枯草芽孢杆菌ansb0e1及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一株用于降解玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇的保藏编号为CGMCC?No.8515的枯草芽孢杆菌ANSB0E1及其培养方法和应用。本发明还提供了利用菌株ANSB0E1的发酵液降解玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇的方法，将发酵液与玉米赤霉烯酮反应72小时，降解率可达88%以上；将发酵液与α-玉米赤霉烯醇反应72小时，降解率可达83%以上；将发酵液与β-玉米赤霉烯醇反应72小时，降解率可达80%以上。本发明的枯草芽孢杆菌降解活性高、特异性强、作用效果温和，不会破坏饲料中的营养成分，适用于去除饲料中的玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇。
【专利说明】枯草芽孢杆菌ANSB0E1及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于微生物学领域，具体地说，涉及一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis) ANSB0E1 及其应用。
【背景技术】
[0002]霉菌毒素(Mycotoxin)是霉菌生长过程中产生的次级代谢产物，具有高毒性、高诱变性及强致癌性，严重威胁着动物的生长发育和人类健康。目前对畜牧业和人类威胁最大的霉菌毒素主要有黄曲霉毒素(Aflatoxin, AFT)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone, ZEN)、单端孢霉烯族毒素(Trichothecenes, TRT)、赭曲霉毒素(Ochratoxin A, 0ΤΑ)及烟曲霉毒素(Fumonisins)等。玉米赤霉烯酮又称F-2毒素,是由镰孢菌属真菌产生的非类固醇类真菌毒素，可与体内雌激素受体相结合，产生雌激素效应。α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇是玉米赤霉烯酮的衍生物，也具有和玉米赤霉烯酮相同的雌激素作用，且毒性比玉米赤霉烯酮更强。在高温低湿环境下，霉变的玉米、高粱、小麦等谷类作物易产生玉米赤霉烯酮，作为饲料原料的谷物被动物采食后，经代谢可沉积于肉、蛋、奶等动物产品中，严重威胁着动物健康和食品安全。猪对玉米赤霉烯酮最为敏感，中毒的典型临床症状为阴户肿大、阴道和直肠脱垂以及乳腺增大，引起母猪的不孕、流产和假发情等繁殖障碍。此外，玉米赤霉烯酮还具有肝脏毒性、免疫毒性、细胞毒性和遗传毒性，对肿瘤的发生也有一定影响。
[0003]霉菌毒素传统的物理和化学去毒方法存在效果不稳定、营养成分损失大、影响饲料适口性，且难以规模化生产等缺点而不能被广泛应用到实际生产中。微生物及生物酶解毒因具有解毒效率高、特异性强、对饲料和环境无污染等优点，具有很好的应用前景，备受关注。研究报道，许多真菌包括粉红粘帚霉(61;[0013(1;[111]11'08611111)、米根霉(1?.0ryzae)、葡枝根霉(R.stolonifer)和小抱根霉(R.microsporus)、雅致枝霉(Thamnidiumelegans)、贝勒被毛霉(Mucorbainieri)、龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)和班尼小克银汉霉(Cunninghamellabainieri)等能够生物降解玉米赤霉烯酮。然而，关于细菌降解玉米赤霉烯酮的报道较少。
[0004]迄今为止，未见到关于枯草芽孢杆菌及其代谢物能够同时降解玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇的相关报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一株用于降解玉米赤霉烯酮、α -玉米赤霉烯醇和β -玉米赤霉烯醇的枯草芽孢杆菌。
[0006]本发明的另一目的是提供上述枯草芽孢杆菌的培养方法及其应用。
[0007]本发明提供的用于降解玉米赤霉烯酮、α -玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇的枯草芽孢杆菌(Baci 1 lus subtilis) ANSB0E1,是发明人从鱼肠道食糜中分离得到的，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号CGMCC N0.8515，保藏日期2013年11月27日。
[0008]枯草芽孢杆菌ANSB0E1的形态和理化特征如表1所示。
[0009]表1.细胞形态和理化特征
【权利要求】
1.用于降解玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtil is) ANSBOEI，其保藏编号为 CGMCC N0.8515。
2.由权利要求1所述枯草芽孢杆菌ANSB0E1制备的复合微生物菌剂。
3.权利要求1所述枯草芽孢杆菌ANSB0E1的发酵培养方法，其特征在于，取活菌浓度为109CFU/mL的枯草芽孢杆菌ANSB0E1种子液l_4mL，接种于50_100mL培养基中进行摇瓶发酵培养，所述培养基由如下组分组成:胰蛋白胨7-12g、酵母浸膏1.5-3g、葡萄糖2-5g、牛肉膏2-5g、氯化钠3-6g、磷酸氢二钠2.5-4g、七水硫酸镁0.5-1.5g和蒸馏水800_1200mL，pH 值为 6.8-7.4。
4.根据权利要求3所述的发酵培养方法，其特征在于，摇瓶发酵的条件为:25-45°C，发酵 18-32h, pH 值 6.8-7.4，转速 150_225r/min。
5.由权利要求3或4所述方法获得的枯草芽孢杆菌ANSB0E1发酵液。
6.权利要求1所述枯草芽孢杆菌ANSB0E1或权利要求5所述发酵液在降解玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇和/或β-玉米赤霉烯醇中的应用。
7.一种降解玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，取权利要求5所述枯草芽孢杆菌ANSBOEI的发酵液700-900 μ L，加入5000ppb玉米赤霉烯酮溶液100-300 μ L，将反应体系pH 值调至 6.0-8.0,于 20-45°C反应 2_72h。
8.一种降解α-玉米赤霉烯醇的方法，其特征在于，取权利要求5所述枯草芽孢杆菌ANSBOEI的发酵液700-900 μ L，加入5000ppb α -玉米赤霉烯醇溶液100-300 μ L，将反应体系 pH 值调至 6.0-8.0，于 20-45°C反应 2_72h。
9.一种降解玉米赤霉烯醇的方法，其特征在于，取权利要求5所述枯草芽孢杆菌的ANSBOEI的发酵液700-900 μ L`，加入5000ppb β -玉米赤霉烯醇溶液100-300 μ L，将反应体系 pH 值调至 6.5-8.5，于 20-45°C反应 2_72h。
10.权利要求1所述枯草芽孢杆菌ANSB0E1或权利要求2所述复合微生物菌剂在饲料添加剂领域中的应用。
【文档编号】C12R1/125GK103695340SQ201310676784
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月11日 优先权日:2013年12月11日
【发明者】计成, 张建云, 雷元培, 马秋刚, 赵丽红 申请人:中国农业大学