优选地是在合适的包装后进行γ-照射。
[0083] 还可以有利地将根据本发明干的颗粒状细胞培养基用于生产其他经压实的培养 基形式（如片剂或较大的薄片）。为此，将根据本发明干的颗粒状细胞培养基在合适的挤压 机，例如压片机中进一步压实。可以在不添加其他组分的情况下使用颗粒状培养基，或者可 以将其与其他组分如压片辅助剂混合，或者与例如对缓释片剂特定的组分混合或随后用所 述组分包衣。另一方面，可以将干的颗粒状细胞培养基与支持片剂快速溶解的组分，如碳酸 氢钠混合。
[0084] 根据本发明的方法成为干的颗粒状或者经压实的细胞培养基通常包含至少一种 或多种糖类组分、一种或多种氨基酸、一种或多种维生素或者维生素前体、一种或多种盐、 一种或多种缓冲剂组分、一种或多种辅因子以及一种或多种核酸组分。
[0085] 培养基还可以包含脂肪酸和/或脂肪酸衍生物和/或普卢兰尼克酸（pluronic acid)和/或表面活性组分如以化学方法制备的非离子型表面活性剂。合适的非离子型 表面活性剂的一个实例是终止于伯羟基的双功能嵌段共聚物表面活性剂，其例如是以来自 basf，德国的商标名称pluronie翁可得到的。
[0086] 可以将根据本发明干的颗粒状培养基用于与本领域已知的粉末培养基或液体培 养基相同的目的。因为可以容易地处理大量的颗粒状培养基，而没有所讨论的粉末培养基 的缺点，所以所述干的颗粒状培养基可以优选地用于生物药物生产。
[0087] 为了使用，将溶剂，优选地水（最特别地蒸馏水和/或去离子水或者纯化的水或用 于注射的水）或者含水缓冲液加入到干的颗粒状培养基中，并混合组分，直到培养基完全 溶解于溶剂中。
[0088] 溶剂还可以包含盐水、提供1. 0-10. 0的pH范围的可溶性酸离子或碱离子、稳定 剂、表面活性剂、防腐剂和醇或者其他极性有机溶剂。
[0089] 还可能将其他物质，如用于调整pH的缓冲物质、胎牛血清、糖等加入到细胞培养 基和溶剂的混合物中。然后将得到的液体细胞培养基与待生长或者待维持的细胞接触。
[0090] 根据本发明干的颗粒状培养基是容易处理的。与粉末培养基相比较，当处理所述 培养基时，显著降低了其所形成的粉尘的量。
[0091] 根据本发明的培养基可以容易地溶解于溶剂中。重构是快速的，优选地少于30分 钟，更优选地少于15分钟。
[0092] 甚至在运输期间摇动或者振动的情况下，根据本发明干的颗粒状培养基的组合物 仍是均一的。
[0093] 此外，与湿的颗粒状培养基相反，更温和的干颗粒条件允许直接且容易地处理这 样的培养基，其甚至包含热敏感和/或氧化敏感物质如维生素（例如维生素B1)、葡萄糖、硫 胺素、铁盐或包含二硫键的组分。
[0094] 通过以下附图和实施例进一步说明了本发明，而并非限制本发明。
[0095] 将以上和以下引用的所有申请、专利和出版物，以及在2010年12月16日提交的 相应美国临时申请61/423, 700的全部公开内容并入本文作为参考。 实施例
[0096] 以下实施例代表了本发明的实际应用。
[0097] 1. Dulbecco改良的Eagle培养基的干压实
[0098] Dulbecco改良的Eagle培养基也称为DMEM，是通常用于使动物细胞生长的培养 基。DMEM的成分为（以mg/1计）：
[0099] 无机盐：
[0100] CaCl2(无水):200.00
[0101] Fe(N03) · 9H20 :0· 10
[0102] KC1：400. 00
[0103] MgS04(无水）：97.67
[0104] NaCl :6400. 00
[0105] NaH2P04·H20 :125. 00
[0106] 其他组分：
[0107] D-葡萄糖：4500. 00
[0108]酚红:15. 00
[0109] 丙酮酸钠（Natriumpyruvat) :110. 00
[0110] 氨基酸：
[0111] L-精氨酸HC1 :84· 00
[0112] L-半胱氨酸 2HC1 :63· 00
[0113] L-谷氨酰胺：584· 00
[0114] 甘氨酸：30.00
[0115] L-组氨酸HC1H20 :42· 00
[0116] L-异亮氨酸：105.00
[0117] L-亮氨酸：105. 00
[0118] L-赖氨酸HC1 :146. 00
[0119] L-甲硫氨酸：30· 00
[0120] L-苯丙氨酸：66. 00
[0121] L-丝氨酸：42.00
[0122] L-苏氨酸：95.00
[0123] L-色氨酸：16.00
[0124] L-酪氨酸 2Na· 2H20 :104. 33
[0125] L-缬氨酸：94. 00
[0126] 维生素：
[0127] D-泛酸钙：4.00
[0128] 氯化胆碱：4.00
[0129]叶酸:4. 00
[0130] i-肌醇：7.20
[0131] 烟酰胺：4.00
[0132]核昔素:0. 40
[0133] 硫胺素HC1 :4.00
[0134] 混合DMEM的全部成分，并在卧式研磨机中研磨，以产生均一的干粉末。将30kg粉 末进料到具有以下特征的辊式压制机中：
[0135] -凹平面辊
[0136] -$昆间距离：1.5mm
[0137] -辊间空隙的长度：10cm
[0138] -挤压力：5〇kN
[0139] 得到的物质显示出较大压实物的更百分比。在具有3mm筛眼孔径的振动筛磨机 (型号FC200,B印exGmbH)中筛滤得到的物质。
[0140] 将具有低于0.2_大小（直径）的颗粒级分再引入到辊式压制机中。获得具有大 于75 %的颗粒具有l-3mm大小的干颗粒状DMEM培养基。
【主权项】
1. 不包含蛋白胨或胰蛋白胨的干的颗粒状细胞培养基用于培养细胞的用途，所述培养 基通过如下方法制备 a) 以培养基组分的混合粉末形式提供细胞培养基，所述细胞培养基包含一种或多种 糖类组分、一种或多种氨基酸、一种或多种维生素、一种或多种盐、一种或多种缓冲剂组分、 一种或多种辅因子以及一种或多种核酸组分，其中所述细胞培养基不包含蛋白胨或胰蛋白 胨； b) 在辊式压制机中压实所述混合的粉末， 通过以下步骤实现所述用途： a) 在溶剂中溶解所述不包含蛋白胨或胰蛋白胨的干的颗粒状细胞培养基，以形成液体 细胞培养基； b) 将所述液体细胞培养基与待培养的所述细胞接触。2. 权利要求1的用途，其中所述培养基通过如下方法制备 a) 以培养基组分的混合粉末形式提供细胞培养基，所述细胞培养基包含一种或多种 糖类组分、一种或多种氨基酸、一种或多种维生素、一种或多种盐、一种或多种缓冲剂组分、 一种或多种辅因子以及一种或多种核酸组分，其中所述细胞培养基不包含蛋白胨或胰蛋白 胨； b) 在辊式压制机中压实所述混合的粉末， 其特征在于如下实施步骤b): bl)在辊式压制机中压实所述混合的粉末； b2)将步骤bl)中获得的具有小于0.5mm颗粒大小的经压实的所述细胞培养基的所有 部分以待填充到辊式压制机中的培养基组分的混合粉末形式再引入到所述细胞培养基中。3. 根据权利要求1或2的用途，其特征在于所述不包含蛋白胨或胰蛋白胨的干的颗粒 状细胞培养基是哺乳动物细胞培养基。4. 权利要求1 一 3任一项的用途，其特征在于所述辊式压制机的挤压能力在30至 80kN/cm辊宽之间。5. 权利要求1 一 4任一项的用途，其特征在于辊式压制机的辊之间的间隙大小在0. 5 至3mm之间。6. 权利要求1一5任一项的用途，其特征在于在步骤c)中，将从辊式压制机中压实所 述混合的粉末获得的物质在筛磨机进一步处理。7. 权利要求1 一 6任一项的用途，其特征在于所述颗粒状细胞培养基的大于80%的颗 粒具有大于〇. 5mm的大小。8. 权利要求1 一 7任一项的用途，其特征在于所述颗粒状细胞培养基的大于90%的颗 粒具有大于〇. 5mm的大小。9. 权利要求1一8任一项的用途，其特征在于用于溶解所述不包含蛋白胨或胰蛋白胨 的干的颗粒状细胞培养基以形成液体细胞培养基的溶剂是水。
【专利摘要】本发明涉及不包含蛋白胨或胰蛋白胨的干的颗粒状细胞培养基，尤其涉及支持哺乳动物和/或昆虫和/或植物细胞生长的干的颗粒状细胞培养基制剂。本发明还涉及这些干的颗粒状细胞培养基的生产及其用途。
【IPC分类】C12N5/071
【公开号】CN105274047
【申请号】CN201510679620
【发明人】M·H·雷纳-布兰德斯, X·(D)·赵
【申请人】默克专利有限公司
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2011年11月18日
【公告号】CA2821799A1, CN103261404A, EP2652123A1, EP2652123B1, US20130267027, WO2012079679A1