一种淡水鱼小清蛋白过敏原抑制剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种淡水鱼小清蛋白过敏原抑制剂，其成分是经过标记与化学修饰的化学合成的双链小RNA分子，其中：双链小RNA分子的正向序列为：5′-UACAGUACUGUGAUAACUGAAG-3′，双链小RNA分子的反向序列为：5′-CsUsUCAGUUAUCACAGUACUsGsUsAs-Chol3′，反向序列进行以下化学修饰：3′端胆固醇修饰，5′端两个硫代修饰，3′端4个硫代修饰，反向序列全碱基甲基化修饰。本发明的突出优点是人工合成了降低淡水鱼肌肉主要过敏原的新型小RNA化合物，制作的抑制剂能够明显抑制PVALB表达，同时在使用后鱼肉质不受影响。
【专利说明】一种淡水鱼小清蛋白过敏原抑制剂
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种新颖的具有抑制肌肉小清蛋白表达的化学合成剂，其能降低淡水鱼肌肉中主要过敏原--小清蛋白含量。
【背景技术】
[0002]过敏性疾病被世界卫生组织认定为当前世界性的重大卫生学问题之一。鱼类是常见的食物过敏原。小清蛋白(Parvalbumin, PVALB)是一种高亲和力的钙结合蛋白，在快速收缩-舒张肌纤维中表达量高，且能耐高温、极端PH和变性剂。国内外近年研究表明鲤鱼、鲑鱼和鳕鱼等鱼类中主要过敏原都是小清蛋白，且小清蛋白作为过敏原在鱼类中存在着交叉反应，小清蛋白已确定是鱼类的主要泛变应原。由于在高温和蛋白酶作用下的高稳定性，在高温下烹煮和接触胃肠道酶后，仍能使易感人群过敏，因此降低鱼类肌肉中小清蛋白的含量对于预防食物 过敏和生产低致敏性产品具有重要意义。
[0003]随着鱼类及其加工产品消费的增长，相应的食物过敏现象也将日益增加。因此食品制造商和监管机构正在寻求技术来检测日常饮食中主要的过敏原和治疗方法。在最近的关于治疗鱼类过敏研究中，低过敏性鲤鱼小清蛋白突变体方法获得了一定疗效，但此类治疗鱼类过敏的免疫疗法不仅花费较高、治疗繁琐，而且无法从源头上截断过敏原。
【发明内容】
[0004]针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种淡水鱼小清蛋白过敏原抑制剂，进而提供一种降低鱼类食用过敏的新途径。本发明通过化学合成一对特异抑制鱼类小清蛋白表达的核苷酸短链，从降低肌肉小清蛋白含量方面来减少食用鱼类过敏现象，既为消费者安全食用低致敏性鱼类产品提供新方法，也为保持我国淡水鱼类高效健康养殖持续发展奠定基础解决了上述【背景技术】中的问题。
[0005]一种淡水鱼小清蛋白过敏原抑制剂，其成分是经过标记与化学修饰的化学合成的双链小RNA分子，其中:
双链小RNA分子的正向序列为:5' -UACAGUACUGUGAUAACUGAAG-3'，
双链小 RNA 分子的反向序列为:5' -CsUsUCAGUUAUCACAGUACUsGsUsAs-ChoU'， 反向序列进行以下化学修饰:
3'端胆固醇修饰，5'端两个硫代修饰，3'端4个硫代修饰，反向序列全碱基甲基化修饰。
[0006]与现有技术相比，本发明的有益效果是:
(I)本发明是综合运用分子生物学、动物营养学和化学合成原理，对淡水鱼主要过敏原深入研究基础上，研究开发的具有闻效、稳定等特点的过敏原抑制剂。
[0007](2)本发明生产工艺成熟、产品质量稳定、价格合理、核心技术先进和经济效益显著，是目前比较理想的鱼类过敏原抑制剂，具有广阔的市场前景。
[0008](3)本发明的突出优点是人工合成了抑制鱼类过敏原的新型小RNA化合物，制作的抑制剂能够明显抑制表达小清蛋白，降低鱼类肌肉中小清蛋白的含量，同时在使用抑制剂后鱼类肉质不受影响。
【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1为本发明淡水鱼小清蛋白过敏原抑制剂对鲤鱼肌肉小清蛋白表达的影响(n=5)的柱形图。 [0010]图2为本发明淡水鱼小清蛋白过敏原抑制剂对草鱼肌肉小清蛋白表达的影响(n=5)的柱形图。
【具体实施方式】
[0011]为了使本发明的技术手段、创作特征、工作流程、使用方法达成目的与功效易于明白了解，下面进一步阐述本发明。
[0012]实施例1
本发明淡水鱼小清蛋白过敏原抑制剂对鲤鱼肌肉小清蛋白表达的影响:
通过鲤鱼肌肉局部注射的方式，发挥小清蛋白过敏原抑制剂在降低肌肉中小清蛋白的作用。以不注射任何试剂为阴性对照组，以注射PBS (磷酸盐缓冲液)为阳性对照组，以注射小清蛋白过敏原抑制剂为试验组，试验组注射剂量为20μ g/g体重，连续注射三天，每天一次，注射完成后一周取鲤鱼背部肌肉，并对小清蛋白表达定量分析，具体结果如图1所示:注射小清蛋白过敏原抑制剂的试验组鲤鱼肌肉小清蛋白表达量比阳性和阴性对照组显著降低；阳性和阴性对照组鲤鱼小清蛋白表达量差异不显著。因此注射小清蛋白过敏原抑制剂能降低鲤鱼肌肉小清蛋白表达量。
[0013]实施例2
本发明淡水鱼小清蛋白过敏原抑制剂对草鱼肌肉小清蛋白表达的影响:
实验分组如实施例1，实验一周后，取草鱼背部肌肉对小清蛋白表达定量分析，具体结果如图2:注射小清蛋白过敏原抑制剂的试验组草鱼肌肉小清蛋白表达量比阳性和阴性对照组显著降低；阳性和阴性对照组草鱼小清蛋白表达量差异不显著。因此注射小清蛋白过敏原抑制剂能降低草鱼肌肉小清蛋白表达量。
[0014]实施例3
小清蛋白过敏原抑制剂对草鱼肉质指标的影响
实验分组如实施例2，实验一周后，取五组草鱼背部肌肉进行指标测量，与两对照组相比，注射小清蛋白过敏原抑制剂的试验组肌肉营养成分差异不显著，具体请参见表1。
[0015]表1小清蛋白过敏原抑制剂对草鱼肌肉营养成分的影响(平均值土标准差)n=5
【权利要求】
1.一种淡水鱼小清蛋白过敏原抑制剂，其特征在于，其成分是经过标记与化学修饰的化学合成的双链小RNA分子，其中: 双链小RNA分子的正向序列为:5' -UACAGUACUGUGAUAACUGAAG-3'， 双链小 RNA 分子的反向序列为:5' -CsUsUCAGUUAUCACAGUACUsGsUsAs-ChoU'， 反向序列进行以下化学修饰: 3'端胆固醇修饰，5'端两个硫代修饰，3'端4个硫代修饰，反向序列全碱基甲基化修饰。
【文档编号】A23K1/16GK103931936SQ201410139704
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年4月9日 优先权日:2014年4月9日
【发明者】褚武英, 张建社, 朱鑫, 李玉珑 申请人:长沙学院