、100 μ mol/L化合物（I )对细胞损伤抑制率 分别为16.67%(?〈0.05)和28.21%(卩〈0.01)。作用1211，10、50、10(^111〇1/1化合物（1) 对细胞损伤抑制率提高为 24. 85% (Ρ〈0· 05)，29. 64% (Ρ〈0· 01)和 38. 47% (Ρ〈0· 01)。见表1 (**P〈〇. Olvs Normal ;#Ρ〈0· 05，#P〈0.0 lvs H202group ;ΑΡ〈0· 05，▲▲?〈0· Olvs TMP group， 下同）。
[0050] 2、化合物（I )对H2O2损伤ECV-304细胞LDH释放率的影响
[0051] 乳酸脱氢酶能催化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸与2, 4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸 二硝基苯腙，在碱性溶液中呈棕红色，通过比色测定反应产物可间接求出乳酸脱氢酶活力。 结果表明：与正常组相比，模型组ECV-304细胞LDH释放率显著增高（P〈0. 01)。与模型组 比，化合物（I )各组细胞LDH释放率均减少：10、50、100 μ mol/L化合物（I )作用6h，细 胞的 LDH 释放率降为 20.54% (Ρ〈0·01)和 21.22% (P〈0.01) ;50、100ymol/L 化合物（I ) 作用12h，细胞的LDH释放率降为33.64% (Ρ〈0·01)和29.53% (Ρ〈0·01)。化合物（I ) 随浓度的增加，对氧化损伤ECV-304细胞的保护作用也逐渐增强，呈现出一定的量效关系。 结果见表2。
[0052] 3、化合物（I )对H2O2损伤ECV-304细胞MDA含量、SOD、GSH-Px活力的影响
[0053] 实验结果表明：与正常组比模型组ECV-304细胞培养液中MDA含量显著增高 (Ρ〈0·01)。与模型组相比，10、50、100ymol/L化合物（I )组细胞MDA生成量均明显减少， 分别为 3. 00±0· 79nmol/mL(P〈0. 05)，2· 86±0· 75nmol/mL(P〈0. 05)和 2. 69±0· 45nmol/ mL(P〈0. 01)。化合物（I )各浓度组组间对照显示，随浓度的增加，化合物（I )对ECV-304 细胞脂质过氧化损伤的保护作用也逐渐增强，呈现一定的量效关系。结果见表3。
[0054] 实验结果表明：与正常组相比，模型组ECV-304细胞SOD活性显著降低（P〈0. 01)。 与模型组相比，50、100 μ mol/L化合物（I )均可增强ECV-304细胞的SOD活性，SOD活性 分别提高为 17. 9±1. 34U/mL(P〈0. 05)和 19. 25±0. 81U/mL(P〈0. 01)。且随浓度的增加，细 胞的SOD活性也逐渐提高，表明化合物（I )可增强ECV-304细胞的抗氧自由作用，具一定 量效关系；Ιθμπιο?/L化合物（I )虽也可提高SOD活性，但不具有显著统计学意义。见表 3〇
[0055] 实验结果表明：与正常组相比，模型组ECV-304细胞培养液中GSH-Px活性显著 降低（Ρ〈〇·〇1)。与模型组相比，10、50、100ymol/L化合物（I )组细胞GSH-Px活性均 显著提高，分别为 73. 8±10· 3U/mL(P〈0. 05)，92. 2±8. 5U/mL(P〈0. 01)和 102. 5±10· 3U/ mL(P〈0. 01)。且随化合物（I )浓度的增加，ECV-304细胞的GSH-Px活性也逐渐提高，表 明细胞抗氧化作用的能力也逐渐增强，呈现一定的量效关系。结果见表3。
[0056] 总结：本实验采用H2O2作为外源性自由基生成系统，能够诱导血管内皮细胞 (ECV-304)氧化应激损伤，促进细胞凋亡。通过MTT法和LDH活性检测证实化合物（I )对 H2O2氧化损伤细胞具有保护作用；通过细胞上清液MDA含量、SOD活性、GSH-Px活性的测定， 证实化合物（I )有清除自由基和活性氧的抗氧化特性。
[0057] 表1化合物（I )对H2O2损伤ECV-304细胞生存率的影响（t±::s，η = 8)
[0059] 表2化合物（I )对H2O2损伤ECV-304细胞LDH释放率的影响（X 土s, η = 8)
[0060]
[0061] 表3化合物（I )对H2O2损伤ECV-304细胞MDA含量、SOD、GSH-Px活力的影响
[0063] 实施例3
[0064] 片剂的制备：按实施例1方法先制得化合物（I )，以及利用有机酸如酒石酸、或 柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂重量比为 1:9的比例加入赋形剂，制粒压片。
[0065] 实施例4
[0066] 口服液的制备：按实施例1方法先制得化合物（I )，以及利用有机酸如酒石酸、 或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规口服液制法制 成口服液。
[0067] 实施例5
[0068] 胶囊剂或颗粒剂的制备：按实施例1方法先制得化合物（I )，以及利用有机酸如 酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂 重量比为1:9的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。
[0069] 实施例6
[0070] 注射液的制备：按实施例1方法先制得化合物（I )，以及利用有机酸如酒石酸、 或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规加注射用水，精 滤，灌封灭菌制成注射液。
[0071] 实施例7
[0072] 无菌粉针的制备：按实施例1方法先制得化合物（I )，以及利用有机酸如酒石 酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，将其溶于无菌注射 用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌 熔封得粉针剂。
[0073] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 具有下述结构式的化合物（I)，2. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于包含以下操作步骤：（a)将 南天竹的干燥叶粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油 醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物；（b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱10个柱体积，再 用75%乙醇洗脱12个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c) 步骤（b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、40:1、20:1、10:1和 1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分3用正相硅胶进一步分 离，依次用体积比为25:1、20:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步 骤（d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶 液等度洗脱，收集9~13个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。3. 根据权利要求2所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于：所述大孔树脂为AB-8 型大孔吸附树脂。4. 根据权利要求2所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于：所述用乙醇热回流提 取采用的乙醇浓度为75%。5. -种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（I)和药学上可 接受的载体。6. 权利要求1所述的化合物（I)在制备血管保护的药物中的应用。7. 权利要求5所述的药物组合物在制备血管保护的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种新的木脂素类化合物及其制备方法和医药用途，属于药物领域，具体涉及从南天竹的干燥叶中分离得到的一种新的木脂素类化合物、制备方法和该化合物的医药用途。该化合物为首次报道，可以从南天竹的干燥叶中提取、分离纯化得到，纯度高。体外试验证明该化合物对H2O2氧化损伤细胞具有保护作用，且具有清除自由基和活性氧的抗氧化特性，可以进一步研究开发成制备血管保护的药物。
【IPC分类】C07C41/58, A61P9/14, C07C43/315, A61K31/09
【公开号】CN105218330
【申请号】CN201510642037
【发明人】宋晓梅
【申请人】宋晓梅
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年9月30日