frg3(SEQIDN0:57)作为抗原通过ELISA测量免疫前和免疫后给定时 间一个用訂1332肽免疫的患者和一个用訂1 235肽（WT1-CTL肽（修饰的mp235-243)(SEQID N0:3))免疫的患者的血清中的抗WTl332IgG抗体滴度。其结果是，在用WT1332肽免疫的患者 中，免疫后抗WTl332IgG抗体滴度增加（图18)。另一方面，在未用WT1332肽免疫的患者中， 抗WTl332IgG抗体滴度未增加。这些结果表明，使用WTl-frg3(SEQIDN0:57)作为WT1抗 原肽的ELISA可以测量患者的血清中的抗WTl332IgG抗体水平。
[0091] (II)使用WT332-347(SEQIDN0:58)、WT334-342(SEQIDN0:59SWT332-338(SEQ IDNO:60)测量抗体滴度 在使用任何这些肽通过ELISA进行测量中，在用WT1332肽免疫的患者中，免疫后抗WTl332IgG抗体滴度增加（图18)。另一方面，在未用WT1332肽免疫的患者中，抗WTl332IgG抗体 滴度未增加。这些结果表明，使用WT332-347(SEQIDN0:58)、WT334-342(SEQIDN0:59)或 WT332-338(SEQIDN0:60)作为WT1抗原肽的ELISA可以测量患者的血清中的抗WTl332IgG 抗体水平。 实例7
[0092] 伸用夺体WT1抗原肽的抗WTl^肽IgG抗体测宙（图19) 诸位发明人进行了以下研究，以证实即便使用变体WT1抗原肽是否可以测定抗WT1235 肽IgG抗体。
[0093] 1.材料与方法 1-1血清 在开始给予訂1235肽疫苗（WT1-CTL肽（修饰的mp235-243)(SEQIDN0:3))后4周和 开始给予后7个月从一个被给予该疫苗的恶性胸腺癌患者获得血清样品。将每个血清样品 存储在-20°C下直到测定。
[0094] 1-2变体WT1抗原肽的制备 制备下表中所示的变体WT1抗原肽。
由吉尔生化（上海）集团股份有限公司合成WK235-243(SEQIDN0:62)和WT237-243(SEQIDN0:63)。按与上述WTl-frg3(SEQIDN0:57)相同的方式制备 WTl-frg2(SEQIDN0:61)。
[0095] 1-3抗体滴度的测量 按与上述WTl-frg3(SEQIDN0:57)相同的方式使用WTl-frg2(SEQIDN0:61)测量抗 体滴度。按与上述WT332-347(SEQIDN0:58)等相同的方式使用概235-243(SEQIDN0:62) 或WT237-243(SEQIDN0:63)测量抗体滴度。
[0096] 2.结果 (I)使用WTl-frg2(SEQIDΝ0:61)测量抗体滴度 使用WTl-frg2(SEQIDΝ0:61)作为抗原通过ELISA测量被给予WT1235肽的患者的抗WTl235IgG抗体滴度。其结果是，检测到抗WTl235IgG抗体滴度增加（图19)。并且，示出了 像在使用WT1-235肽（WT235-243)在上述实例中作为抗原的情况下的类似结果。这些结果 表明，使用WTl-frg2(SEQIDN0:61)作为WT1抗原肽的ELISA可以测量患者的血清中的抗 WTl235IgG抗体水平。
[0097] (II)使用WK235-243(SEQIDN0:62)或WT237-243(SEQIDN0:63)测量抗体滴度 在使用这些肽各自作为抗原的情况下，也检测到抗WTl235IgG抗体滴度增加（图19)。 并且，示出了像在使用WT1-235肽（WT235-243)在上述实例中作为抗原的情况下的类似结 果。这些结果表明，使用WK235-243(SEQIDN0:62)或WT237-243(SEQIDN0:63)作为WT1 抗原肽的ELISA可以测量患者的血清中的抗WTl235IgG抗体水平。 实例8
[0098] 伸用夺体WT1抗原肽的抗WTl^肽IgG抗体测宙（图20) 诸位发明人进行了以下研究，以证实即便使用变体WT1抗原肽是否可以测定抗WT1126 肽IgG抗体。
[0099] 1.材料与方法 1-1血清 开始给予疫苗前和开始给予后7个月从一个接受用WT1126肽和抗癌剂进行的联合疗法 的膜腺癌患者获得血清样品。将每个血清样品存储在_20 °C下直到测定。
[0100] 1-2变体WT1抗原肽的制备 制备下表中所示的变体WT1抗原肽。
由吉尔生化（上海）集团股份有限公司合成WT126-134(SEQIDN0:65)、WK126-134(SEQIDN0:66)、WT128-134(SEQIDN0:67)、WT126-132(SEQIDN0:68)、 WT129-134(SEQIDN0:69)、WT126-131(SEQIDN0:70)以及WT126-130(SEQIDN0:71)。 按与上述WTl-frg3(SEQIDN0:57)相同的方式制备WTl-frgl(SEQIDN0:64)。
[0101] 1-3抗体滴度的测量 按与上述WTl-frg3(SEQIDN0:57)相同的方式使用WTl-frgl(SEQIDN0:64)测 量抗体滴度。按与上述WT332-347(SEQIDN0:58)等相同的方式使用WT126-134(SEQ IDN0:65)、WK126-134(SEQIDN0:66)、WT128-134(SEQIDN0:67)、WT126-132(SEQID N0:68)、WT129-134(SEQIDN0:69)、WT126-131(SEQIDN0:70)或WT126-130(SEQID NO:71)测量抗体滴度。
[0102] 2.结果 (I)使用WTl-frgl(SEQIDΝ0:64)测量抗体滴度 使用WTl-frgl(SEQIDΝ0:64)作为抗原通过ELISA测量被给予訂1126肽的患者的抗WTl126IgG抗体滴度。其结果是，开始给予疫苗后检测到抗WTl126IgG抗体滴度增加（图20)。 这些结果表明，使用WTl-frgl(SEQIDN0:64)作为WT1抗原肽的ELISA可以测量患者的血 清中的抗WT11261gG抗体水平。
[0103] (II)使用WT126-134(SEQIDN0:65)、WK126-134(SEQIDN0:66)、WT128-134(SEQ IDN0:67)、WT126-132(SEQIDN0:68)、WT129-134(SEQIDN0:69)、WT126-131(SEQID N0:70)或WT126-130(SEQIDN0:71)测量抗体滴度 在使用这些肽各自作为抗原的情况下，开始给予疫苗后也检测到抗WTl126IgG抗体滴度 增加（图20)。这些结果表明，使用这些肽各自作为WT1抗原肽的ELISA可以测量患者的血 清中的抗WT11261gG抗体水平。
[0104] 上述结果表明，可以使用对应于给予的WT1肽疫苗的WT1抗原肽通过测量抗WT1 抗原肽IgG抗体的抗体滴度在开始给予该WT1肽疫苗后预测WT1疫苗疗法的临床效果。这 些结果还表明，可以通过测量IgG抗体亚类（IgGl、IgG3和IgG4)而实现更精确预测。这些 结果进一步表明，使用变体WT1抗原肽也允许测量抗WT1抗原肽IgG抗体的抗体滴度并且 也允许预测WT1疫苗疗法的临床效果。 工业实用性
[0105] 本发明可以提供一种用于预测WT1疫苗疗法的临床效果的更精确预测方法。可以 通过测定受试者的抗WT1抗原肽抗体并且使用获得的值作为指标而实现更精确预测。因 此，可以将本发明应用于测试WT1疫苗疗法对WT1相关疾病患者的适用性和预测其临床效 果。
【主权项】
1. 一种用于预测WT1肽免疫疗法中受试者的临床效果的方法，该方法包括以下步骤： a) 使一个来自该受试者的样品与一种WT1抗原肽或其变体接触；并且 b) 检测该样品与该WT1抗原肽或其变体的结合，并且由此，测量存在于该样品中的抗 WT1抗原肽IgG的抗体滴度， 其中该受试者的抗WT1抗原肽IgG抗体滴度的增加意味着实现了有利的临床效果。2. 根据权利要求1所述的方法，其中该测量的抗WT1抗原肽IgG抗体的亚类是IgGl、 IgG3和IgG4,并且其中当IgGl和IgG3各自的滴度是IgG4的滴度的两倍或两倍以上时确 定实现了有利的临床效果。3. 根据权利要求2所述的方法，其中当IgG3的滴度小于IgGl的滴度的两倍并且IgGl 的滴度小于IgG3的滴度的两倍时确定实现了有利的临床效果。4. 根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中对开始给予WT1肽疫苗后8至14周的 抗WT1抗原肽IgG抗体滴度进行测量。5. 根据权利要求4所述的方法，其中对开始给予该WT1肽疫苗后12至14周的抗WT1 抗原肽IgG抗体滴度进行测量。6. 根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中给予该受试者的WT1肽疫苗由SEQID NO:2-6中任一项的氨基酸序列组成。7. 根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该WT1抗原肽包括SEQIDNO: 7-71中 任一项的氨基酸序列。8. 根据权利要求7所述的方法，其中该WT1抗原肽包括SEQIDNO: 20、21、27、31、32、 42、43或57-71中任一项的氨基酸序列。9. 根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中该样品是血液样品、血浆样品、血清样 品或尿液样品。10. 根据权利要求9所述的方法，其中该样品是血清样品。11. 根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中该受试者是患有WT1相关疾病的患 者。12. 根据权利要求11所述的方法，其中该WT1相关疾病是白血病如慢性髓性白血病， 造血器官肿瘤如骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤和恶性淋巴瘤，或实体癌如食道癌、胃 癌、结肠直肠癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、生殖细胞癌、肝癌、胆道癌、头颈癌、皮肤癌、肉瘤、肾 癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、子宫癌、子宫颈癌、卵巢癌、甲状腺癌、类癌、肺母细胞瘤、肝 母细胞瘤、脑肿瘤以及胸腺癌。13. 根据权利要求12所述的方法，其中该WT1相关疾病是复发性恶性胶质瘤、胸腺癌或 胰腺癌。14. 一种用于进行根据权利要求1-13中任一项所述的方法的试剂盒，该试剂盒包括 WT1抗原肽或其变体。
【专利摘要】提供了一种用于预测WT1肽免疫疗法中受试者的临床效果的方法，所述方法包括：a)用于使一个来源于该受试者的样品与WT1抗原肽或其变体接触的步骤；以及b)用于检测该样品与该WT1抗原肽或其变体的结合、并且从而测量存在于该样品中的抗WT1抗原肽IgG抗体滴度的步骤，该方法特征在于该受试者的抗WT1抗原肽IgG抗体滴度的增加确定实现了有利的临床效果。还提供了一种用于进行根据本发明的方法的试剂盒，所述试剂盒包含WT1抗原肽或其变体。
【IPC分类】G01N33/574, A61P35/02, C07K14/82, A61K39/00, A61P35/00, G01N33/53, C07K7/08
【公开号】CN105378479
【申请号】CN201480039936
【发明人】杉山治夫, 尾路祐介
【申请人】株式会社癌免疫研究所
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2014年5月12日
【公告号】CA2912514A1, EP2998740A1, US20160084841, WO2014185387A1