本发明涉及一类新型的溴结构域识别蛋白抑制剂及其制备方法和用途；本发明还涉及此类化合物在制备用于治疗由溴结构域识别蛋白介导的疾病的药物中的应用，具体涉及在制备治疗血液性恶性肿瘤，中线癌以及炎症等疾病药物中的应用。
背景技术：
在1964年，allfey等人发现赖氨酸乙酰化可作为一种蛋白翻译后修饰(ptm)，且他们同时发现组蛋白的乙酰化和甲基化以及提出这些翻译后修饰调控rna合成。组蛋白乙酰化使组蛋白特定的赖氨酸的ε-氨基上的正电荷被中和，导致带有负电荷的dna与组蛋白结合变弱，染色质的结构变得松弛，这个松弛状态使得聚合酶、转录因子以及其它转录相关的复合物接近dna从而导致基因转录激活。因此组蛋白的乙酰化可以激活特定基因转录表达的过程，组蛋白去乙酰化跟组蛋白乙酰化作用相反，所以可以导致特定基因表达沉默。溴结构域蛋白(bromodomain，brds)可以识别组蛋白末端乙酰化的赖氨酸残基，它的作用机制是能够募集蛋白复合物进而影响转录过程。在人类基因组的46种不同的蛋白上发现61种溴结构域，可以分为八大家族(如图1所示)，其中，目前对bet(bromo-andextra-terminal)家族的研究较多。
bet家族包括广泛表达的brd2、brd3、brd4和在睾丸中特异性表达的brdt。
bet家族主要功能是招募转录调节复合物到乙酰化的染色质上，从而控制涉及细胞增殖和细胞周期进展的特定的基因网络。例如brd4和brdt可以调控转录延长，主要是通过与正转录延伸因子(p-tefb)作用，导致rna聚合酶ⅱ激活。bet家族蛋白失调与很多疾病相关，如癌症，炎症等，这使得bet蛋白成为一个有吸引力的药物靶标。
在2010年，人们发现了两个bet家族选择性抑制剂(+)-jq1(参见filippakopoulos,p.；qi,j.；picaud,s.；shen,y.；smith,w.b.；fedorov,o.；morse,e.m.；keates,t.；hickman,t.t.；felletar,i.；philpott,m.；munro,s.；mckeown,m.r.；wang,y.；christie,a.l.；west,n.；cameron,m.j.；schwartz,b.；heightman,t.d.；lathangue,n.；french,c.a.；wiest,o.；kung,a.l.；knapp,s.；bradner,j.e.selectiveinhibitionofbetbromodomains.nature2010,468,1067-1073.)和i-bet762(参见nicodeme,e.；jeffrey,k.l.；schaefer,u.；beinke,s.；dewell,s.；chung,c.；chandwani,r.；marazzi,i.；wilson,p.；coste,h.；white,j.；kirilovsky,j.；rice,c.m.；lora,j.m.；prinjha,r.k.；lee,k.；tarakhovsky,a.suppressionofinflammationbyasynthetichistonemimic.nature2010,468,1119-1123.)(结构式如下)，从而引起人们对溴结构域抑制剂的广泛关注。随着研究人员的不断努力，越来越多bet家族选择性抑制剂被发现而且近几年对非bet家族的溴结构域蛋白的抑制剂研究越来越多，这些溴结构域蛋白抑制剂可以帮助更好地了解蛋白的功能以及它相关的疾病。
近几年也有人在研究激酶-溴结构域识别蛋白的双重抑制剂，而且brd4显示出非典型激酶的性质，即可以使rna聚合酶ⅱc端丝氨酸2位磷酸化。其中plk1抑制剂bi2536以及jak2抑制剂tg101209对brd4有很好的活性，ic50分别是25nm和130nm。这些早期发现可以让人们从激酶抑制剂中合理设计激酶-溴结构域识别蛋白的双重抑制剂或者选择性溴结构域识别蛋白抑制剂，其中选择性抑制剂可以减少脱靶的副作用。
技术实现要素：
本发明的发明人从激酶-溴结构域识别蛋白的双重抑制剂来合理设计、合成和研究选择性的溴结构域识别蛋白抑制剂。发明人通过晶体结构(pdbid：4o74)详细分析获得了下述重要信息：其中区域1中内酰胺结构是与brd4kac口袋中asn140形成关键的氢键作用，区域2中两个氮原子与激酶的绞链区形成关键的氢键作用(图2a)；其中的苯基酰胺结构及其连接的基团伸出结合口袋，并未进入brd4结合位点的wpf亚结合位点(图2b)。我们通过对结构的分析，保留了与brd4形成关键氢键作用的内酰胺结构而替换与激酶的绞链区形成关键的氢键作用的n原子为c原子。从而合成了一系列本申请所述的化合物并测试了化合物的活性。测试结果表明化合物具有非常高的brd4靶点结合活性和brd4敏感细胞的生长抑制活性。发明人通过晶体实验以及复合物结构解析，也获得了本申请中的化合物的独特作用模式：化合物出人意料地进入了wpf亚结合位点，具有迥然不同的结合模式，解析的晶体结构如图2c所示。
因此，本发明的一个目的在于提供一类结构新颖的溴结构域识别蛋白抑制剂，即由通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物和晶型，其可用于治疗、预防和抑制由溴结构域识别蛋白介导的相关疾病；
本发明的另一目的在于提供一种制备通式(i)表示的化合物的方法；
本发明的还一目的在于提供一种含有由通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物或晶型的药物组合物；
本发明的又一目的在于提供所述的由通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物或晶型的用途；所述的由通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物或晶型为作用于溴结构域识别蛋白的选择性抑制剂，其能对溴结构域识别蛋白识别赖氨酸乙酰化的作用进行抑制。
本发明的再一目的在于提供了由通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物或晶型用于制备治疗血液性恶性肿瘤，中线癌以及炎症等疾病的药物的用途。
本发明提供一种如通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物和晶型：
其中：
x为c或者n；
r1为氢原子、取代或未取代的c1-c20直链或支链烷基、取代或未取代的c1-c20直链或支链烷氧基、取代或未取代的c3-c10环烷基，所述取代基为卤素、羟基、氨基、硝基、氰基；
r2为取代或未取代的c1-c20直链或支链烷基、取代或未取代的c1-c20直链或支链烷氧基、取代或未取代的c3-c10环烷基，所述取代基为卤素、羟基、氨基、硝基、氰基，r2的构型可以是r型或者s型或者消旋体；
r3为取代或未取代的c1-c20直链或支链烷基、取代或未取代的c1-c20直链或支链烷氧基、取代或未取代的c3-c10环烷基、取代或未取代的苄基，所述取代基独立地选自如下基团：卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、含有1-3个选自n、o和s的杂原子的5-7元杂环基、c1-c3直链或支链烷基或者c1-c3直链或支链烷氧基；
l为
r4为c1-c20直链或支链烷基，卤素取代的c1-c20直链或支链烷基，取代或未取代的c3-c10环烷基，取代或未取代的c3-c10环烷基并取代或未取代c6-c20芳香环，取代或未取代的c6-c20芳基，取代或未取代的c6-c12芳基c1-c6烷基，取代或未取代的含有1-3个选自n、o和s的杂原子的5-10元杂环基或杂芳基，取代或未取代的含有1-3个选自n、o和s的杂原子的5-10元杂环基或杂芳基并取代或未取代的c6-c12芳基，所述取代基独立地选自如下1-4个基团：卤素、羟基、氨基、硝基、氰基、c1-c6直链或支链烷基或者c1-c6直链或支链烷氧基，或者
当l为
优选地：
x为c或者n；
r1为氢原子，c1-c6直链或支链烷基或者卤素取代的c1-c6直链或支链烷基；
r2为c1-c6直链或支链烷基或者卤素取代的c1-c6直链或支链烷基，r2的构型可以是r型或者s型或者消旋体；
r3为取代或未取代的c1-c6直链或支链烷基，取代或未取代的c3-c8环烷基，取代或未取代的苄基，所述取代基独立地选自如下1-5个基团：卤素、羟基、含有1-3个选自n、o和s的杂原子的5-7元杂环基、c1-c3直链或支链烷基或者c1-c3直链或支链烷氧基；
l为
r4为c1-c6直链或支链烷基，卤素取代的c1-c6直链或支链烷基，取代或未取代的c3-c8环烷基，取代或未取代的c3-c8环烷基并取代或未取代c6-c12芳香环，取代或未取代的c6-c12芳基，取代或未取代的c6-c12芳基c1-c4烷基，取代或未取代的含有1-3个选自n、o和s的杂原子的5-10元杂环基或杂芳基，取代或未取代的含有1-3个选自n、o和s的杂原子的5-10元杂环基或杂芳基并取代或未取代的c6-c10芳基，所述取代基独立地选自如下1-4个基团：卤素、羟基、c1-c3直链或支链烷基或者c1-c3直链或支链烷氧基，或者
当l为
优选地：
x为c或者n；
r1为氢原子或者c1-c3直链或支链烷基；
r2为c1-c6直链或支链烷基，r2的构型可以是r型或者s型或者消旋体；
r3为取代或未取代的c1-c6直链或支链烷基，取代或未取代的c3-c8环烷基，取代或未取代的苄基，所述取代基独立地选自如下1-4个基团：卤素、含有1-2个选自n和o的杂原子的5-7元杂环基、c1-c3直链或支链烷基或者c1-c3直链或支链烷氧基；
l为
r4为取代或未取代的c3-c6环烷基，取代或未取代的c3-c6环烷基并取代或未取代c6-c12芳香环，取代或未取代的c6-c12芳基，取代或未取代的c6-c12芳基c1-c4烷基，取代或未取代的含有1-3个选自n、o和s的杂原子的5-6元杂环基或杂芳基，取代或未取代的含有1-3个选自n、o和s的杂原子的5-6元杂环基或杂芳基并取代或未取代的c6-c10芳基，所述取代基独立地选自如下1-3个基团：卤素、羟基、c1-c3直链或支链烷基或者c1-c3直链或支链烷氧基，或者
当l为
更优选地：
x为c或者n；
r1为氢原子，甲基或乙基；
r2为甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，r2的构型可以是r型或者s型或者消旋体；
r3为甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，环丙基，环丁基，环戊基，甲氧基乙基，含有1-2个选自n和o的杂原子的5-6元杂环基取代的c1-c3直链或者支链烷基(优选吗啉基乙基，四氢呋喃基甲基)，卤素或c1-c3烷氧基取代的苄基(优选br取代的苄基或甲氧基苄基)；
l为
r4为取代或未取代的c3-c6环烷基，取代或未取代的c3-c6环烷基并取代或未取代c6-c10芳香环，取代或未取代的c6-c12芳基，取代或未取代的c6-c12芳基c1-c3烷基，取代或未取代的含有1-2个选自n和o的杂原子的5-6元杂环基或杂芳基，取代或未取代的含有1-2个选自n和o的杂原子的5-6元杂环基或杂芳基并取代或未取代的c6-c10芳基，所述取代基独立地选自如下1-3个基团：卤素、c1-c3直链或支链烷基或者c1-c3直链或支链烷氧基；优选环戊基、环己基、甲基环己基、苯基、甲基苯基、氯苯基、氟苯基、甲氧基苯基、异恶唑基、1,2,4-三甲基吡唑-3-基、甲基苄基、2,4-二甲基苯基、3-氟-4-甲基苯基、2,4,6-三甲基苯基或嘧啶基，或者
当l为
优选地，当l为-ch2-时，r4包含n原子。
最优选地，所述化合物选自：
通式(i)所示的化合物可以含有不对称或手性中心，因此可以以不同立体异构体形式存在。本发明化合物的所有立体异构体形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们的混合物(如外消旋混合物)，均包括在本发明的范围内。
通式(i)所示的化合物还可以以不同互变异构形式存在，所有这些形式均包括在本发明范围内。术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指经由低能垒相互转化的不同能量的结构异构体。
通式(i)所示的化合物可以以非溶剂化形式和含有药学上可接受的溶剂(如水、乙醇等)的溶剂化形式存在，本发明的化合物包括溶剂化和非溶剂化形式。
通式(i)所示的化合物具有碱性基团，因此可与无机酸或有机酸形成药学上可接受的盐(即可药用盐)，包括可药用酸加成盐，通过用无机酸或有机酸处理通式(i)所示的化合物的游离碱，可以得到药学上可接受的盐，所述的无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸，所述的有机酸如抗坏血酸、烟酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、马来酸、丙二酸、富马酸、草酸、苹果酸、乙醇酸、琥珀酸、丙酸、乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等。
为了说明之用，下列所示的反应流程图提供用于合成本发明的化合物以及关键中间产物的可能途径。有关个别反应步骤的更详细的说明，请见后述的实施例部分。本发明通式(i)所示的化合物可以通过包括化学领域众所周知的那些方法来合成，尤其根据本发明的说明来合成。原料一般可以从商业来源如西格玛奥德里奇公司获得，或者使用本领域技术人员熟知的方法容易地制备。
在反应路线中的化合物包括其盐，例如，如具有通式(i)的化合物定义的盐类等，即用有机酸或无机酸处理化合物的游离碱的形式，得到相应化合物的盐。
上述具有结构通式(i)表示的化合物的制备方法包括，
反应路线一：
步骤a：化合物1a与氨基酸nh2r2cooh反应得到化合物1b；
步骤b：化合物1b在二水合二氯化锡的条件下反应得到化合物1c；
步骤c：化合物1c与r1i在氢化钠条件下反应得到化合物1d；
步骤d：化合物1d与磺酰胺r4so2nh2在烯丙基氯化钯二聚体、2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三异丙基联苯和碳酸钾的条件下通过偶联反应得到化合物1e；
步骤e：化合物1e与r5i在氢化钠条件下反应得到化合物1f。
反应路线二：
步骤a：化合物2a与伯胺r3nh2反应得到化合物2b；
步骤b：化合物2b在铁粉和氯化铵条件下反应得到化合物2c；
步骤c：1)化合物2c与不同的2-溴烷酰基溴
步骤d：化合物2d与r1i反应得到化合物2e；
步骤e：化合物2e与磺酰胺r4so2nh2在烯丙基氯化钯二聚体、2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三异丙基联苯和碳酸钾条件下通过偶联反应得到通式化合物2f；
步骤f：化合物2f与r5i在氢化钠条件下反应得到化合物2g；
或者，在步骤a-d之后，不进行步骤e和f，而是进行以下步骤：
步骤g：1)化合物2e与氨基甲酸叔丁酯在pd(oac)2、2-双环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯和碳酸铯的条件下通过偶联反应得到中间体，2)中间体在三氟醋酸作用下脱保护基得到化合物2h；
步骤h：化合物2h与不同的酰氯r4cocl反应得到化合物2i；
步骤i：化合物2i与r5i在氢化钠条件下反应得到化合物2j。
反应路线三：
步骤a：化合物3a与二氯亚砜和甲醇反应得到化合物3b；
步骤b：化合物3b与不同的伯胺r3nh2反应得到化合物3c；
步骤c：化合物3c在铁粉和氯化铵条件下反应得到化合物3d；
步骤d：1)化合物3d与不同的2-溴烷酰基溴
步骤e：化合物3e与r1i在氢化钠条件下反应得到化合物3f；
步骤f：化合物3f在氢氧化锂条件下通过水解反应得到化合物3g；
步骤g：化合物3g与胺r4r5nh通过缩合反应得到化合物3h。
反应路线四：
步骤a：化合物4a与2-溴烷酰基溴
步骤b：化合物4b与胺r3nh2反应得到化合物4c；
步骤c：化合物4c在n,n-二异丙基乙胺条件下通过分子内亲核反应得到化合物4d；
步骤d：化合物4d与r1i在氢化钠条件下反应得到化合物4e；
步骤e：化合物4e与磺酰胺r4so2nh2在烯丙基氯化钯二聚体、2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三异丙基联苯和碳酸钾通过偶联反应得到化合物4f；
步骤f：化合物4f与r5i在氢化钠条件下反应得到化合物4g；
或者，在步骤a-d之后，不进行步骤e和f，而是进行以下步骤：
步骤g：化合物4e与胺r4r5nh在三乙胺、4-二甲氨基吡啶、六羰基钼、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯和1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯条件下反应得到化合物4h；
或者，在步骤a-d之后，不进行步骤e和f或g，而是进行以下步骤：
步骤h：1)化合物4e与氨基甲酸叔丁酯在pd(oac)2、2-双环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯和碳酸铯的条件下通过偶联反应得到中间体，2)中间体在三氟醋酸作用下脱保护基得到化合物4i；
步骤i：化合物4i与酰氯r4cocl反应得到化合物4j；
步骤j：化合物4j与r5i在氢化钠条件下反应得到化合物4k，
在反应路线一至四中，r1-r4、l和x与上文中的限定相同。
反应路线五：
步骤a：化合物5a与胺r4h通过还原氨化反应得到化合物5b；
步骤b：化合物5b与不同的胺r3nh2反应得到化合物5c；
步骤c：化合物5c在二水合二氯化锡和浓盐酸条件下反应得到化合物5d；
步骤d：1)化合物5d与不同的2-溴烷酰基溴
步骤e：化合物5e与r1i在氢化钠条件下反应得到化合物5f。
在反应路线五中，r1-r4和x如上文所述，且r4包含n原子。
初步研究表明，以下的疾病、病症和/或障碍由溴结构域识别蛋白抑制剂所介导：血液学恶性肿瘤、中线癌以及炎症。
因此，本发明通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物和晶型适用于治疗由溴结构域识别蛋白抑制剂所介导的疾病、病况及/或机能失调。
本发明提供了一种治疗由溴结构域识别蛋白抑制剂所介导的疾病、病况及/或机能失调的方法，该方法包括向患者施用有效剂量的通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物和晶型。
本发明还提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、其可药用盐、前药、溶剂化物、水合物和晶型中的一种或多种，以及至少一种赋形剂、稀释剂或载剂。
进一步地，本发明通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物或晶型可用于单一治疗或联合治疗中。当用于联合治疗中时，本发明通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物和晶型通常与基于小分子化合物、辐射、抗体的疗法(例如赫塞汀和利妥希玛)抗癌接种、基因疗法、细胞疗法、激素疗法或细胞因子疗法一起使用。
典型的配方是通过混合本发明的通式(i)表示的化合物及载剂、稀释剂或赋形剂而制备之。适宜的载剂、稀释剂或赋形剂是本领域技术人员所熟知的，包括诸如碳水化合物、蜡、水溶性及/或可膨胀性聚合物、亲水性或疏水性物质、明胶、油、溶剂、水等的物质。所用的特定载剂、稀释剂或赋形剂，将依施用本发明的化合物的方式与目的而定。一般以本领域技术人员认为可安全(gras)地投药至一哺乳类动物的溶剂为基础，而选择溶剂。一般而言，安全的溶剂是无毒性含水溶剂诸如水，以及其他可溶于水或与水混溶的无毒性溶剂。适宜的含水溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(如peg400、peg300)等中的一种或多种的混合物。该配方也可包括一种或多种缓冲剂、安定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、增甜剂、香料剂、调味剂或其他已知的添加剂，以提供该药物之一优美的呈现形式(亦即本发明的化合物或其药学组合物)，或协助该药学产物(亦即药物)之制造。
该配方可使用常规的溶解混合程序而制备。例如，在上述的一种或多种赋形剂的之存在下，将块状的药物物质(亦即本发明的通式(i)表示的化合物或该化合物的稳定化形式(如与一环糊精衍生物或其他已知的复合剂的络合物)溶于一适宜溶剂中。典型地将本发明的通式(i)表示的化合物配制成药学剂型，以提供该药物的容易控制的剂量，及提供患者一种容易处理的产物。
依据本发明的方法，本发明的一种化合物或本发明的一种化合物与至少一种其他药剂的组合(在此称作“组合”)，优选是以药学组合物的形式投药。因此，本发明的化合物或组合能以任一已知的口服、直肠、透皮、胃肠外(例如静脉内、肌内或皮下)脑池内、阴道内、腹膜内、膀胱内、局部(例如粉末、油膏或液滴)、颊或鼻剂型，而分开或一起投药至一病患。
适用于非经肠注射的组合物，一般包括药学上可接受的无菌含水或非水溶液、分散液、悬浮液或乳化液，及用于重组成为无菌的可注射性溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水或非水载剂或稀释剂(包括溶剂与载体)，包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)中的一种或多种的混合物；植物油(诸如橄榄油)；及可注射性有机酯诸如油酸乙酯。例如可通过使用一涂层诸如卵磷脂，在分散液的情况下，维持所需的颗粒尺寸，或通过使用表面活性剂，维持适宜的流动性。
这些组成物亦可含有赋形剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂及分散剂。可通过各种的杀细菌剂与杀真菌剂，例如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等，而避免微生物污染该组合物。这些组成物亦可包括等渗压剂诸如糖类、氯化钠等。还可通过使用能延迟吸收的药剂，诸如单硬脂酸铝与明胶，而延长可注射式药学组合物之吸收。
用于口服投药的固态剂型可包括胶囊、片剂、粉末及颗粒。在固态剂型中，本发明的化合物或组合是与至少一种惰性赋形剂、稀释剂或载剂混合。适宜的赋形剂、稀释剂或载剂包括诸如柠檬酸钠或磷酸二钙的物质，或(a)填料或增量剂(如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖醇、硅酸等)；(b)粘合剂(如羧甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖、阿拉伯胶等)；(c)湿润剂(如甘油等)；(d)崩解剂(如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、特定的络合硅酸盐、碳酸钠等)；(e)溶液阻滞剂(如石蜡等)；(f)加速吸收剂(如季铵化合物等)；(g)润湿剂(如乙酰基醇、单硬脂酸甘油酯等)；(h)吸附剂(如高岭土、膨润土等)；及/或i)润滑剂(如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固态聚乙二醇、月桂基硫酸钠等)。在胶囊与片剂的情况下，该剂型亦可包括缓冲剂。类似类型的固态组合物亦可作为软式与硬式填充明胶胶囊中的填料，其使用乳糖以及高分子量聚乙二醇等作为赋形剂。
用于口服投药的液态剂型包括药学上可接受的乳化液、溶液、悬浮液、糖浆液与酏剂。除了本发明的化合物或其组合物之外，该液态剂型可含有本领域中常用的惰性稀释剂，诸如水或其他溶剂；增溶剂及乳化剂诸如乙醇、异丙基醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄基酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺；油类(如棉籽油、落花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油等)；甘油；四氢糠基醇；聚乙二醇与脱水山梨糖醇的脂肪酸酯；或这些物质中的几种的混合物等。
除了这些惰性稀释剂之外，该组合物也可包括赋形剂，诸如润湿剂、乳化剂、悬浮剂、增甜剂、调味剂与香料剂中的一种或多种。
就悬浮液而言，除了本发明的化合物或组合之外，可进一步含有载剂诸如悬浮剂，如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醣醇、脱水山梨醣醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂及黄耆胶，或这些物质中几种的混合物等。
用于直肠或阴道投药之组合物优选包括栓剂，可通过将本发明的化合物或组合与适宜的非刺激性赋形剂或载剂混合而制备，赋形剂或载剂诸如可可豆脂、聚乙二醇或栓剂蜡，其在一般室温为固态而在体温为液态，及因此可在直肠或阴道中熔化而释出活性化合物。
本发明化合物和本发明化合物与血液性癌症或者炎症药物的组合用于局部投药之剂型，可包括油膏、粉末、喷剂及吸入剂。该药物可在无菌条件下与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载剂以及所需要的任一防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼用配方、眼用油膏、粉末与溶液，亦意欲涵盖于本发明的范围内。
已知地，本发明的化合物(或组合物)可置入饮水中，借此随同每日的饮水供应而摄入治疗剂量的该化合物。该化合物可直接计量置入饮水中，优选以液态水溶性浓缩物(诸如水溶性盐的水溶液)的形式。
可通过将药物分散于一种药学上可接受的油诸如花生油、芝麻油、玉米油等中，而制备糊状配方。
可通过将本发明的一种化合物或组合物与一种稀释剂诸如碳蜡、棕榈蜡等混合，而制备含有有效量的本发明的一种化合物、药学组合物或组合的丸剂；亦可添加一种润滑剂诸如硬脂酸镁或硬脂酸钙，以增进制丸制程。
本发明还提供了所述的由通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物或晶型作为溴结构域识别蛋白的选择性抑制剂的用途，以及在制备治疗由溴结构域识别蛋白介导的相关疾病的药物中的用途。由溴结构域识别蛋白介导的相关疾病包括但不限于血液学恶性肿瘤、中线癌以及炎症等疾病。
本发明还提供了由通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物或晶型用于制备治疗血液学恶性肿瘤、中线癌以及炎症等疾病的药物的用途。
本发明还提供了一种用于治疗由溴结构域识别蛋白介导的相关疾病的由通式(i)表示的化合物，及其立体异构体、可药用盐、前药、溶剂化物、水合物或晶型。
本发明也涵盖经同位素标记的本发明化合物，除了一个或多个原子是被原子质量或质量数不同于自然中常见的原子质量或质量数之一原子所置换的事实之外，其是与此述者相同。可纳入本发明的化合物中的同位素实例，包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘及氯之同位素，其分别诸如：2氢、3氢、11碳、13碳、14碳、13氮、15氮、15氧、17氧、18氧、31磷、32磷、35硫、18氟、123碘、125碘及36氯。
某些同位素标记的本发明的化合物(例如用3h和14c标记的那些)用于化合物和/或底物组织分布试验。特别优选氚化(即3h)和碳-14(即14c)同位素，因为它们容易制备和检测。而且，较重的同位素如氘(即2h)进行取代可以提供由较大的代谢稳定性导致的某些治疗优点(例如体内半衰期增加或剂量需求减小)，因而在某些情况下可能是优选的。正电子发射同位素，例如15o、13n、11c和18f用于正电子发射体层摄影术(pet)研究，以检查底物受体占用率。同位素标记的本发明的化合物一般可以遵循类似于在方案和/或下文实施例中所公开的方法，通过用同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂来制备。
附图说明
图1为人溴结构域蛋白的基因树示意图。
图2a为从plk-brd4双重抑制剂来设计选择性bdr4抑制剂；图2b为bi2536与brd4结合模式；图2c为化合物8与brd4结合模式。
具体实施方式
不需进一步详细说明，认为本领域熟练技术人员借助前面的描述，可以最大程度地利用本发明。因此，下面提供的实施例仅仅是进一步阐明本发明而己，并不意味着以任何方式限制本发明范围。
原料可以从商业途径获得，或者通过本领域已知的方法制备，或根据本文所述方法制备。
化合物的结构通过核磁共振(1h-nmr)和/或质谱(ms)来确定。nmr测定是用varian公司的mercury-400型核磁共振仪，测定溶剂为氘代氯仿(cdcl3)、氘代甲醇(cd3od)、氘代二甲亚砜(dmso-d6)或氘代乙腈(cd3cn)，tms为内标。ms的测定用thermofinniganlcq-decaxp型(esi)液相色谱-质谱联用仪。柱层析分离纯化产物使用的是isco
制备实施例：
实施例1
试剂与条件：a)(r)-2-氨基丁酸，碳酸钾，乙醇，水，80℃，3小时；b)二水合二氯化锡，乙醇，浓盐酸，80℃，3小时；c)0℃，氢化钠，30分钟，碘甲烷，室温，2小时；d)对甲苯磺酰胺，烯丙基氯化钯二聚体，tbuxphos，碳酸钾，2-甲基四氢呋喃，80℃，24小时。
a)化合物a(2g,9.09mmol)和(r)-2-氨基丁酸(0.937g,9.09mmol)溶于10ml乙醇中，然后加入6n碳酸钾水溶液(2.51g,18.18mmol)，80℃回流3小时，用tlc监测反应，反应完之后用稀盐酸调ph至7～8，蒸干溶剂，用乙酸乙酯(20ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得2.7g白色固体b，产率98.18％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.41-8.32(m,1h),8.07(dd,j＝9.2,0..9hz,1h),6.93-6.89(m,1h),6.84(ddd,j＝9.1,1.9,0.9hz,1h),4.24(q,j＝6.5hz,1h),2.20-1.97(m,2h),1.09(t,j＝7.4hz,3h)。
b)化合物b(1.5g,4.95mmol)溶于15ml乙醇中，然后向上述溶液加入二水合二氯化锡(4.47g,19.79mmol)溶于5ml乙醇和1.0ml浓盐酸的溶液，80℃回流3小时，用tlc监测反应，反应完之后用2n氢氧化钠调ph至7～8，过滤，滤液蒸干，用乙酸乙酯(20ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得1.24g白色固体c，产率98.41％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.78(s,1h),6.90-6.78(m,2h),6.60(d,j＝8.1hz,1h),4.06-3.97(m,1h),3.87(dd,j＝7.3,5.1hz,1h),1.91-1.73(m,2h),1.03(dd,j＝8.1,6.7hz,3h).
c)化合物c(1.2g,4.70mmol)溶于5mln,n-二甲基甲酰胺(dmf)中，冷却至0℃，加入氢化钠(0.452g,18.82mmol)，0℃搅拌半小时后在0℃条件下加入碘甲烷(1.17ml,18.8mmol)，然后室温反应2小时，用tlc监测反应，反应完之后用稀盐酸调ph至7～8，用乙酸乙酯(20ml*2)和100ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得1.12g浅黄色油状液体d，产率84.21％。
d)化合物d(0.3g,1.06mmol)和对甲基苯磺酰胺(0.272g,1.59mmol)和碳酸钾(0.293g,2.12mmol)溶于2ml2-甲基四氢呋喃中，用氮气换气再加入烯丙基氯化钯二聚体(8mg,0.021mmol)，tbuxphos(9mg,0.021mmol),再用氮气换气，然后80℃反应24小时，用tlc监测反应，反应完之后用乙酸乙酯(10ml*2)和10ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水20ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～30％梯度洗脱，得到0.2g白色固体e，即化合物1，产率50.63％。ms(esi)[m+h]+：374.18；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.67(d,j＝8.3hz,2h),7.37(s,1h),7.20(d,j＝8.1hz,2h),6.68(d,j＝8.5hz,1h),6.49(dd,j＝8.4,2.3hz,1h),6.40(d,j＝2.3hz,1h),3.83(dd,j＝7.5,5.1hz,1h),3.29(s,3h),2.81(s,3h),2.35(s,3h),1.68–1.56(m,1h),1.53–1.43(m,1h),0.78(t,j＝7.5hz,3h).
实施例2
除了在步骤a中用(s)-2-氨基丙酸代替(r)-2-氨基丁酸以外，采用与实施例1中相同的方法制备实施例2的化合物。
ms(esi)[m+h]+：360.16。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.70(d,j＝8.3hz,2h),7.48(s,1h),7.23(d,j＝8.1hz,2h),6.74(d,j＝8.5hz,1h),6.56(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.45(d,j＝2.2hz,1h),3.98(q,j＝6.8hz,1h),3.31(s,3h),2.76(s,3h),2.38(s,3h),1.07(d,j＝6.8hz,3h)。
实施例3
除了在步骤a中用(s)-2-氨基丙酸代替(r)-2-氨基丁酸；在步骤d邻氯苯磺酰胺代替对甲基苯磺酰胺以外，采用与实施例1中相同的方法制备实施例3的化合物。
ms(esi)[m+h]+：380.13。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.39(s,1h),8.03(d,j＝7.7hz,1h),7.60(d,j＝5.9hz,2h),7.49(t,j＝6.3hz,1h),6.84(d,j＝8.5hz,1h),6.53(d,j＝8.0hz,1h),6.43(s,1h),3.93(d,j＝6.6hz,1h),3.15(s,3h),2.66(s,3h),0.88(d,j＝6.5hz,3h)。
实施例4
除了在步骤a中用(s)-2-氨基丁酸代替(r)-2-氨基丁酸以外，采用与实施例1中相同的方法制备实施例4的化合物。
ms(esi)[m+h]+：374.16。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.66(d,j＝8.2hz,2h),7.20(d,j＝8.2hz,3h),6.69(d,j＝8.4hz,1h),6.48(dd,j＝8.4,2.1hz,1h),6.39(d,j＝2.0hz,1h),3.83(dd,j＝7.5,5.2hz,1h),3.30(s,3h),2.81(s,3h),2.36(s,3h),1.69–1.56(m,1h),1.47(dt,j＝21.6,7.4hz,1h),0.79(t,j＝7.5hz,3h)。
实施例5
除了在步骤d对氟苯磺酰胺代替对甲基苯磺酰胺以外，采用与实施例1中相同的方法制备实施例5的化合物。
ms(esi)[m+h]+：378.43。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.81-7.75(m,2h),7.14-7.07(m,2h),6.96(s,1h),6.71(d,j＝8.4hz,1h),6.45(dd,j＝8.4,2.3hz,1h),6.39(d,j＝2.3hz,1h),3.86(dd,j＝7.5,5.1hz,1h),3.32(s,3h),2.84(s,3h),1.72–1.59(m,1h),1.51(dt,j＝13.9,7.4hz,1h),0.81(t,j＝7.5hz,3h)。
实施例6
除了在步骤a中用(s)-2-氨基丁酸代替(r)-2-氨基丁酸；在步骤d对氟苯磺酰胺代替对甲基苯磺酰胺以外，采用与实施例1中相同的方法制备实施例6的化合物。
ms(esi)[m+h]+：378.14。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.81-7.75(m,2h),7.14-7.06(m,2h),7.04(s,1h),6.71(d,j＝8.4hz,1h),6.45(dd,j＝8.4,2.3hz,1h),6.39(d,j＝2.3hz,1h),3.86(dd,j＝7.5,5.1hz,1h),3.32(s,3h),2.84(s,3h),1.66(ddd,j＝14.0,7.5,5.1hz,1h),1.51(dt,j＝14.0,7.4hz,1h),0.81(t,j＝7.5hz,3h)。
实施例7
除了在步骤a中用d-亮氨酸代替(r)-2-氨基丁酸以外，采用与实施例1中相同的方法制备实施例7的化合物。
ms(esi)[m+h]+：402.53。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.66(d,j＝7.9hz,2h),7.18(t,j＝6.4hz,2h),6.70(d,j＝6.6hz,1h),6.56–6.48(m,1h),6.40(s,1h),3.87(t,j＝7.1hz,1h),3.30–3.22(m,3h),2.78(d,j＝2.8hz,3h),2.34(d,j＝6.1hz,3h),2.06–1.99(m,2h),1.64–1.51(m,1h),0.86(ddd,j＝25.6,8.0,2.9hz,6h)。
实施例8和9
试剂与条件：a)环丙胺，1,2-二氯乙烷，80℃回流12小时；b)铁粉，氯化铵溶液，乙醇，80℃反应1小时；c)1.2-溴丙酰溴，n,n-二异丙基乙胺(dipea)，二氯甲烷，室温反应2小时；2.乙腈，dipea，80℃反应过夜；d)氢化钠，n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，碘甲烷，室温反应1小时；e)对甲基苯磺酰胺，烯丙基氯化钯二聚体，2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三异丙基联苯(tbuxphos)，碳酸钾，2-甲基四氢呋喃，80℃反应24小时；f)碳酸铯，氨基甲酸叔丁酯，pd(oac)2，2-双环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(xphos)，二氧六环，100℃反应过夜；g)对甲基苯甲酰氯，三乙胺，二氯甲烷，室温反应过夜。
实施例8的化合物的制备：
a)化合物a(10g,45.45mmol)溶于30ml1,2-二氯乙烷中，加入环丙胺(6.29ml,90.91mmol)，然后80℃回流12小时，用tlc监测反应，反应完之后蒸干溶剂，用二氯甲烷(40ml*2)和40ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水80ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得10.2g红色固体b，产率87.33％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.05(s,1h),7.96(d,j＝9.1hz,1h),7.45(d,j＝2.0hz,1h),6.77(dd,j＝9.1,2.0hz,1h),2.60–2.50(m,1h),0.97–0.88(m,2h),0.69–0.61(m,2h).
b)化合物b(10g,38.90mmol)溶于25ml乙醇中，加入氯化铵(10.41g,194.55mmol)的水(10ml)溶液，再加入铁粉(10.89g,194.55mmol)，80℃反应1小时，用tlc监测反应，反应完之后用硅藻土滤去铁粉，用乙酸乙酯(40ml*2)和40ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水80ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得5.2g红色油状液体c，产率58.89％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.13(d,j＝2.1hz,1h),6.79(dd,j＝8.1,2.1hz,1h),6.53(d,j＝8.1hz,1h),3.59–3.03(m,2h),2.45–2.32(m,1h),0.76(q,j＝6.4hz,2h),0.57–0.44(m,2h).
c)化合物c(5.2g,22.90mmol)溶于干燥的15ml二氯甲烷中，冷却至0℃，加入dipea(7.98ml,45.80mmol)和2-溴丙酰溴(3.12ml,29.77mmol)，然后室温反应2小时，用tlc监测反应，反应完之后用用二氯甲烷(40ml*2)和40ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水80ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得中间体，该中间体溶于20ml乙腈中，加入8mldipea，然后80℃反应过夜，用tlc监测反应，反应完之后蒸干溶剂，用二氯甲烷(40ml*2)和40ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水80ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～30％梯度洗脱，得到2g白色固体d，产率31.06％。ms(esi)[m+h]+：281.17；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.10(s,1h),7.18(d,j＝1.8hz,1h),6.91(dd,j＝8.2,1.9hz,1h),6.64(d,j＝8.2hz,1h),4.04(q,j＝6.8hz,1h),2.45–2.35(m,1h),1.24(d,j＝6.9hz,3h),1.00(td,j＝10.5,6.2hz,1h),0.84–0.75(m,1h),0.63(dt,j＝10.2,5.1hz,1h),0.56(ddd,j＝14.2,8.1,4.1hz,1h).
d)化合物d(2g,7.11mmol)溶于8mldmf中，冷却至0℃，加入氢化钠(0.512g,21.34mmol)，0℃反应半小时后加入碘甲烷(0.67ml,10.67mmol),然后室温反应1小时，用tlc监测反应，反应完之后冷却至0℃，加入稀盐酸调ph至7～8，然后用二氯甲烷(20ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～25％梯度洗脱，得到1.8g白色固体e，产率85.71％。ms(esi)[m+h]+：295.15；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.14(d,j＝2.2hz,1h),6.91(dd,j＝8.5,2.1hz,1h),6.70(d,j＝8.5hz,1h),4.04(p,j＝7.0hz,1h),3.24(s,3h),2.36–2.27(m,1h),1.10(d,j＝6.9hz,3h),0.91(dtd,j＝10.8,6.3,4.7hz,1h),0.79–0.68(m,1h),0.60–0.51(m,1h),0.46(ddt,j＝10.4,6.5,4.1hz,1h).
e)化合物e(0.2g,0.68mmol)和对甲基苯磺酰胺(0.174g,1.02mmol)和碳酸钾(0.187g,1.36mmol)溶于2ml2-甲基四氢呋喃中，用氮气换气再加入烯丙基氯化钯二聚体(6mg,0.014mmol)，tbuxphos(6mg,0.014mmol)，再用氮气换气，然后80℃反应24小时，用tlc监测反应，反应完之后用乙酸乙酯(10ml*2)和10ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水20ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～30％梯度洗脱，得到0.15g白色固体f，即化合物8，产率57.47％。ms(esi)[m+h]+：386.22；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.85(s,1h),7.71(d,j＝7.5hz,2h),7.21(d,j＝7.4hz,2h),6.91(s,1h),6.74(d,j＝8.3hz,1h),6.65(d,j＝7.8hz,1h),4.08(d,j＝6.2hz,1h),3.27(s,3h),2.36(s,3h),2.27(s,1h),1.10(d,j＝6.2hz,3h),0.83(s,1h),0.73(s,1h),0.55(s,1h),0.30(s,1h).
实施例9的化合物的制备：
步骤a)-d)的制备方法和制备实施例8时使用的方法相同，
f)化合物e(0.2g,0.68mmol)、碳酸铯(0.314g,0.96mmol)和氨基甲酸叔丁酯(0.12g,1.03mmol)溶于2ml二氧六环中，用氮气换气，换气之后加入pd(oac)2(0.046g,0.068mmol)和xphos(0.052g,0.11mmol)，再用氮气换气，换气之后100℃反应过夜，用tlc板监测，反应完后用乙酸乙酯(10ml*2)和10ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水20ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～30％梯度洗脱，得到0.16g黄色固体，将该黄色固体溶于3ml干燥的二氯甲烷中，冷却至0℃，加入1ml三氟醋酸，然后室温反应2小时，用tlc板监测，反应完后冷却至0℃，用饱和nahco3调ph至7～8，然后用乙酸乙酯(10ml*2)和10ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水20ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～35％梯度洗脱，得到0.1g白色固体g，总产率63.69％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.18(d,j＝2.2hz,1h),6.97(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.74(d,j＝8.5hz,1h),4.08(q,j＝6.8hz,1h),3.29(s,3h),2.42–2.32(m,1h),1.15(d,j＝6.9hz,3h),1.00–0.92(m,1h),0.81–0.74(m,1h),0.65–0.57(m,1h),0.55–0.47(m,1h).
g)化合物g(0.1g,0.43mmol)溶于2ml的二氯甲烷中，加入对甲基苯甲酰氯(0.075ml,0.56mmol)和三乙胺(0.18ml,1.29mmol)，然后室温反应过夜，用tlc板监测，反应完后用二氯甲烷(10ml*2)和10ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水20ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速硅胶柱色谱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～30％梯度洗脱，得到0.05g白色固体h，即化合物9，产率33.12％。ms(esi)[m+h]+：350.23；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.97(s,1h),7.79(s,1h),7.77(s,1h),7.60(s,1h),7.28(s,1h),7.26(s,1h),7.08(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.87(d,j＝8.6hz,1h),4.10(q,j＝6.8hz,1h),3.33(s,3h),2.45–2.37(m,4h),1.16(d,j＝6.8hz,3h),1.04–0.96(m,1h),0.81–0.72(m,1h),0.64–0.51(m,2h).
实施例10
除了在步骤a中用环戊胺代替环丙胺；省略步骤d以外，采用与实施例8中相同的方法制备实施例10的化合物。
ms(esi)[m+h]+：400.18。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.29(s,1h),9.77(s,1h),7.55(d,j＝8.3hz,2h),7.31(d,j＝8.1hz,2h),6.63(d,j＝8.2hz,1h),6.45(dd,j＝8.2,2.1hz,1h),6.43(s,1h),3.83(q,j＝6.7hz,1h),3.50(p,j＝7.4hz,1h),2.31(s,3h),1.88–1.72(m,2h),1.70–1.59(m,2h),1.57–1.45(m,3h),1.39–1.27(m,1h),0.88(d,j＝6.7hz,3h)。
实施例11
除了在步骤a中用环戊胺代替环丙胺以外，采用与实施例8中相同的方法制备实施例11的化合物。
ms(esi)[m+h]+：414.17。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.64(d,j＝8.3hz,2h),7.21(d,j＝8.0hz,2h),7.08(s,1h),6.75(d,j＝8.4hz,1h),6.57(d,j＝2.2hz,1h),6.54(dd,j＝8.4,2.3hz,1h),4.15(q,j＝6.8hz,1h),3.59(p,j＝7.3hz,1h),3.29(s,3h),2.36(s,3h),1.96–1.84(m,2h),1.72(dd,j＝11.4,6.1hz,1h),1.66–1.50(m,4h),1.46–1.34(m,1h),0.97(d,j＝6.8hz,3h)。
实施例12
除了在步骤a中用环戊胺代替环丙胺；在步骤d中用乙基溴代替碘甲烷以外，采用与实施例8中相同的方法制备实施例12的化合物。
ms(esi)[m+h]+：428.19。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.64(d,j＝8.3hz,2h),7.22(d,j＝8.4hz,2h),6.78(d,j＝8.5hz,1h),6.76(s,1h),6.54(d,j＝2.3hz,1h),6.51(dd,j＝8.4,2.3hz,1h),4.10(q,j＝6.7hz,1h),4.02(dq,j＝14.4,7.3hz,1h),3.78(dq,j＝14.1,7.0hz,1h),3.59(p,j＝7.3hz,1h),2.37(s,3h),1.95–1.83(m,2h),1.78–1.69(m,1h),1.69–1.63(m,2h),1.61–1.55(m,2h),1.42(dt,j＝16.1,6.9hz,1h),1.21(t,j＝7.1hz,3h),0.96(d,j＝6.8hz,3h)。
实施例13
除了在步骤a中用异丙胺代替环丙胺以外，采用与实施例8中相同的方法制备实施例13的化合物。
ms(esi)[m+h]+：388.10。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.66(d,j＝8.3hz,2h),7.51(s,1h),7.20(d,j＝8.0hz,2h),6.74(d,j＝8.5hz,1h),6.60(d,j＝2.2hz,1h),6.55(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),4.18–4.13(m,1h),3.69(dq,j＝13.3,6.6hz,1h),3.28(s,3h),2.35(s,3h),1.17(dd,j＝8.0,6.8hz,6h),1.01(d,j＝6.8hz,3h)。
实施例14
除了在步骤a中用2-甲基丙-1-胺代替环丙胺以外，采用与实施例8中相同的方法制备实施例14的化合物。
ms(esi)[m+h]+：402.22。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.67(d,j＝8.2hz,2h),7.48(s,1h),7.21(d,j＝8.1hz,2h),6.73(d,j＝8.5hz,1h),6.53(dd,j＝8.5,2.1hz,1h),6.39(d,j＝2.0hz,1h),3.95(q,j＝6.8hz,1h),3.30(s,3h),3.07(dd,j＝13.7,5.5hz,1h),2.49(dd,j＝13.7,8.8hz,1h),2.36(s,3h),1.81–1.65(m,1h),1.01(d,j＝6.8hz,3h),0.86(dd,j＝8.3,6.8hz,6h)。
实施例15
除了在步骤a中用2-甲氧基乙胺代替环丙胺以外，采用与实施例8中相同的方法制备实施例15的化合物。
ms(esi)[m+h]+：404.50。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.18(s,1h),7.62(d,j＝8.0hz,2h),7.13(d,j＝7.9hz,2h),6.68(d,j＝8.5hz,1h),6.56(d,j＝8.5hz,1h),6.51(s,1h),4.05(q,j＝6.5hz,1h),3.47–3.40(m,2h),3.40–3.32(m,1h),3.24(s,3h),3.20(d,j＝6.1hz,3h),3.10(dd,j＝13.2,5.7hz,1h),2.28(s,3h),0.99(d,j＝6.7hz,3h)。
实施例16
除了在步骤a中用2-吗啉乙烷-1-胺代替环丙胺以外，采用与实施例8中相同的方法制备实施例16的化合物。
ms(esi)[m+h]+：459.26。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.63(d,j＝8.3hz,2h),7.22(d,j＝8.0hz,2h),6.78(d,j＝8.5hz,1h),6.69(s,1h),6.54(d,j＝2.3hz,1h),6.50(dd,j＝8.4,2.3hz,1h),4.10(q,j＝6.7hz,1h),4.02(dq,j＝14.3,7.1hz,1h),3.78(dq,j＝14.3,7.2hz,1h),3.58(p,j＝7.3hz,1h),2.38(s,3h),1.95–1.83(m,2h),1.78–1.69(m,1h),1.66–1.50(m,5h),1.42(ddd,j＝16.0,13.4,6.9hz,1h),1.21(t,j＝7.1hz,3h),0.96(d,j＝6.8hz,3h)。
实施例17
除了在步骤a中用(四氢呋喃-2-基)甲胺代替环丙胺以外，采用与实施例8中相同的方法制备实施例17的化合物。
ms(esi)[m+h]+：430.23。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.64(dd,j＝8.3,6.6hz,2h),7.29(d,j＝3.0hz,1h),7.20(d,j＝8.1hz,2h),6.72(t,j＝8.1hz,1h),6.57–6.50(m,1h),6.47(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),4.16(q,j＝6.8hz,1h),4.03–3.95(m,1h),3.85(ddd,j＝15.2,11.0,6.9hz,1h),3.75–3.68(m,1h),3.34(dd,j＝14.2,3.3hz,1h),3.27(d,j＝3.7hz,3h),2.99–2.90(m,1h),2.36(s,3h),2.00(ddd,j＝10.3,8.2,5.1hz,1h),1.91–1.79(m,2h),1.60–1.46(m,1h),1.05(dd,j＝6.8,2.6hz,3h)。
实施例18
除了在步骤a中用(2-甲氧基苯基)甲胺代替环丙胺以外，采用与实施例8中相同的方法制备实施例18的化合物。
ms(esi)[m+h]+：466.07。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.47(d,j＝8.3hz,2h),7.39(s,1h),7.26–7.20(m,1h),7.18(d,j＝7.5hz,1h),7.11(d,j＝8.1hz,2h),6.88(d,j＝8.1hz,1h),6.84(t,j＝7.5hz,1h),6.70(d,j＝8.5hz,1h),6.55(d,j＝2.2hz,1h),6.46(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),4.45(d,j＝15.4hz,1h),4.10–4.01(m,2h),3.86(s,3h),3.28(s,3h),2.33(s,3h),1.11(d,j＝6.8hz,3h)。
实施例19
除了在步骤e对甲氧基苯磺酰胺代替对甲基苯磺酰胺以外，采用与实施例8中相同的方法制备实施例19的化合物。
ms(esi)[m+h]+：402.09。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.74–7.67(m,2h),6.92–6.87(m,2h),6.84(d,j＝2.3hz,1h),6.74(d,j＝8.5hz,1h),6.66(s,1h),6.53(dd,j＝8.5,2.4hz,1h),4.06(q,j＝6.9hz,1h),3.83(s,3h),3.27(s,3h),2.28(td,j＝6.6,3.3hz,1h),1.12(d,j＝6.8hz,3h),0.86(dt,j＝10.9,6.3hz,1h),0.80–0.70(m,1h),0.58(dt,j＝10.3,4.5hz,1h),0.36(dt,j＝10.3,5.2hz,1h)。
实施例20
试剂与条件：a)二氯亚砜(socl2),甲醇，60℃回流12小时；b)环丙胺，1,2-二氯乙烷，80℃回流12小时；c)铁粉，氯化铵溶液，乙醇，80℃反应1小时；d)1.2-溴丙酰溴，n,n-二异丙基乙胺(dipea)，二氯甲烷，室温反应2小时；2.乙腈，dipea，80℃反应过夜；e)氢化钠，n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，碘甲烷，室温反应1小时；f)氢氧化锂，thf/h2o，室温反应过夜；g)2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu),n,n-二异丙基乙胺(dipea)，n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，室温反应过夜。
a)化合物a(10g,54.02mmol)溶于26ml甲醇中，冷却至0℃，加入socl2(19.62ml,270.11mmol)，60℃回流12小时，用tlc板监测，反应完后蒸干溶剂，冷却至0℃，用饱和nahco3调ph至7～8，然后用二氯甲烷(40ml*2)和40ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水80ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得10.2g浅黄色固体b，产率94.88％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.11(t,j＝7.8hz,1h),7.97(s,1h),7.94(d,j＝3.0hz,1h),3.98(s,3h).
b)化合物b(10g,50.25mmol)溶于50ml1,2-二氯乙烷中，加入环丙胺(6.95ml,100.50mmol)，然后80℃回流12小时，用tlc板监测，反应完后蒸干溶剂，用二氯甲烷(50ml*2)和50ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水100ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得10.2g红色固体c，产率85.93％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.15(d,j＝8.8hz,1h),8.03(s,1h),7.92(d,j＝1.7hz,1h),7.22(dd,j＝8.8,1.8hz,1h),3.89(s,3h),2.68(td,j＝6.6,3.0hz,1h),0.94–0.84(m,2h),0.70–0.60(m,2h).
c)化合物c(10g,42.33mmol)溶于30ml乙醇中，加入氯化铵(11.32g,211.65)的水(10ml)溶液，再加入铁粉(11.86g,211.67mmol)，80℃反应1小时，用tlc板监测，反应完后用硅藻土滤去铁粉，用乙酸乙酯(40ml*2)和40ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水80ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得5.2g黄色固体d，产率59.56％。ms(esi)[m+h]+：207.67。
d)化合物d(5.2g,25.21mmol)溶于干燥的20ml二氯甲烷中，冷却至0℃，加入dipea(8.78ml,50.42mmol)和2-溴丙酰溴(3.96ml,37.82mmol)，然后室温反应2小时，用tlc板监测，反应完后用二氯甲烷(40ml*2)和40ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水80ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得中间体，该中间体溶于20ml乙腈中，加入9mldipea，然后80℃反应过夜，用tlc板监测，反应完后蒸干溶剂，用二氯甲烷(40ml*2)和40ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水80ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～40％梯度洗脱，得到3g白色固体e，产率45.73％。ms(esi)[m+h]+：261.20；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.61(s,1h),7.75(d,j＝1.6hz,1h),7.53(dd,j＝8.1,1.8hz,1h),6.78(d,j＝8.1hz,1h),4.13–4.05(m,1h),3.90(s,3h),2.52–2.45(m,1h),1.24(d,j＝6.9hz,3h),1.10–1.02(m,1h),0.86–0.78(m,1h),0.68–0.60(m,1h),0.60–0.51(m,1h).
e)化合物e(3g,11.53mmol)溶于8mldmf中，冷却至0℃，加入氢化钠(0.83g,34.58mmol)，0℃反应半小时后加入碘甲烷(1.08ml,17.30mmol),然后室温反应1小时，用tlc板监测，反应完后冷却至0℃，加入稀盐酸调ph至7～8，然后用二氯甲烷(20ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～25％梯度洗脱，得到2.8g无色透明液体f，产率88.61％。ms(esi)[m+h]+：275.18；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.75(d,j＝1.9hz,1h),7.59(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),6.93(d,j＝8.4hz,1h),4.12(q,j＝6.9hz,1h),3.89(s,3h),3.35(s,3h),2.48–2.42(m,1h),1.15(d,j＝6.9hz,3h),1.03(dtd,j＝9.7,6.3,4.6hz,1h),0.84–0.76(m,1h),0.66–0.58(m,1h),0.56–0.48(m,1h).
f)化合物f(2.8g,10.22mmol)溶于15ml四氢呋喃和5ml水中，加入一水合氢氧化锂(1.72g,40.88mmol)然后室温反应过夜，用tlc板监测，反应完后用稀盐酸调ph至6～7，用乙酸乙酯(20ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得到2.4g白色固体g，产率90.23％。ms(esi)[m+h]+：261.08；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.83(d,j＝1.9hz,1h),7.70(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),6.99(d,j＝8.4hz,1h),4.17(q,j＝6.9hz,1h),3.39(s,3h),2.55–2.43(m,1h),1.19(d,j＝6.9hz,3h),1.06(tt,j＝11.1,5.4hz,1h),0.88–0.77(m,1h),0.66(dt,j＝10.0,4.7hz,1h),0.60–0.51(m,1h).
g)化合物g(0.2g,0.77mmol)溶于2mldmf中，加入hatu(0.29g,0.77mmol),室温反应半小时后加入对甲基苯胺(0.1g,0.92mmol)和dipea(0.14ml,0.77mmol)，室温反应过夜，用tlc板监测，反应完后用乙酸乙酯(20ml*2)和40ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～35％梯度洗脱，得到0.1g白色固体h，即化合物20，产率37.31％。ms(esi)[m+h]+：350.16；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.03(s,1h),7.67(d,j＝1.7hz,1h),7.54(d,j＝8.3hz,2h),7.33(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.15(d,j＝8.3hz,2h),6.91(d,j＝8.3hz,1h),4.12(q,j＝6.8hz,1h),3.34(s,3h),2.43(ddd,j＝9.9,6.6,3.7hz,1h),2.33(s,3h),1.15(d,j＝6.8hz,3h),0.99(td,j＝10.6,6.2hz,1h),0.78(td,j＝11.2,6.4hz,1h),0.60(dt,j＝10.0,4.5hz,1h),0.51(dt,j＝14.3,7.1hz,1h).
实施例21
除了在步骤g中用n-甲基环己基胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例21的化合物。
ms(esi)[m+h]+：356.24。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.10(s,1h),6.89(s,2h),4.09(q,j＝6.8hz,1h),3.62–3.46(m,1h),3.33(s,3h),3.02–2.75(m,3h),2.43–2.33(m,1h),1.70(d,j＝29.8hz,4h),1.47(d,j＝58.7hz,4h),1.13(d,j＝6.8hz,3h),1.05(s,2h),0.97–0.85(m,1h),0.77(td,j＝11.3,6.4hz,1h),0.60(td,j＝10.2,4.6hz,1h),0.49(td,j＝10.2,4.1hz,1h)。
实施例22
除了在步骤g中用n-乙基环己基胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例22的化合物。
ms(esi)[m+h]+：370.26。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.07(s,1h),6.90(d,j＝8.0hz,1h),6.87(d,j＝8.0hz,1h),4.10(q,j＝6.8hz,1h),3.52(d,j＝8.4hz,1h),3.43(d,j＝12.8hz,2h),3.34(s,3h),2.44–2.33(m,1h),1.75(s,4h),1.52(dd,j＝17.9,8.1hz,3h),1.25(d,j＝12.2hz,3h),1.14(d,j＝6.8hz,3h),1.06(s,3h),0.92(dt,j＝10.7,6.3hz,1h),0.78(dt,j＝11.4,6.3hz,1h),0.62(td,j＝10.1,4.8hz,1h),0.50(td,j＝10.2,4.1hz,1h)。
实施例23
除了在步骤g中用异噁唑基胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例23的化合物。
ms(esi)[m+h]+：327.35。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.74(dd,j＝4.5,1.4hz,1h),8.47(dd,j＝8.4,1.4hz,1h),7.94(d,j＝1.9hz,1h),7.88(dd,j＝8.4,2.0hz,1h),7.47(dd,j＝8.4,4.5hz,1h),7.07(d,j＝8.4hz,1h),4.19(q,j＝6.9hz,1h),3.41(s,3h),2.49(ddd,j＝10.0,6.6,3.6hz,1h),1.21(d,j＝6.9hz,3h),1.07–1.00(m,1h),0.86–0.81(m,1h),0.69–0.62(m,1h),0.56(ddd,j＝10.3,5.1,3.2hz,1h)。
实施例24
除了在步骤g中用1,3,5-三甲基-1h-吡唑基-4-胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例24的化合物。
ms(esi)[m+h]+：368.25。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.67(d,j＝1.9hz,1h),7.63(s,1h),7.37(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),6.92(d,j＝8.3hz,1h),4.10(q,j＝6.8hz,1h),3.67(s,3h),3.33(s,3h),2.47–2.39(m,1h),2.13(s,3h),2.10(s,3h),1.13(d,j＝6.9hz,3h),1.03–0.93(m,1h),0.77(ddd,j＝11.0,10.3,6.4hz,1h),0.59(dt,j＝10.4,4.6hz,1h),0.55–0.46(m,1h)。
实施例25
除了在步骤g中用对甲基苄胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例25的化合物。
ms(esi)[m+h]+：364.17。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.64(s,1h),7.23(d,j＝7.8hz,3h),7.12(d,j＝7.8hz,2h),6.86(d,j＝8.3hz,1h),6.75(d,j＝4.9hz,1h),4.57(d,j＝5.3hz,2h),4.10(q,j＝6.8hz,1h),3.31(s,3h),2.45–2.36(m,1h),2.32(s,3h),1.12(d,j＝6.8hz,3h),0.97(td,j＝10.7,6.0hz,1h),0.76(td,j＝11.1,6.1hz,1h),0.57(dd,j＝9.9,4.6hz,1h),0.50(dd,j＝10.0,4.1hz,1h)。
实施例26
除了在步骤g中用邻甲氧基苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例26的化合物。
ms(esi)[m+h]+：366.11。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.57(s,1h),8.53(dd,j＝7.9,1.6hz,1h),7.70(d,j＝1.9hz,1h),7.36(dd,j＝8.3,2.0hz,1h),7.07(td,j＝7.7,1.7hz,1h),7.02(dd,j＝7.8,1.4hz,1h),6.98(d,j＝8.3hz,1h),6.91(dd,j＝8.0,1.3hz,1h),4.15(q,j＝6.8hz,1h),3.92(s,3h),3.37(s,3h),2.53–2.45(m,1h),1.18(d,j＝6.9hz,3h),1.09–0.98(m,1h),0.84(ddd,j＝9.4,7.6,4.8hz,1h),0.65(dt,j＝10.1,4.4hz,1h),0.60–0.52(m,1h)。
实施例27
除了在步骤g中用n-甲基对甲基苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例27的化合物。
ms(esi)[m+h]+：364.21。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.03(d,j＝7.9hz,2h),6.99(d,j＝8.4hz,1h),6.94(s,2h),6.92(s,1h),6.75(d,j＝8.2hz,1h),4.00(q,j＝6.7hz,1h),3.48(s,3h),3.27(s,3h),2.28(s,3h),2.12(s,1h),1.02(d,j＝6.8hz,3h),0.68(d,j＝6.4hz,2h),0.49(d,j＝8.2hz,1h),0.11(d,j＝9.0hz,1h)。
实施例28
除了在步骤g中用2,4-二甲基苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例28的化合物。
ms(esi)[m+h]+：364.23。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.81(d,j＝7.8hz,1h),7.68(s,1h),7.60(s,1h),7.35(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),7.07(d,j＝9.0hz,2h),6.98(d,j＝8.3hz,1h),4.16(q,j＝6.8hz,1h),3.39(s,3h),2.53–2.45(m,1h),2.32(d,j＝4.6hz,6h),1.19(d,j＝6.8hz,3h),1.02(d,j＝4.4hz,1h),0.83(dt,j＝11.2,6.2hz,1h),0.64(dd,j＝10.3,4.3hz,1h),0.57(d,j＝3.9hz,1h)。
实施例29
除了在步骤g中用苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例29的化合物。
ms(esi)[m+h]+：336.17。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.14(s,1h),7.77(d,j＝8.0hz,2h),7.66(s,1h),7.57(d,j＝8.3hz,1h),7.35(t,j＝7.8hz,2h),7.17(d,j＝8.3hz,1h),7.09(t,j＝6.9hz,1h),4.05(q,j＝6.7hz,1h),3.31(s,3h),2.55(d,j＝3.1hz,1h),1.09(d,j＝6.8hz,3h),1.04–0.95(m,1h),0.80(d,j＝5.5hz,1h),0.64(d,j＝4.1hz,1h),0.43(d,j＝3.8hz,1h)。
实施例30
除了在步骤g中用n-甲基苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例30的化合物。
ms(esi)[m+h]+：350.19。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.21(t,j＝7.6hz,2h),7.12(t,j＝7.4hz,1h),7.03(d,j＝7.5hz,2h),6.98(dd,j＝8.2,1.8hz,1h),6.91(d,j＝1.7hz,1h),6.73(d,j＝8.3hz,1h),3.97(q,j＝6.8hz,1h),3.49(s,3h),3.24(s,3h),2.13–2.03(m,1h),0.99(d,j＝6.8hz,3h),0.70–0.60(m,2h),0.49–0.41(m,1h),0.13–0.04(m,1h)。
实施例31
除了在步骤g中用对甲氧基苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例31的化合物。
ms(esi)[m+h]+：366.24。1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.81(s,1h),7.67(s,1h),7.55(d,j＝8.6hz,2h),7.32(dd,j＝8.2,1.4hz,1h),6.94(d,j＝8.2hz,1h),6.90(d,j＝8.9hz,2h),4.14(q,j＝6.8hz,1h),3.81(s,3h),3.37(s,3h),2.53–2.41(m,1h),1.17(d,j＝6.8hz,3h),1.07–0.96(m,1h),0.81(td,j＝11.4,6.3hz,1h),0.63(dt,j＝10.1,4.7hz,1h),0.55(dd,j＝10.1,4.2hz,1h)。
实施例32
除了在步骤g中用对甲基环己基胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例32的化合物。
ms(esi)[m+h]+：356.27。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.59(t,j＝2.1hz,1h),7.17(td,j＝8.2,1.9hz,1h),6.90(dd,j＝10.8,8.3hz,1h),6.07(dd,j＝103.5,8.1hz,1h),4.20(s,1h),4.12(qd,j＝6.8,3.1hz,1h),3.34(d,j＝4.0hz,3h),2.47(tt,j＝6.3,3.3hz,1h),2.13–2.02(m,1h),1.90–1.52(m,8h),1.16–1.12(m,3h),1.01(dt,j＝10.7,6.1hz,1h),0.92(dd,j＝15.2,6.5hz,3h),0.84–0.75(m,1h),0.65–0.58(m,1h),0.54(dt,j＝10.2,4.3hz,1h)。
实施例33
除了在步骤g中用环己基胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例33的化合物。
ms(esi)[m+h]+：342.25。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.59(d,j＝1.9hz,1h),7.17(dd,j＝8.2,1.9hz,1h),6.89(d,j＝8.3hz,1h),5.97(d,j＝8.0hz,1h),4.12(q,j＝6.9hz,1h),4.04–3.89(m,1h),3.35(s,3h),2.52–2.42(m,1h),2.03(d,j＝12.0hz,2h),1.76(d,j＝4.4hz,1h),1.65(d,j＝13.2hz,1h),1.43(dd,j＝24.3,12.2hz,2h),1.29–1.18(m,4h),1.15(d,j＝6.9hz,3h),1.02(dt,j＝10.9,6.2hz,1h),0.79(dt,j＝11.1,6.5hz,1h),0.62(dt,j＝10.6,4.2hz,1h),0.53(ddd,j＝14.5,8.4,4.3hz,1h)。
实施例34
除了在步骤g中用n-甲基对甲基环己基胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例34的化合物。
ms(esi)[m+h]+：370.29。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.09(s,1h),6.88(s,2h),4.08(q,j＝6.8hz,1h),3.49(s,1h),3.32(s,3h),2.92(s,3h),2.89–2.74(m,1h),2.37(s,1h),1.74(s,4h),1.51(dd,j＝29.9,21.7hz,4h),1.13(d,j＝6.8hz,3h),1.00–0.87(m,3h),0.83–0.71(m,2h),0.60(d,j＝4.5hz,1h),0.48(d,j＝4.1hz,1h)。
实施例35
除了在步骤g中用n-乙基对甲基苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例35的化合物。
ms(esi)[m+h]+：378.31。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.03(s,1h),7.01(s,1h),6.97(dd,j＝8.2,1.9hz,1h),6.92(d,j＝2.4hz,2h),6.90(s,1h),6.73(d,j＝8.3hz,1h),4.04–3.86(m,3h),3.25(s,3h),2.27(s,3h),2.17–2.06(m,1h),1.20(t,j＝7.1hz,3h),1.00(d,j＝6.8hz,3h),0.75–0.61(m,2h),0.52–0.41(m,1h),0.18–0.07(m,1h)。
实施例36
除了在步骤g中用二氢吲哚代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例36的化合物。
ms(esi)[m+h]+：362.26。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32(s,1h),7.21(d,j＝7.5hz,1h),7.11(d,j＝1.8hz,1h),7.09(d,j＝1.8hz,1h),7.01(s,1h),6.96(s,1h),6.94(s,1h),4.13(q,j＝6.9hz,3h),3.37(s,3h),3.13(t,j＝8.2hz,2h),2.40(d,j＝3.4hz,1h),1.18(d,j＝6.8hz,3h),0.87(s,1h),0.79(dd,j＝12.9,7.8hz,1h),0.61(dd,j＝10.0,4.7hz,1h),0.50(s,1h)。
实施例37
除了在步骤g中用5-甲基二氢吲哚代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例37的化合物。
ms(esi)[m+h]+：376.26。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32(s,1h),7.10(s,1h),7.08(s,1h),7.03(s,1h),6.95(s,1h),6.93(s,1h),4.13(dd,j＝13.5,6.7hz,3h),3.37(s,3h),3.09(t,j＝8.3hz,2h),2.40(s,1h),2.30(s,3h),1.18(d,j＝6.8hz,3h),0.89(s,1h),0.79(d,j＝4.9hz,1h),0.62(d,j＝4.5hz,1h),0.51(s,1h)。
实施例38
除了在步骤g中用5-氟二氢吲哚代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例38的化合物。
ms(esi)[m+h]+：380.24。1hnmr(400mhz,dmso)δ7.28(s,1h),7.16(s,1h),7.13(s,3h),7.00(s,1h),4.11(t,j＝8.3hz,2h),4.03(q,j＝6.8hz,1h),3.29(s,3h),3.10(t,j＝8.2hz,2h),2.47(s,1h),1.09(d,j＝6.8hz,3h),0.95(s,1h),0.77(d,j＝5.0hz,1h),0.61(d,j＝4.4hz,1h),0.39(s,1h)。
实施例39
除了在步骤g中用4-甲基二氢吲哚代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例39的化合物。
ms(esi)[m+h]+：376.25。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.31(s,1h),7.10(d,j＝1.8hz,1h),7.08(d,j＝1.8hz,1h),6.96(s,1h),6.93(s,1h),6.85(s,1h),4.13(dd,j＝13.6,6.7hz,3h),3.37(s,3h),3.03(t,j＝8.2hz,2h),2.40(d,j＝3.1hz,1h),2.25(s,3h),1.18(d,j＝6.8hz,3h),0.87(s,1h),0.78(d,j＝5.2hz,1h),0.61(dd,j＝9.5,5.1hz,1h),0.50(s,1h)。
实施例40
除了在步骤b中用环戊胺代替环丙胺；在步骤g中用2,4-二甲基苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例40的化合物。
ms(esi)[m+h]+：392.12。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.77(d,j＝7.6hz,1h),7.62(s,1h),7.45(s,1h),7.30(dd,j＝8.3,1.8hz,1h),7.06(d,j＝7.9hz,2h),6.99(d,j＝8.3hz,1h),4.23(q,j＝6.8hz,1h),3.96–3.84(m,1h),3.40(s,3h),2.31(d,j＝6.7hz,6h),2.13–1.99(m,2h),1.84–1.74(m,1h),1.74–1.70(m,1h),1.68–1.55(m,4h),1.07(d,j＝6.8hz,3h)。
实施例41
除了在步骤b中用环戊胺代替环丙胺；在步骤g中用二氢吲哚代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例41的化合物。
ms(esi)[m+h]+：390.14。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.21(d,j＝7.4hz,1h),7.09(s,1h),7.07(s,1h),7.04(s,1h),7.01(s,1h),6.98(s,1h),6.96(s,1h),4.22(q,j＝6.8hz,1h),4.14(t,j＝7.9hz,2h),3.85–3.71(m,1h),3.40(s,3h),3.13(t,j＝8.2hz,2h),1.98(d,j＝6.0hz,2h),1.73(d,j＝12.4hz,1h),1.68–1.51(m,5h),1.06(d,j＝6.8hz,3h)。
实施例42
除了在步骤b中用环戊胺代替环丙胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例42的化合物。
ms(esi)[m+h]+：378.10。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.18(s,1h),7.54(d,j＝8.1hz,2h),7.44(s,1h),7.31(d,j＝7.1hz,1h),7.13(d,j＝8.1hz,2h),6.90(d,j＝8.3hz,1h),4.18(q,j＝6.8hz,1h),3.87–3.76(m,1h),3.35(s,3h),2.31(s,3h),2.05–1.95(m,2h),1.74(d,j＝6.1hz,1h),1.66–1.52(m,5h),1.01(d,j＝6.8hz,3h)。
实施例43
除了在步骤b中用环戊胺代替环丙胺；在步骤d中用2-溴丁酰溴代替2-溴丙酰溴；在步骤g中用2,4-二甲基苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例43的化合物。
ms(esi)[m+h]+：406.27。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.75(d,j＝7.4hz,1h),7.63(s,1h),7.48(s,1h),7.31(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.06(s,1h),7.04(s,1h),6.97(d,j＝8.3hz,1h),3.95(q,j＝7.2hz,2h),3.40(s,3h),2.31(s,3h),2.29(s,3h),2.07–1.96(m,2h),1.82–1.72(m,2h),1.70–1.49(m,6h),0.89(t,j＝7.5hz,3h)。
实施例44
除了在步骤b中用环戊胺代替环丙胺；在步骤d中用2-溴丁酰溴代替2-溴丙酰溴；在步骤g中用二氢吲哚代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例44的化合物。
ms(esi)[m+h]+：404.27。1hnmr(400mhz,dmso)δ7.27(s,1h),7.25(s,1h),7.12(t,j＝9.2hz,3h),7.08(s,1h),7.01(t,j＝7.3hz,1h),4.05(td,j＝8.8,3.9hz,2h),3.91–3.83(m,2h),3.32(s,3h),3.08(t,j＝8.3hz,2h),1.93(d,j＝6.4hz,2h),1.70–1.51(m,5h),1.47–1.28(m,3h),0.80(t,j＝7.4hz,3h)。
实施例45
除了在步骤g中用嘧啶-4-胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例45的化合物。
ms(esi)[m+h]+：338.38。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.74(dd,j＝4.5,1.4hz,1h),8.47(dd,j＝8.4,1.4hz,1h),7.94(d,j＝1.9hz,1h),7.89(dd,j＝8.4,2.0hz,1h),7.47(dd,j＝8.4,4.5hz,1h),7.07(d,j＝8.4hz,1h),4.19(q,j＝6.8hz,1h),3.42(s,3h),2.53–2.46(m,1h),1.18(s,3h),1.07–0.99(m,1h),0.87–0.81(m,1h),0.67(dt,j＝10.1,4.8hz,1h),0.61–0.53(m,1h)。
实施例46
除了在步骤g中用2-氟苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例46的化合物。
ms(esi)[m+h]+：354.18。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.47(t,j＝8.0hz,1h),8.08(s,1h),7.68(d,j＝1.9hz,1h),7.36(dd,j＝8.2,1.9hz,1h),7.18(dd,j＝13.7,5.5hz,1h),7.15–7.04(m,2h),6.99(d,j＝8.3hz,1h),4.16(q,j＝6.8hz,1h),3.38(s,3h),2.56–2.45(m,1h),1.19(d,j＝6.8hz,3h),1.05(dt,j＝10.9,5.2hz,1h),0.88–0.80(m,1h),0.65(dt,j＝10.1,4.4hz,1h),0.56(dt,j＝10.2,4.1hz,1h)。
实施例47
除了在步骤g中用3-氟-4-甲基苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例47的化合物。
ms(esi)[m+h]+：368.18。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.96(d,j＝12.5hz,1h),7.66(d,j＝1.9hz,1h),7.56(dd,j＝11.5,1.9hz,1h),7.31(dd,j＝8.3,1.9hz,1h),7.21–7.17(m,1h),7.13(t,j＝8.2hz,1h),6.93(d,j＝8.3hz,1h),4.14(q,j＝6.8hz,1h),3.36(s,3h),2.52–2.39(m,1h),2.25(s,3h),1.16(d,j＝6.9hz,3h),1.00(dd,j＝12.2,7.4hz,1h),0.86–0.76(m,1h),0.67–0.58(m,1h),0.58–0.49(m,1h)。
实施例48
除了在步骤g中用环戊基胺代替对甲苯基胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例48的化合物。
ms(esi)[m+h]+：328.25。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.59(d,j＝1.9hz,1h),7.16(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),6.89(d,j＝8.3hz,1h),6.06(d,j＝7.1hz,1h),4.44–4.32(m,1h),4.12(q,j＝6.9hz,1h),3.34(s,3h),2.52–2.40(m,1h),2.17–2.03(m,2h),1.76–1.68(m,2h),1.68–1.62(m,2h),1.56–1.43(m,2h),1.15(d,j＝6.9hz,3h),1.02(ddd,j＝10.9,8.5,5.5hz,1h),0.84–0.73(m,1h),0.67–0.56(m,1h),0.57–0.47(m,1h)。
实施例49
除了在步骤g中用n-甲基环戊基胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例49的化合物。
ms(esi)[m+h]+：342.24。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.15(s,1h),6.91(d,j＝1.4hz,2h),4.19(s,1h),4.11(q,j＝6.8hz,1h),3.34(s,3h),2.93(s,3h),2.44–2.37(m,1h),1.68(s,7h),1.52(d,j＝6.9hz,1h),1.15(d,j＝6.9hz,3h),0.99–0.90(m,1h),0.78(ddd,j＝11.2,10.4,6.5hz,1h),0.68–0.57(m,1h),0.51(ddt,j＝10.2,6.3,4.1hz,1h)。
实施例50
除了在步骤g中用2,4,6-三甲基苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例50的化合物。
ms(esi)[m+h]+：378.48。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.71(d,j＝1.9hz,1h),7.40(dd,j＝8.2,1.9hz,1h),7.32(s,1h),6.98(d,j＝8.2hz,1h),6.94(s,2h),4.16(q,j＝6.9hz,1h),3.39(s,3h),2.54–2.46(m,1h),2.29(s,3h),2.26(s,6h),1.19(d,j＝6.9hz,3h),1.06–0.99(m,1h),0.82(dd,j＝12.9,7.9hz,1h),0.64(dd,j＝10.3,4.4hz,1h),0.58(dd,j＝10.2,4.1hz,1h)。
实施例51
除了在步骤g中用2,5-二甲基二氢吲哚代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例51的化合物。
ms(esi)[m+h]+：390.21。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.27(s,1h),7.22(s,1h),7.07(d,j＝7.8hz,1h),7.03(s,1h),6.97–6.89(m,1h),6.83(s,1h),4.78(s,1h),4.19–4.06(m,1h),3.44–3.32(m,4h),2.59(d,j＝15.5hz,1h),2.37(s,1h),2.28(s,3h),1.33–1.22(m,3h),1.17(d,j＝6.8hz,3h),0.98–0.86(m,1h),0.81–0.69(m,1h),0.61(dd,j＝10.4,4.2hz,1h),0.55(dd,j＝10.3,4.0hz,1h)。
实施例52
除了在步骤g中用2-甲基二氢吲哚代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例52的化合物。
ms(esi)[m+h]+：376.26。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.21(s,1h),7.19(s,1h),7.09(d,j＝8.7hz,1h),7.02(s,1h),6.99(d,j＝7.2hz,1h),6.95(s,1h),6.94–6.89(m,1h),4.77(s,1h),4.17–4.06(m,1h),3.43(dd,j＝17.3,8.1hz,1h),3.36(d,j＝3.4hz,3h),2.63(dd,j＝15.8,2.9hz,1h),2.35(s,1h),1.25(d,j＝12.0hz,3h),1.16(dd,j＝6.8,2.2hz,3h),0.96–0.83(m,1h),0.79–0.69(m,1h),0.65–0.57(m,1h),0.57–0.48(m,1h)。
实施例53
除了在步骤b中用3-溴苄胺代替环丙胺；在步骤g中用苯胺代替对甲基苯胺以外，采用与实施例20中相同的方法制备实施例53的化合物。
ms(esi)[m+h]+：464.11。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.69(s,1h),7.60(s,1h),7.58(s,1h),7.49(s,1h),7.42(d,j＝8.2hz,1h),7.36(t,j＝6.4hz,2h),7.33(dd,j＝6.7,1.5hz,1h),7.29(d,j＝7.7hz,1h),7.23(s,1h),7.21(d,j＝7.8hz,1h),7.14(t,j＝7.4hz,1h),7.01(d,j＝8.3hz,1h),4.62(d,j＝14.8hz,1h),4.15(d,j＝14.9hz,1h),4.02(q,j＝6.8hz,1h),3.44(s,3h),1.14(d,j＝6.8hz,3h)。
实施例54和55
试剂与条件：a)2-溴丙酰溴，碳酸钠，二氯甲烷，室温反应2小时；b)环丙胺，乙腈，n,n-二异丙基乙胺(dipea)，80℃回流12小时；c)n,n-二异丙基乙胺(dipea)，n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，150℃反应过夜；d)氢化钠，n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，碘甲烷，室温反应1小时；e)对甲基苯磺酰胺，烯丙基氯化钯二聚体，2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三异丙基联苯(tbuxphos)，碳酸钾，2-甲基四氢呋喃，80℃反应24小时；f)2,4-二甲基苯胺，4-二甲氨基吡啶，六羰基钼，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯，1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(dbu)，三乙胺，二氧六环，85℃回流24小时。
实施例54的化合物的制备：
a)化合物a(1g,3.97mmol)溶于干燥的10ml二氯甲烷中，冷却至0℃，加入碳酸钠(0.42g,3.97mmol)和2-溴丙酰溴(0.5ml,4.77mmol)，然后室温反应2小时，用tlc监测反应，反应完之后用二氯甲烷(20ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得1.2g白色固体b，产率78.43％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.70(s,1h),8.54(d,j＝8.5hz,1h),7.46(d,j＝8.5hz,1h),4.59(q,j＝7.1hz,1h),1.99(d,j＝7.1hz,3h).
b)化合物b(1g,2.59mmol)溶于8ml乙腈中，加入dipea(1.13ml,6.48mmol)和环丙胺(0.18ml,2.59mmol),然后80℃回流12小时，用tlc监测反应，反应完之后蒸干溶剂，用二氯甲烷(20ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～10％梯度洗脱，得0.8g白色固体c，产率85.11％。ms(esi)[m+h]+：362.02；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.03(s,1h),8.67(dd,j＝9.3,8.5hz,1h),7.39(t,j＝8.8hz,1h),3.43(p,j＝7.2hz,1h),2.39–2.26(m,1h),1.43(dd,j＝9.3,7.2hz,3h),0.54(ddd,j＝12.2,4.9,3.3hz,1h),0.47(tdd,j＝9.2,7.4,4.0hz,3h).
c)化合物c(0.8g,2.22mmol)溶于8mldmf中，加入dipea(0.77ml,4.44mmol),然后150℃回流12小时，用tlc监测反应，反应完之后蒸干溶剂，用乙酸乙酯(20ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～20％梯度洗脱，得0.5g白色固体d，产率79.37％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.61(s,1h),6.93(d,j＝7.9hz,1h),6.89(d,j＝7.8hz,1h),4.00(q,j＝6.9hz,1h),2.65–2.58(m,1h),1.21(d,j＝6.9hz,3h),0.94(dt,j＝11.5,6.6hz,1h),0.68(dt,j＝9.3,6.7hz,1h),0.61(dd,j＝10.6,5.5hz,1h),0.46(dd,j＝10.3,4.6hz,1h).
d)化合物d(0.5g,1.77mmol)溶于4ml的dmf中，冷却至0℃，加入氢化钠(0.13g,5.31mmol)，0℃反应半小时后加入碘甲烷(0.22ml,3.54mmol),然后室温反应1小时，用tlc监测反应，反应完之后冷却至0℃，加入稀盐酸调ph至7～8，然后用二氯甲烷(15ml*2)和15ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水30ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～25％梯度洗脱，得到0.4g无色透明液体e，产率76.19％。ms(esi)[m+h]+：296.18；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ6.81(d,j＝8.1hz,1h),6.76(d,j＝8.0hz,1h),4.08(q,j＝6.9hz,1h),3.17(s,3h),2.61–2.50(m,1h),1.16(d,j＝6.9hz,3h),0.98–0.89(m,1h),0.68–0.57(m,1h),0.50–0.36(m,2h).
e)化合物e(0.2g,0.68mmol)和对甲基苯磺酰胺(0.175g,1.02mmol)和碳酸钾(0.19g,1.36mmol)溶于2-甲基四氢呋喃中，用氮气换气再加入烯丙基氯化钯二聚体(6mg,0.014mmol)，tbuxphos(6mg,0.014mmol),再用氮气换气，然后80℃反应24小时，用tlc监测反应，反应完之后用乙酸乙酯(10ml*2)和10ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水20ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～30％梯度洗脱，得到0.15g白色固体f，即化合物54，产率57.25％。ms(esi)[m+h]+：387.19；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝8.3hz,2h),7.28(s,2h),7.04(s,1h),6.98(d,j＝8.3hz,1h),6.75(d,j＝8.3hz,1h),4.14(q,j＝6.8hz,1h),3.25(s,3h),2.47(dd,j＝7.0,3.3hz,1h),2.40(s,3h),1.21(d,j＝6.9hz,3h),0.87(d,j＝5.3hz,1h),0.75–0.64(m,1h),0.49(d,j＝5.1hz,1h),0.36(d,j＝4.9hz,1h).
实施例55的化合物的制备：
步骤a)-d)的制备方法和制备实施例54时使用的方法相同，
f)化合物e(0.2g,0.68mmol)、2,4-二甲基苯胺(0.165g,1.36mmol)、三乙胺(0.189ml,1.36mmol)以及4-二甲氨基吡啶(0.083g,0.68mmol)溶于二氧六环中，用氮气换气之后加入六羰基钼(0.09g,0.34mmol)，用氮气换气之后加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(55mg,0.068mmol)，用氮气换气之后加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(0.153ml,1.02mmol),再用氮气换气，然后85℃反应24小时，用tlc监测反应，反应完之后用乙酸乙酯(10ml*2)和10ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水20ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～30％梯度洗脱，得到0.15g红色固体g，即化合物55，产率56.82％。ms(esi)[m+h]+：365.22；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.94(s,1h),8.23(d,j＝8.2hz,1h),7.82(d,j＝8.0hz,1h),7.21(d,j＝8.1hz,1h),7.09(d,j＝8.6hz,1h),7.03(s,1h),4.29(q,j＝6.8hz,1h),3.36(s,3h),2.82–2.69(m,1h),2.37(s,3h),2.31(s,3h),1.33(d,j＝6.9hz,3h),1.11–1.03(m,1h),0.87–0.85(m,2h),0.67(d,j＝3.7hz,1h).
实施例56
除了在步骤f中用5-甲基二氢吲哚代替2,4-二甲基苯胺以外，采用与实施例55中相同的方法制备实施例56的化合物。
ms(esi)[m+h]+：377.22。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.19(d,j＝7.8hz,1h),7.55(d,j＝8.1hz,1h),7.17(d,j＝8.1hz,1h),7.07(s,1h),7.05(s,1h),4.80(dd,j＝20.2,9.3hz,1h),4.37–4.30(m,1h),4.25(q,j＝6.9hz,1h),3.35(s,3h),3.11(t,j＝8.2hz,2h),2.69(s,1h),2.33(s,3h),1.27(d,j＝6.9hz,3h),0.98(s,1h),0.78(s,1h),0.61(s,2h)。
实施例57
除了在步骤f中用二氢吲哚代替2,4-二甲基苯胺以外，采用与实施例55中相同的方法制备实施例57的化合物。
ms(esi)[m+h]+：363.13。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.33(s,1h),7.57(s,1h),7.27(s,1h),7.25(s,1h),7.20(d,j＝8.0hz,1h),7.09(s,1h),4.82(s,1h),4.41–4.32(m,1h),4.28(d,j＝6.7hz,1h),3.38(s,3h),3.18(t,j＝8.1hz,2h),2.72(s,1h),1.30(d,j＝6.9hz,3h),1.01(s,1h),0.80(s,1h),0.63(s,2h)。
实施例58
除了在步骤f中用4-甲基二氢吲哚代替2,4-二甲基苯胺以外，采用与实施例55中相同的方法制备实施例58的化合物。
ms(esi)[m+h]+：377.22。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.16(d,j＝7.3hz,1h),7.53(d,j＝7.9hz,1h),7.17(d,j＝8.0hz,2h),6.89(d,j＝7.3hz,1h),4.82(d,j＝10.5hz,1h),4.34(dt,j＝11.8,7.9hz,1h),4.25(q,j＝6.8hz,1h),3.34(s,3h),3.05(t,j＝8.3hz,2h),2.69(s,1h),2.26(s,3h),1.27(d,j＝6.9hz,3h),0.97(d,j＝11.4hz,1h),0.78(s,1h),0.61(s,2h)。
实施例59
除了在步骤f中用2,5-二甲基二氢吲哚代替2,4-二甲基苯胺以外，采用与实施例55中相同的方法制备实施例59的化合物。
ms(esi)[m+h]+：391.17。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.26(s,1h),7.58(s,1h),7.17(d,j＝8.0hz,1h),7.05(s,1h),5.79(s,1h),4.25(s,1h),3.42(d,j＝8.7hz,1h),3.39(s,1h),3.35(s,3h),2.64(s,2h),2.33(s,3h),1.29(s,6h),1.05–0.90(m,1h),0.77(s,1h),0.60(s,2h)。
实施例60
试剂与条件：a)二氢吲哚，三乙酰氧基硼氢化钠，1,2-二氯乙烷，0℃，2小时；b)环丙胺，1,2-二氯乙烷，80℃回流12小时；c)二水合二氯化锡，浓盐酸，0℃—室温，3小时；d)1.2-溴丙酰溴，n,n-二异丙基乙胺(dipea)，二氯甲烷，室温反应2小时；2.乙腈，dipea，80℃反应过夜；e)氢化钠，n,n-二甲基甲酰胺(dmf)，碘甲烷，室温反应1小时。
a)化合物a(1.7g,10.07mmol)溶于10ml1,2-二氯乙烷中，冷却至0℃，加入二氢吲哚(1g,8.39mmol)，0℃反应半小时后加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.14g,10.07mmol)，然后0℃反应2小时，用tlc板监测，反应完后用二氯甲烷(20ml*2)和20ml饱和碳酸氢钠萃取，合并有机层，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～3％梯度洗脱，得1.7g红色油状液体b，产率74.43％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.06(t,j＝8.0hz,1h),7.39–7.29(m,2h),7.16(d,j＝7.2hz,1h),7.07(t,j＝7.7hz,1h),6.75(t,j＝7.4hz,1h),6.40(d,j＝7.8hz,1h),4.32(s,2h),3.41(t,j＝8.2hz,2h),3.06(t,j＝8.3hz,2h).
b)化合物b(1.7g,6.24mmol)溶于10ml1,2-二氯乙烷中，加入环丙胺(0.86ml,12.48mmol)，然后80℃反应12小时，用tlc板监测，反应完后蒸干溶剂，用二氯甲烷(20ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得1.8g红色固体c，产率93.26％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.18–8.08(m,2h),7.30(s,1h),7.13(d,j＝7.3hz,1h),7.07(t,j＝7.7hz,1h),6.74–6.67(m,2h),6.49(d,j＝7.8hz,1h),4.27(s,2h),3.40(t,j＝8.3hz,2h),3.03(t,j＝8.3hz,2h),2.59–2.47(m,1h),0.84(q,j＝6.7hz,2h),0.65–0.57(m,2h).
c)化合物c(1.8g,5.82mmol)溶于4ml浓盐酸中，加入二水合二氯化锡(6.24g,27.65mmol)的浓盐酸(4ml)溶液，然后室温反应3小时，用tlc板监测，反应完后用饱和碳酸氢钠中和ph至7～8，然后用乙酸乙酯(20ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相蒸干得1.4g红色油状液体d，产率85.89％。
d)化合物d(1.4g,5.01mmol)溶于干燥的8ml二氯甲烷中，冷却至0℃，加入dipea(1.75ml,10.02mmol)和2-溴丙酰溴(0.63ml,6.01mmol)，然后室温反应2小时，用tlc板监测，反应完后用二氯甲烷(20ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水40ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～15％梯度洗脱，得到200mg黄色固体中间体，1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.72(s,1h),7.20(d,j＝8.0hz,1h),7.15(s,1h),7.10(d,j＝7.1hz,1h),7.05(d,j＝7.6hz,1h),6.80(d,j＝7.0hz,1h),6.67(t,j＝7.4hz,1h),6.55(d,j＝7.8hz,1h),4.58(q,j＝7.0hz,1h),4.24(s,2h),3.33(t,j＝8.3hz,2h),2.98(t,j＝8.3hz,2h),2.43(dt,j＝10.1,3.4hz,1h),1.97(d,j＝7.0hz,3h),0.71(q,j＝6.5hz,2h),0.51–0.45(m,2h).；该中间体溶于2ml乙腈中，加入1mldipea，然后80℃反应过夜，用tlc板监测，反应完后蒸干溶剂，用二氯甲烷(10ml*2)和10ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水20ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相未纯化直接蒸干得到0.15g浅黄色粉末e，总产率8.98％。
e)化合物e(0.1g,0.30mmol)溶于2mldmf中，冷却至0℃，加入氢化钠(22mg,0.90mmol)，0℃反应半小时，在0℃条件下加入碘甲烷(37ul,0.60mmol)，然后室温反应1小时，用tlc板监测，反应完后用饱和碳酸氢钠中和ph至7～8，然后用乙酸乙酯(10ml*2)和20ml水萃取，合并有机层，用饱和食盐水20ml反萃取一次，有机相无水硫酸钠干燥，有机相硅胶拌样通过快速色谱柱纯化，使用乙酸乙酯/石油醚＝0～25％梯度洗脱，得到40mg白色粉末f，即化合物60，产率38.38％。ms(esi)[m+h]+：347.99。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.10(s,2h),7.06(d,j＝7.8hz,1h),6.87(s,2h),6.67(t,j＝7.3hz,1h),6.56(d,j＝7.8hz,1h),4.24(q,j＝14.8hz,2h),4.10(q,j＝6.8hz,1h),3.39–3.28(m,5h),2.98(t,j＝8.4hz,2h),2.35(s,1h),1.17(d,j＝6.8hz,3h),0.86(dd,j＝12.1,6.4hz,1h),0.79–0.71(m,1h),0.65–0.57(m,1h),0.48(d,j＝4.4hz,1h).
药理试验实施例
一.溴结构域识别蛋白brd4抑制剂酶活性测试方法
采用荧光各异向性测试方法(fluorescenceanisotropy，fa)测试化合物与brd4(i)的结合活性。fa测试的原理是通过检测荧光素标记的小分子与其它分子相互作用前后分子量的变化，计算水平方向及垂直方向的荧光偏振值作相关分析。如果被荧光标记小分子与大分子之间的结合平衡建立后，它受激发时运动慢，测得的荧光偏振光值会增高。如果荧光标记小分子与大分子之间的结合被其它配基取代，它在游离状态下的旋转或翻转速度会变快，发射光相对于激发光平面将去偏振化，测得的偏振光值降低，从而计算出样品的荧光各异向性。
荧光底物1为连接荧光分子的(+)-jq1，工作浓度为5nm。brd4(i)蛋白工作浓度为40nm，总反应体系为40μl，缓冲液为50mm的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)ph7.4，150mmnacl，0.5mm3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(chaps)。化合物初筛浓度为1μm，对该条件下抑制率大于60％的化合物测定其ic50。考虑到化合物的溶解性及dmso对测定的影响，选定dmso终浓度为5％。所有测定均在该条件下进行。所有成分混合后室温下避光反应4h或4℃过夜反应后测定各向异性值。测试采用康宁(corning)公司全黑、低边、nbs表面的384孔微孔板(货号为cls3575)，测试仪器为bioteksynergy2检测仪，激发(excitation)为485nm，发射(emission)为530nm。以缓冲液为系统读数空白值。
数值处理：抑制率＝(c-f)/(c-b)×100％(公式1)
其中：c：荧光底物与蛋白完全结合的各向异性值
b：荧光底物各向异性本底值
f：化合物相应浓度下的各向异性值
以化合物浓度和相应的抑制率作s曲线。得到相应化合物的ic50。
brd4酶活性检测方法fa中使用的荧光底物1
药理学数据：以下表1中公布了本发明化合物的药理学试验结果，测试中采用的对照为溴结构域蛋识别白brd4抑制剂(+)-jq1。
表1溴结构域蛋白brd4抑制剂酶活性测试结果
根据表1可以看出很多化合物的分子活性较好，尤其是化合物27、30、35、37和41的分子活性比阳性(+)-jq1稍强。总结构效关系可以发现，r1位取代基为甲基活性较好，氢原子以及乙基活性均降低；r2位取代基为甲基活性较好，乙基以及异丁基活性均降低，且取代基的构型对活性影响不大；r3位取代基为环丙基活性较好，异丙基以及环戊基取代活性均稍微降低，异丁基、2-甲氧基乙基等其它更大的取代基活性均降低；r4位为母核苯环连接羧酸且羧酸连接不同的氨基形成酰胺时活性较好，其中酰胺氮原子上为甲基取代或者乙基取代时比无取代活性进一步提高。
二.溴结构域识别蛋白brd4抑制剂细胞活性测试方法
细胞活性测试共测试了ht-29、mm.1s和ty-82三种细胞株，测试方法分别为(1)ht-29细胞：采用人结肠癌ht-29细胞，分别加入化合物处理72h，用srb法检测化合物的增殖生长抑制作用及其程度；(2)mm.1s细胞：采用人骨髓瘤细胞mm.1s，化合物处理72h，用atp消耗法检测化合物的增殖生长抑制作用及其程度；(3)ty-82细胞：采用nut-brd4中线癌ty-82细胞，化合物处理72h，用srb法检测化合物的增殖生长抑制作用。
药理学数据：以下表2中公布了部分本发明化合物的药理学试验结果，测试中采用的对照为溴结构域蛋识别白brd4抑制剂(+)-jq1。
根据表2可以看出化合物对mm.1s和ty-82细胞株的敏感度比ht-29细胞株的敏感度高，且化合物37和39对ty-82细胞株的活性非常好，即当r4位为母核苯环连接羧酸且羧酸连接4-甲基或者5-甲基吲哚啉时活性非常好。
三.化合物在肝微粒体的代谢稳定性及酶抑制性质测试方法
3.1代谢稳定性试验测试方法
用体系为150μl的肝微粒体(终浓度0.5mg/ml)进行代谢稳定性温孵，体系含还原型辅酶ⅱ(nadph)(终浓度1mm)和1μm化合物、阳性对照或阴性对照，分别在0min、5min、10min和30min用含(丙米嗪，批号：3221；替硝唑，批号：t3021)的乙腈终止反应，涡旋10min，15000rmp离心10min，取50μl上清于96孔板中进样。通过测定原药的相对减少量计算化合物代谢稳定性。
3.2直接抑制试验(di试验)测试方法
用体系为100μl的人肝微粒体(终浓度0.2mg/ml)进行直接抑制温孵，体系含nadph(终浓度1mm)、10μm化合物、阳性抑制剂混合剂cocktail(酮康唑ketoconazole10μm，奎尼丁quinidine10μm，磺胺苯吡唑sulfaphenazole100μm，萘黄酮naphthoflavone10μm，反苯环丙胺tranylcypromine1000μm)、阴性对照10μmdmso和混合探针底物(咪达唑仑midazolam10μm、睾酮testosterone100μm、右美沙芬dextromethophan10μm、二氯酚酸diclofenac20μm、非那西丁phenacetin100μm，美芬妥英mephenytoin100μm)，温孵20min后终止反应。通过测定代谢物的相对生成量计算酶相对活性。
3.3机制性抑制试验(tdi试验)测试方法
用体系为200μl的人肝微粒体(终浓度0.2mg/ml)进行机制性抑制温孵，10μm化合物、混合阳性抑制剂(醋竹桃霉素troleandomycin10μm、帕罗西汀paroxetine10μm、替尼酸tienilicacid10μm、呋拉茶碱furafylline10μm)或10μm阴性对照pro，在加入nadph(终浓度1mm)或pbs后预温孵0min、5min、10minh和30min后加入nadph(终浓度1mm)和混合探针底物(咪达唑仑midazolam5μm、睾酮testosterone50μm、右美沙芬dextromethophan5μm、二氯酚酸diclofenac10μm、非那西丁phenacetin50μm、s-(+)-美芬妥英s-(+)-mephenytoin50μm)，温孵10min后终止反应。阳性抑制剂cyp2c19单独做，抑制剂s-(+)-氟西汀s-(+)-fluoxetine100μm。通过测定代谢物的相对生成量计算酶活性。计算kobs。
药理学数据：以下表3中公布了部分本发明化合物的药理学试验结果。
表3肝微粒体的代谢稳定性及酶抑制性质测试结果
根据表3可以看出，r4位为母核苯环连接羧酸且羧酸连接不同的氨基形成酰胺时体外代谢稳定性较好，尤其是与对甲苯胺、2,4-二甲基苯胺、3-氟-4-甲基苯胺形成的酰胺。