专利名称：一种快速的基因表达载体构建连接方法
技术领域：
本发明涉及生物基因克隆表达技术，具体是一种快速的基因表达载体构建连接方法。
背景技术：
目前，较常 用的基因表达载体构建方法的步骤为(1)酶切基因酶切体系I:含有目的基因的T克隆载体经限制性内切酶消化，酶切体系II :转基因载体经限制性内切酶消化；以含有双酶切EcoR I与xho I位点的T克隆载体及植物转基因载体为例，
酶切体系I如下
权利要求
1.一种快速的基因表达载体构建连接方法，其步骤为(I)酶切基因酶切体系I :含有目的基因的T克隆载体经限制性内切酶消化，酶切体系II :转基因载体经限制性内切酶消化；(2)回收获得目的基因片段及酶切载体；(3)酶切产物的连接；(4)连接产物的转化；(5)转化产物的鉴定；其特征在于，所述的步骤(2)回收获得目的基因片段及酶切载体的步骤为步骤(I)的酶切体系I、II中分别加入体积为酶切体系I、II 3 5倍的无水乙醇，均在-20 _80°C环境下放置0. 5 lh，随后12000 13000rpm离心沉淀5 lOmin，弃上清，真空干燥，加入20W-30W的pH8. 0的TE缓冲液重新溶解，分别电泳检测目的基因片段及酶切载体浓度。
2.根据权利要求I所述的快速的基因表达载体构建连接方法，其特征在于，所述的步骤(I)中有含目的基因的T克隆载体具有氨苄霉素抗性，所述的转基因载体具有卡纳霉素抗性。
全文摘要
本发明涉及生物基因克隆表达技术，具体是一种快速的基因表达载体构建连接方法，弥补了现有的基因表达载体构建方法存在的缺陷，其步骤为(1)酶切基因酶切体系Ⅰ含有目的基因的T克隆载体经限制性内切酶消化，酶切体系Ⅱ转基因载体经限制性内切酶消化；(2)回收获得目的基因片段及酶切载体；(3)酶切产物的连接；(4)连接产物的转化；(5)转化产物的鉴定。本发明所述的快速的基因表达载体构建连接方法简单方便、实用性强，替换了凝胶电泳、EB染色等步骤，提高了科研人员的安全性，提高了工作效率，减少了试验环节所需费用，并能够有效地减少试验用EB对水资源等环境的污染。
文档编号C12N15/66GK102776219SQ201210257058
公开日2012年11月14日 申请日期2012年7月24日 优先权日2012年7月24日
发明者吴霞, 李燕娥, 王霞, 马燕斌 申请人:山西省农业科学院棉花研究所