淋巴细胞 渗透性肺病，传染后间质性肺病，痛风性关节炎，自身免疫性肝炎，1型自身免疫性肝炎（典 型的自身免疫性或狼疮样肝炎），2型自身免疫性肝炎（抗LKM抗体肝炎），自身免疫性介 导的低血糖，B型胰岛素抗性伴黑棘皮症，甲状旁腺机能减退，与器官移植有关的急性免疫 病，与器官移植有关的慢性免疫病，骨关节病，原发性硬化性胆管炎，1型银肩病，2型银肩 病，特发性白细胞减少症，自身免疫性中性粒细胞减少症，肾病NOS，肾小球性肾炎，肾微型 血管炎，莱姆病，盘状红斑狼疮，男性原发不育或NOS，精子自身免疫，多发性硬化（所有亚 型），交感性眼炎，肺动脉高血压继发性结缔组织病，肺出血肾综合征，结节性多发性动脉炎 的肺部现象，急性风湿热，类风湿性脊椎炎，斯蒂尔氏病，系统性硬化，肖格伦氏综合征，高 安氏病/动脉炎，自身免疫性血小板减少症，特发性血小板减少症，自身免疫性甲状腺病， 甲状腺机能亢进，甲状腺肿自身免疫性甲状腺功能减退（桥本氏病），萎缩性自身免疫性甲 状腺功能减退，原发性黏液腺瘤病，晶状体源性葡萄膜炎，原发性血管炎，白癜风急性肝病， 慢性肝病，酒精性肝硬变，酒精诱导型肝损伤，胆汁淤积，特应性肝病，药物诱导型肝炎，非 酒精脂肪性肝炎，变态反应和哮喘，B组链球菌（GBS)感染，精神错乱（例如，抑郁和精神分 裂症），Th2型和Thl型介导的疾病，急性和慢性疼痛（不同形式的疼痛），和癌症诸如肺 癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌和直肠癌及造血系统恶性肿瘤 (白血病和淋巴瘤）。本申请的人抗体和抗体部分可用于治疗患有自身免疫性疾病的人，尤 其是那些与炎症有关的疾病，包括，类风湿性脊椎炎，变态反应，自身免疫性糖尿病，自身免 疫性葡萄膜炎。
[0112] 并且还知道NgR与其他蛋白相互作用，这些蛋白包括但不限于与细胞粘附、细胞 迀移、细胞追踪（celltracking)、轴突路径选择有关的蛋白及细胞外基质蛋白。本申请包 括的潜在治疗组合可能包括抗NgR的抗体和脑信号蛋白（尤其是Sema-la，lb;Sema-2a; Sema3A，B，C，D，E，F;Sema4A，D;Sema5A;Sema6D;Sema7A;SemaVA)，丛蛋白（Plexin-Al-4， Plexin-Bl-3，Plexin-Cl，Plexin-Dl，Tim-2)，神经毯蛋白（神经毯蛋白-1和神经毯蛋 白-2)，钙粘素（E-钙粘素和N-钙粘素），导蛋白（导蛋白-1)，肝配蛋白（EphA3,4,6,7,8 ; B2,B3)Eph受体，Eph配体，IgCAMs，生腱蛋白-C，CSPGs，生腱蛋白，Sema3A，纤维连接蛋 白，层粘连蛋白-1，胶原蛋白（例如胶原蛋白-IV)，Robo,Abl，N-Cadherin，Ll，NCAM。
[0113] 已经描述NgR还与胞外淀粉样前体蛋白片段（AP)相互作用。因此，本申请包括 抗NgR和A0种类（A01-4O，A0 1_42，A0寡聚体，A0多聚体，APglobulomer)的抗体的 组合。这类联合疗法有利于阿尔茨海默氏病的治疗。所述联合可能转化为对AD患者中轴 突生长/神经保护和斑块负荷的减轻和认知性能的双重效果。轴突和树突状丢失是阿尔茨 海默氏病非常早期的标志，而联合治疗可能非常有效。
[0114] 并且，如先前的描述，如上所述任一伴侣之间的双特异性抗体可能是有效的。如上 所述的这类抗体制品可用于治疗，帕金森氏病，脊髓损伤，外伤性脑损伤，多发性硬化，周围 神经损伤，精神分裂症，抑郁，焦虑以及任意上文提及的可塑性和轴突发育和神经毒性相关 疾病。
[0115] 本申请的抗体可以与肽组合以便跨膜转移到包括胞内靶蛋白。这类肽序列可以包 括，但不限于，tat，触角足（antennapedia)，poly_args，一些抗微生物肽。这类肽允许转移 穿膜，包括细胞质膜，以及上皮和内皮膜，包括血脑屏障，肠粘膜，脑膜，等等。
[0116] 这类肽还可以使细胞信号转导抑制剂进入细胞，所述抑制剂包括抗NgR信号转导 分子的抗体或小分子，包括R0CK、小GTPases、肌动蛋白和髓磷脂稳定剂。
[0117] 本申请的抗体或抗体部分还可以与用于治疗如上面段落所述病症（所述病症涉 及NgR活性）的一个或多个其他小分子治疗剂一起施用。应理解本申请的抗体或其抗原 结合部分可以单独使用或与其他试剂（例如治疗剂）联用，所述其他试剂由技术人员根据 其预期目的进行选择。例如，其他试剂可以是本领域公认的有利于治疗本发明抗体所治疗 疾病或病症的治疗剂。所述额外的试剂还可以是赋予治疗组合物有利特性的试剂，例如， 影响组合物粘性的试剂。优选的组合可以包括，但不限于，抗精神病剂诸如，但不限于维思 通、奥氮平、Quetiapine、吩噻嗪类（氯丙嗪、氟奋乃静、左美丙嗪、氰噻嗪、奋乃静、丙氯拉 嗪、丙嗪、硫利哒嗪、三氟拉嗪）、丁酰苯类（二苯哌丙林、氟哌啶醇）、苯噻庚乙胺、洛沙平、 Aripiprazole、Sertoline、齐拉西酮、Rho激酶活性（ROCK)的小分子抑制剂，包括化合物例 如法舒地尔（fasudil)，二甲基法舒地尔（dimethylfasudil)或任意其他的ROCK抑制剂，抗 GABAA受体或促代谢型谷氨酸受体（mGluRs)的小受体配体，非留体抗炎药物（NSAIDS)，抗 炎皮质类固醇诸如甲基强的松龙。
[0118] 本发_的药物组合物
[0119] 可以将本申请的抗体和抗体部分掺入适于给个体施用的药物组合物。本申请的药 物组合物可以包括"治疗有效量"或"预防有效量"的本发明的抗体或抗体部分。"治疗有效 量"是指能够有效的在剂量方面和一段时间内实现所需治疗结果必需的量。抗体或抗体部 分的治疗有效量可以由本领域技术人员确定，其将根据各种因素而变化：诸如疾病状况、个 体的年龄、性别和体重，及所述抗体或抗体部分在个体中引发所需应答的能力。治疗有效量 还表示抗体或抗体部分的治疗有益作用超过任何毒性或不利作用。"预防有效量"是指能够 有效的在剂量方面和一段时间内实现所需预防结果必需的量。通常，因为预防剂量是在患 病前或疾病早期用于个体，所以预防有效量将低于治疗有效量。
[0120] 通常，药物组合物包括本发明的抗体或抗体部分及药学上可接受的载体。本文使 用的"药学上可接受的载体"包括生理上相容的任何及所有溶剂，分散介质，包衣、抗细菌和 抗真菌剂，等渗剂和吸收延迟剂，等等。药学上可接受载体的实例包括以下一种或多种：水， 盐水，磷酸盐缓冲液，葡萄糖，甘油，乙醇等等，及其组合。多数情况下，优选在组合物中包括 等渗剂，例如，糖，多元醇（诸如甘露醇，山梨糖醇），或氯化钠。药学上有效的载体可以进一 步包括少量辅助物质诸如湿润剂或乳化剂，防腐剂或缓冲液，其增强抗体或抗体部分的保 存期限或有效性。
[0121] 本申请的组合物可以采用各种形式。这些形式包括，例如，液体、半固体和固体剂 型，诸如液体溶液（例如，可注射的和不溶解的溶液），分散剂或悬液，片剂，丸剂，粉剂，月旨 质体和栓剂。优选的形式取决于预期的施用方式和治疗应用。一般优选的组合物采用可注 射或不溶解溶液的形式，诸如类似于那些利用其他抗体被动免疫人的组合物。优选的施用 模式是肠胃外的（例如，静脉内，皮下，腹腔内，肌内）。在一种优选的实施方案中，通过静脉 内输注或注射施用抗体。在另一个优选的实施方案中，通过肌内或皮下注射施用抗体。另 一个优选的实施方案包括抗体的鞘内施用。
[0122] 在制备和保存条件下，治疗组合物通常必须是无菌和稳定的。可以将组合物配制 为溶液，微乳剂，分散剂，脂质体，或其他适于高药物浓度的有序结构。根据需要，将所需量 的活性化合物（即，抗体或抗体部分）与上面所列成分中的一种或者组合掺入合适的溶剂， 继之以过滤灭菌，可以制备无菌注射溶液。通常，通过将活性化合物掺入无菌赋形剂来制备 分散剂，所述赋形剂包含碱性分散介质和来自那些上面列举的所需其他成分。就用于制备 无菌注射溶液的无菌冻干粉剂来说，优选的制备方法是真空干燥和喷雾干燥，这从先前其 无菌滤液产生活性成分以及任意其他所需成分的粉剂。例如，通过使用包衣诸如卵磷脂，就 分散剂来说通过维持需要的粒径以及通过使用表怖活性剂，可以维持溶液适当的流动性。 通过在组合物中包括延缓吸收的试剂（例如，单硬脂酸盐和明胶），可以实现注射组合物的 延长吸收。
[0123] 可以通过本领域已知的各种方法施用本申请的抗体和抗体部分，尽管对于许多治 疗应用来说，优选的施用途径/模式是皮下注射、静脉注射或输注。技术人员将理解，施用 途径和/或模式将根据预期结果而改变。在某些实施方案中，可以将避免化合物快速释放 的载体（诸如控释剂，包括植入物、透皮片和微包埋输送系统）与活性化合物一起制备。可 以使用可生物降解、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯，聚酐，聚乙醇酸，胶原，聚正 酯，和聚乳酸。制备这类制剂的许多方法是获得专利的，并为本领域技术人员公知。参见，例 如，Robinson，ed.,SustainedandControlledReleaseDrugDeliverySystems,Marcel Dekker，Inc.，NewYork，1978。
[0124] 在某些实施方案中，本申请的抗体或抗体部分可以与例如惰性稀释剂或可吸收的 可食载体口服施用。还可以将化合物（如果需要，和其他成分）装入硬壳或软壳胶囊，压成 片剂，或直接掺入个体的食物。对于口服治疗性施用来说，化合物可以与赋形剂混合，并以 可吸收片剂、口含片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬液、糖浆、薄片等等形式使用。为了通过肠胃外 施用以外的途径施用本发明的化合物，可能必须用防止其灭活的材料包裹所述化合物，或 将所述化合物与防止其灭活的材料共施用。
【具体实施方式】
[0125] 本申请将通过下列实施例进一步阐述，总之其目的只在于说明本申请而非限制其 范围。
[0126] 实施例1.抗体的产牛。
[0127] 分别用重组的人和大鼠NgR蛋白（SEQIDNO:1a和SEQIDNO:2a)免疫A/ J小鼠（TheJacksonLaboratories，BarHarborMe)。用 50ug重组人或大鼠NgR蛋白 皮下免疫小鼠4次，第一次注射NgR蛋白溶于弗氏完全佐剂，后三次免疫NgR蛋白溶于 Immuneasy?(Qiagen)。在融合前4天，给小鼠静脉内注射10ug抗原。为了融合，利用Kohler 和Milstein的标准技术（KohlerGandMilsteinC;NatureVol.256,第 495-497 页 (1975)，将免疫动物的脾细胞与SP2/0-Agl4骨髓瘤细胞按5 : 1比例融合。融合后7到10 天，当观察到肉眼可见的杂交瘤菌落时；透过过ELISA分析法检测上清。在4°C将溶于PBS 的lug/ml重组人或大鼠NgR蛋白包被ELISA板过夜，并在室温下封闭1小时。温育稀释上 清，利用山羊抗小鼠IgFc-HRP偶联物检测结合。将在ELISA中产生抗体阳性的杂交瘤细胞 扩大规模培养，并通过有限稀释法亚克隆。利用ZymedEIA分型试剂盒确定抗体的同种型。
[0128] 已经建立不同的ELISA形式，它们通常被用作鉴定结合人、大鼠或小鼠NgR的抗体 的头道筛选。然后对ELISA分析法中有反应的抗体进行检测，检验其结合稳定表达重组人 NgR或重组大鼠NgR的HEK或CH0细胞，而不结合它们的未转染或对照细胞。对于ELISA形 式来说，制备可溶性受体（参见上文）。对于FACS研究来说，在重组细胞系中表达全长NgR 蛋白。
[0129] ELISA结合和FACS分析中Mab50SEQIDN0:3 和SEQIDN0:4 和Mab51SEQID NO:5和SEQIDNO:6的结果显示于表2。
[0130] 表2.Mab50和Mab51结合特件的概沭
[0131]
[0132] 利用相同的实验方案获得其他抗体Mab1，Mab52,Mab53,Mab54,Mab55,Mab 56,Mab57,Mab58,Mab59,Mab60,Mab61 和Mab62。
[0133] 实施例2.通讨ELISA测宙抗体特异件和结合亲和力。
[0134] 为了测定实施例1产生的单克隆抗体的特异性，利用NgR-Fc(包括人NgR的氨基 酸Met1到Ser447及人Fc片段的融合蛋白（R&DSystems))和大鼠NgR(SEQIDNO. 2a) 进行ELISA。将两种配体都固定到96孔微量酒定板（NuncMaxisorb;0. 2yg/孔）上。使 用溶于Tris-HCL，pH7. 2的2%牛血清白蛋白（BSA)(作为封闭试剂）在室温下作用2小 时。使用起始于10, 〇〇〇ng/ml浓度的单克隆抗体。利用辣根过氧化物酶（Sigma)标记的抗 小鼠二抗检测结合的抗体，并在标准条件下利用3,3'，5,5'-四甲基联苯胺底物（TMB， Pierce)显色。mAb50和mAb51特异性的结合人NgR。当利用0.2yg人NgR-Fc/孔时，对于 浓度低于20ng/ml的两种单克隆抗体来说均观察到50 %的结合（图1A)。在类似的实验中， mAb50和mAb51还特异性结合由大鼠NgR的氨基酸组成的多肽。当在96孔微量滴定板中利 用0. 2yg大鼠NgR/孔时，对于浓度低于20ng/ml的两种单克隆抗体来说均观察到50%的 结合（图1B)。本发明的剩余单克隆抗体（mABs)也结合人和大鼠NgR。由每种抗体获得的 信号差异表明结合亲和力的差异（参见表3)。
[0135] 表3.利用人或大鼠NgR的mAbsEC50值的概述
[0136]
[0137] 实施例3?利用斑点￡口迹和Western ￡口迹表征与可溶性人和大鼠NgR结合的抗体。
[0138] 对于斑点印迹来说，将2y1溶于TTBS缓冲液的不同浓度的蛋白点在干硝酸纤维 素膜上。对于Western印迹来说，将滤纸和硝酸纤维素在含20%甲醇的Novex转移缓冲液 中浸泡10分钟。在Novex室中室温恒定电流（100mA)条件下2小时实现印迹。
[0139] 毎个样点添加蛋白的量为:
[0140] a) 100ug/ml~200ng/样点
[0141] b) 50ug/ml~100ng/样点
[0142] c) 10yg/ml~20ng/样点
[0143] d) 5yg/ml~10ng/样点
[0144] e)1yg/ml~2ng/样点
[0145] f) 500ng/ml~lng/样点
[0146] 在探针点样后，开始免疫检测步骤前先将膜在室温下干燥10分钟。
[0147] 所有被检测的单克隆抗体都结合人和大鼠NgR。由不同抗体获得的信号之间的差 异表明结合亲和力的差异。（在我们利用硝酸纤维素膜检测的条件下，MAB61在印迹中没有 显示高背景。）结合是抗体依赖性的，因为去除针对NgR的抗体后"对照"不显示任意信号。
[0148] 单克隆抗体与Western印迹上变性NgR的反应不同。只有MAB1对人及大鼠NgR 显示突出的信号。作为抗体结合能力的对照，在将蛋白从SDS凝胶转移后，将包含非变性人 NgR和非变性大鼠NgR的斑点点样在硝酸纤维素膜上。这些斑点用作证明全部单克隆抗体 与相同硝酸纤维素膜上非变性蛋白结合的阳性对照。结果概述于表4。
[0149] 表4.斑点￡口迹和Western ￡口迹分析。
[0150]
[0151] +++ :非常强的信号；++ :强的信号；+ :有信号；
[0152] _ :无信号；~：无相关信号.
[0153] 实施例4.AP_N〇g〇66结合可溶件人N〇g〇夸体（hNgR-Fc)的竞争
[0154] 为进一步表征单克隆抗体，使用类似于实施例2的结合分析法的竞争分析法来检 测实施例1中产生的mAbs抑制AP-N〇g〇66结合人NgR-Fc的能力。将溶于50mM碳酸钠缓 冲液pH9的NgR-Fc(0? 2ig/孔）在96孔微量滴定板（NuncMaxisorb)中4°C固定过夜， 然后用溶于Tris-HCL，pH7. 2的2%BSA在室温下封闭2小时。向所述孔中添加浓度恒定 的AP-Nogo66 (终浓度 0. 15nM，溶