子、受体、融合蛋白、激酶和G蛋白偶联受体（GPCR)。
4. 权利要求1或2的修饰的蛋白酶或其生物学活性部分，其中所述靶蛋白选自肿瘤坏 死因子受体、白介素-1、白介素-1受体、白介素-2、白介素-2受体、白介素-4、白介素-4 受体、白介素-5、白介素_5受体、白介素-12、白介素-12受体、白介素-13、白介素-13受 体、P选择蛋白、P选择蛋白糖蛋白配基、P物质、缓激肽、凝血因子IX、免疫球蛋白E、免疫球 蛋白E受体、CCR5、CXCR4、糖蛋白120、糖蛋白41、⑶4、血凝素、呼吸道合胞病毒融合蛋白、 B7、⑶28、⑶2、⑶3、⑶4、⑶40、血管内皮生长因子、VEGF受体、成纤维细胞生长因子、FGF受 体、内皮生长因子、EGF受体、转化生长因子、TGF受体、CCRl、CXCR3、CCR2、Src、Akt、Be 1 -2、 BCR-Ab 1、胰高血糖素合酶激酶-3、细胞色素 c、Apaf-I、半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-9、半胱 天冬酶-7、半胱天冬酶-6、半胱天冬酶-2、BAD、BID、BAX、PARP、p53、cdk-2和cdk-4。
5. 权利要求1或2的修饰的蛋白酶或其生物学活性部分，其相比于所述蛋白酶支架含 有 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 个突变。
6. 权利要求1或2的修饰的蛋白酶或其生物学活性部分，其中所述靶蛋白涉及选自如 下的病理：类风湿性关节炎、败血症、癌症、艾滋病、呼吸道感染、流行性感冒、心血管疾病、 炎症、哮喘、神经退行性疾病、缺血性和再灌注细胞死亡、退行性疾病和急性缺血损伤。
7. 权利要求1或2的修饰的蛋白酶或其生物学活性部分，其中所述蛋白酶支架是蛋白 酶的生物学活性部分。
8. 权利要求5的修饰的蛋白酶或其生物学活性部分，其中所述蛋白酶支架是蛋白酶的 生物学活性部分。
9. 一种产生断裂涉及疾病的靶蛋白的修饰的蛋白酶治疗剂的方法，包括： 选择涉及疾病的靶； 在是膜型丝氨酸蛋白酶-I(MT-SPl)的丝氨酸蛋白酶支架中在选自胰凝乳蛋白酶编号 的氨基酸位置97、98、99和100的氨基酸位置引入突变，或者在是尿激酶型纤溶酶原激活物 (uPA)的丝氨酸蛋白酶支架中在氨基酸位置99引入突变；及 鉴别相比于所述蛋白酶支架显示增加的特异性并且以增加的特异性断裂涉及疾病的 靶蛋白中底物序列的修饰的蛋白酶。
10. 权利要求9的方法，其中相比于所述支架蛋白酶，特异性增加至少10倍、100倍或 1000 倍。
11. 权利要求9或10的方法，其中所述靶蛋白选自细胞因子、受体、融合蛋白、激酶和G 蛋白偶联受体（GPCR)。
12. 权利要求9或10的方法，其中所述靶蛋白选自肿瘤坏死因子受体、白介素-1、白介 素-1受体、白介素-2、白介素-2受体、白介素-4、白介素-4受体、白介素-5、白介素-5受 体、白介素-12、白介素-12受体、白介素-13、白介素-13受体、P选择蛋白、P选择蛋白糖蛋 白配基、P物质、缓激肽、凝血因子IX、免疫球蛋白E、免疫球蛋白E受体、CCR5、CXCR4、糖蛋 白120、糖蛋白41、⑶4、血凝素、呼吸道合胞病毒融合蛋白、B7、⑶28、⑶2、⑶3、⑶4、⑶40、 血管内皮生长因子、VEGF受体、成纤维细胞生长因子、FGF受体、内皮生长因子、EGF受体、 转化生长因子、TGF受体、CCRl、CXCR3、CCR2、Src、Akt、Bcl-2、BCR-Abl、胰高血糖素合酶激 酶-3、细胞色素 c、Apaf-I、半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-9、半胱天冬酶-7、半胱天冬酶-6、 半胱天冬酶-2、BAD、BID、BAX、PARP、p53、cdk-2 和 cdk-4。
13. 权利要求9或10的方法，其中所述修饰的蛋白酶相比于所述蛋白酶支架含有1、2、 3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 个突变。
14. 权利要求9或10的方法，其中所述靶蛋白涉及选自如下的病理：类风湿性关节炎、 败血症、癌症、艾滋病、呼吸道感染、流行性感冒、心血管疾病、炎症、哮喘、神经退行性疾病、 缺血性和再灌注细胞死亡、退行性疾病和急性缺血损伤。
15. 权利要求9或10的方法，其中所述蛋白酶支架是蛋白酶的生物学活性部分。
16. 权利要求12的方法，其中所述蛋白酶支架是蛋白酶的生物学活性部分。
17. 蛋白酶作为支架用于制备断裂涉及疾病或病理的靶蛋白的治疗剂的用途，其中： 所述支架蛋白酶是膜型丝氨酸蛋白酶-I(MT-SPl)或尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA); 通过在选自如下氨基酸位置的一或多个氨基酸位置突变所述支架蛋白酶制备治疗剂： 由胰凝乳蛋白酶编号的在氨基酸位置58和64之间、97、98、99、100、171、174、180、189、190、 191、215、217、218 和 226 ;及 所述治疗剂对于所述靶蛋白中的底物序列具有改变的特异性或活性，其中所述靶蛋白 的断裂使所述靶蛋白的活性失活。
18. 权利要求17的用途，其中所述支架蛋白酶是uPA，并且所述突变位于位置99。
19. 权利要求17的用途，其中所述支架蛋白酶是MT-SP1，并且所述突变位于位置98、99 或 100〇
20. 权利要求17-19任一项的用途，所述靶蛋白涉及选自如下的病理：类风湿性关节 炎、败血症、癌症、艾滋病、呼吸道感染、流行性感冒、心血管疾病、炎症、哮喘、神经退行性疾 病、缺血性和再灌注细胞死亡、退行性疾病和急性缺血损伤。
21. 权利要求17-19任一项的用途，其中所述突变的蛋白酶相比于所述蛋白酶支架含 有 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20 个突变。
22. 权利要求17-19任一项的用途，其中所述蛋白酶支架是蛋白酶的生物学活性部分。
23. 权利要求21的用途，其中所述蛋白酶支架是蛋白酶的生物学活性部分。
【专利摘要】本发明公开了制备改变对应其剪切目标分子特异性蛋白酶的方法。本发明还公开了使用上述蛋白酶治疗涉及靶蛋白的疾病。使用蛋白酶在特定的底物序列剪切特定靶蛋白是一种治疗上述病症的方法。
【IPC分类】C12N9-74, A61P35-00, C12N9-64, A61P25-28, A61P9-00, C12N9-76, A61K38-48, A61P31-18, A61P31-04, A61P7-00, A61P29-00, A61K38-49, A61P11-06, A61P25-00, C12N9-56, C12Q1-37, C12N9-66, A61P31-16, A61P19-02
【公开号】CN104630192
【申请号】CN201510012744
【发明人】杰克·内盖耶, 克里斯·撒安斯, 桑德拉·沃·拉格斯, 查尔斯·S·克雷克
【申请人】催化剂生物科学有限公司, 加利福尼亚大学董事会
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2003年10月2日
【公告号】CA2501295A1, CN101124484A, EP1608947A2, EP1608947A4, EP2444809A2, EP2444809A3, EP2444810A2, EP2444810A3, US20040146938, US20090136477, WO2004031733A2, WO2004031733A3