的之二的技术方案是:上述高危型人乳头状瘤病毒检测方法采用的寡核苷酸序列，为下述Seql和Seq3、或者为下述Seq2和Seq4;
Seql:5 ’-CATCTGCAAAAAAATA-B1tin-3 ’；
Seq2:5 ’-TCAACATCCCAAAA-B1tin-3 ’；
Seq3: 5 ’-NH2-GTCACTAGGCCGCCA-B1tin-3 ’ ；
Seq4: 5 ’-NH2-AAAACTTTTCCTTTA-B1tin-3 ’ ；
上述Seql和Seq2为捕获DNA序列;上述Seq3和Seq4为显示DNA序列。
[0023]实现本发明上述目的之三的技术方案是:上述高危型人乳头状瘤病毒检测方法采用的寡核苷酸探针，包括捕获探针和显示探针;所述捕获探针由上述捕获DNA序列与上述磁性纳米粒子结合得到；所述显示探针由上述显示DNA序列分别与上述CdTe量子点和上述硅纳米粒子结合得到。
[0024]本发明具有的积极效果:(I)本发明的检测方法针对高危型人乳头状瘤病毒设计并合成出两组特异性寡核苷酸序列，将它们分别与量子点、硅纳米粒子结合以及与磁性纳米粒子结合后得到显示探针和捕获探针，通过检测量子点的荧光强度可以判断是否感染高危型人乳头状瘤病毒。(2)本发明的检测方法具有操作简便、成本低、稳定性好、准确性高、灵敏度高等特点，11次重复测量500fmol/L人乳头状瘤病毒的相对标准偏差为1.14%，检出限可达5fmol/L，克服了现有高危型人乳头状瘤病毒检测方法的不足，可作为一种快速、超灵敏的新型技术来检测人乳头状瘤病毒。
【附图说明】
[0025]图1为本发明的实施例1制得的CdTe量子点的透射电子显微镜图。
[0026]图2为本发明的实施例1制得的CdTe量子点的荧光光谱图。
[0027]图3为本发明的实施例1制得的氨基化硅纳米粒子的透射电子显微镜图。
[0028]图4为本发明的实施例1制得的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子的透射电子显微镜图。
[0029]图5为本发明的实施例1制得的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子的X射线衍射图。
[0030]图6为本发明的实施例1检测的不同浓度的目标DNA的荧光强度结果图。
[0031 ]图7为本发明的检测示意图。
[0032]图8为采用不同浓度的捕获探针检测的荧光强度结果图。
[0033]图9为采用不同浓度的硅纳米粒子检测的荧光强度结果图。
【具体实施方式】
[0034](实施例1)
本实施例的高危型人乳头状瘤病毒检测方法具有以下步骤:
SI:设计并合成特异性寡核苷酸序列。
[0035]该特异性寡核苷酸序列包括作为捕获DNA序列的Seql和作为显示DNA序列的Seq3。
[0036]Seql:5’-CATCTGCAAAAAAATA-B1tin-3’；
Seq3: 5 ’-NH2-GTCACTAGGCCGCCA-B1tin-3 ’。
[0037]上述特异性寡核苷酸序列委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成。
[0038]将上述合成的捕获DNA序列用PBS缓冲液配制成1nM的贮存液，显示DNA序列用I3BS缓冲液配制成ΙΟμΜ的贮存液，保存于-20°c，备用。
[0039]S2:分别制备亲和素化的CdTe量子点、戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子以及亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子。
[0040]S21:制备亲和素化的CdTe量子点。
[0041 ] S211:在50mL圆底烧瓶中依次加入0.0319g碲粉、5mL超纯水以及0.0380g硼氢化钠，通入氮气保护，室温(15?25°C，下同)条件下磁力搅拌至溶液变成淡紫色，得到碲氢化钠溶液;在250mL三口圆底烧瓶中依次加入200mL超纯水、0.1142g水合氯化镉以及0.1092g巯基丙酸，用NaOH调节pH至11.2，通入氮气约30min;然后加入前述制得的碲氢化钠溶液，通入氮气保护，加热至120 °C回流;取反应7h后的CdTe量子点溶液。
[0042]通过透射电子显微镜(TEM)对其形貌进行表征，结果见图1;通过荧光分光光度计对其光谱性质进行表征，结果见图2。
[0043]S212:将20yL步骤S211制得的CdTe量子点溶液加入到40yL含有2mg的EDC【l-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺】的1^5溶液中(0.0111101/1，？!1=7.4)，室温下混合51^11，再反应15?20min;然后加入0.5mg的NHS【N-羟基琥珀酰亚胺】，混合15min;最后加入40yL亲和素(lmg/mL)，混合2h，于4°C的温度以及5000rpm的转速下离心15min，以除去未反应的亲和素，用PBS溶液清洗一次后，再离心，得到亲和素化的CdTe量子点，保存于4°C，待用。
[0044]S22:制备戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子。
[0045]S221:在50mL圆底烧瓶中依次加入1.875mL的表面活性剂TX-100、7.5mL环己烷以及1.875mL正己醇，磁力搅拌5min;然后加入340yL超纯水作为分散相，磁力搅拌30min，形成均匀的油包水微胶囊;接着加入10yL的TEOS【正硅酸乙酯】和10yL的APTES【3-氨丙基三乙氧基硅烷】，磁力搅拌5min;接着再加入60yL的氨水，一步催化同时水解TEOS和APTES，磁力搅拌24h;最后加入适量的丙酮进行破乳分离，用乙醇和超纯水各清洗三次，12000rpm离心分离lOmin，得到氨基化硅纳米粒子，烘干，保存备用。通过TEM对其形貌进行表征，结果见图3。
[0046]S222:将5mg步骤S221制得的氨基化硅纳米粒子通过超声分散在含5^%戊二醛的PBS溶液中，置于摇床上室温反应4h; 12000rpm离心1min以除去未连接上的戊二醛溶液，用PBS清洗，再重复两次，最后再用PBS溶液溶解，得到戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子，保存于4°C，待用。
[0047]S23:制备亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子。
[0048]S231:在50mL圆底烧瓶中依次加入6.5g的I，6-己二胺、2.0g无水醋酸钠、1.0g氯化高铁及30mL乙二醇，50 °C下磁力剧烈搅拌均匀；将上述溶液转移到50mL带聚四氟乙烯内衬的高压反应釜中，198°C高温反应6h;将反应后的物料从反应釜中取出并自然冷却至室温，弃去上层液体，用外加磁力分离收集，再在超声条件下，用水和乙醇洗涤2次，将所得黑色固体在50 0C条件下干燥5?1h，得到氨基化Fe3(k磁性纳米粒子。通过TEM对其形貌进行表征，结果见图4;通过X射线衍射(XRD)对其成分及结晶状态进行分析鉴定，结果见图5。
[0049]S232:将5mg步骤S231制得的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子通过超声分散在含5的%戊二醛的PBS溶液中，置于摇床上室温反应4h;通过磁力收集并弃去未连接上的戊二醛溶液，并用PBS溶液清洗三次;加入300yL的亲和素(lmg/mL)，室温反应4h，4°C过夜;将所得到的产物用PBS溶液通过磁力收集清洗三次，再用PBS溶液分散重悬，得到亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子，保存于4°C，待用。
[0050]S3:高危型人乳头状瘤病毒检测。
[0051 ] S31:将400yL步骤S21制得的亲和素化的CdTe量子点溶液与步骤SI中的显示DNA(385yL、ΙΟμΜ)混合24h，使亲和素化的CdTe量子点与显示DNA的生物素化端(3’端)结合;然后加入125yL步骤S22制得的戊二醛交联的氨基化硅纳米粒子溶液【原液浓度为lmg/mL】，室温下温和摇晃反应4h，再放置过夜，然后12000rpm离心1min，弃上清；用含有0.IM的NaCl的?83溶液(0.11、？!1=7.0)冲洗，再离心一次；最后用含有0.31的似(:1的1^3溶液(0.11、？!1=7.0)溶解，得到显示探针，保存于4 °C，待用。
[0052]S32:将10yL步骤S23制得的亲和素化的氨基化Fe3O4磁性纳米粒子加入到试管中，然后加入步骤SI中的捕获DNA( lOOyL、1nM)，37°C反应2h，用I3BS溶液磁力收集洗涤3次，得到捕获探针，保存于4°C，待用。
[0053]S33:高危型人乳头状瘤病毒的荧光检测分析: