1.Alb-uPA-TetOn慢病毒载体,其特征在于:所述Alb-uPA-TetOn慢病毒载体含有反向连接的白蛋白启动子PAlb和尿激酶型纤溶酶原激活剂基因uPA,所述白蛋白启动子PAlb调控四环素反式激活子rtTA表达,所述尿激酶型纤溶酶原激活剂基因uPA由PTight启动子调控表达;
所述白蛋白启动子PAlb的核苷酸序列如SEQ ID NO.34所示;所述尿激酶型纤溶酶原激活剂基因uPA的核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示;所述四环素反式激活子rtTA的核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示;所述PTight启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示。
2.根据权利要求1所述Alb-uPA-TetOn慢病毒载体,其特征在于:所述Alb-uPA-TetOn慢病毒载体的白蛋白启动子PAlb和PTight启动子的5端连接有绝缘子。
3.根据权利要求1所述Alb-uPA-TetOn慢病毒载体,其特征在于:终止尿激酶型纤溶酶原激活剂基因uPA表达的终止子为兔β球蛋白PolyA,终止四环素反式激活子rtTA表达的终止子为牛生长激素基因polyA。
4.根据权利要求1所述Alb-uPA-TetOn慢病毒载体,其特征在于:所述白蛋白启动子PAlb的5‘端还连接有小鼠白蛋白增强子。
5.根据权利要求2所述Alb-uPA-TetOn慢病毒载体,其特征在于:所述Alb-uPA-TetOn慢病毒载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示。
6.权利要求1~5任一项所述Alb-uPA-TetOn慢病毒载体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将克隆尿激酶型纤溶蛋白酶基因uPA、兔β球蛋白PolyA和牛生长激素基因polyA通过SLIC技术连接到经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切的pTRE Tight质粒上,得到1969-pTRE-uPA-PA过渡载体;
(2)将白蛋白启动子Alb和四环素反式激活子rtTA通过SLIC技术连接到经内切酶AscI酶切的1969-pTRE-uPA-PA过度载体上,得1969-PTRE-uPA-rTTA-Alb过度载体;
(4)将1969-PTRE-uPA-rTTA-Alb过度载体经Xhol和Sacll酶切后回收5549bp片段,然后将回收产物与带Xhol和Sacll酶切粘性末端的绝缘子连接,即得Alb-uPA-TetOn慢病毒载体。
7.根据权利要求5所述Alb-uPA-TetOn慢病毒载体的制备方法,其特征在于:尿激酶型纤溶蛋白酶基因uPA的克隆方法如下:以PAlb-uPA慢病毒载体为模板,SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列为引物进行扩增获得;
兔β球蛋白PolyA克隆方法如下:以PAlb-uPA慢病毒载体为模板,SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示序列为引物进行扩增获得;
牛生长激素基因polyA克隆方法如下:以PAlb-uPA慢病毒载体为模板,SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示序列为引物进行扩增获得;
白蛋白启动子Alb克隆方法如下:以PAlb-uPA慢病毒载体为模板,SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示序列为引物进行扩增获得;
四环素反式激活子rtTA克隆方法如下:以PAlb-uPA慢病毒载体为模板,SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示序列为引物进行扩增获得。
8.权利要求1~5任一项所述Alb-uPA-TetOn慢病毒载体在制备转基因小鼠中的应用。
9.权利要求1~5任一项所述Alb-uPA-TetOn慢病毒载体在制备尿激酶型纤溶蛋白酶小鼠肝损伤模型中的应用。