专利名称：一种药物组合物及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
背景技术：
黄芪(Astragalus membranaceus)为豆科植物膜荚黄芪的干燥根。黄芪多糖(Astragaluspolysaccharide，APs)是黄芪的主要活性成分之一。黄芪多糖具有清除自由基，提高机体免疫力、改善血流变等作用。
人参是主要成份为人参皂苷(ginsenosides)，研究表明人参皂苷能明显促进肝细胞核RNA合成，提高机体免疫功能，抑制肿瘤生长、抗缺氧等作用。
本发明人通过大量的实验研究，发明了一种以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的组合物，并提出了其在制备治疗和辅助治疗肿瘤的药物中的应用；该药物组合物在用于制备治疗和辅助治疗肿瘤时具有协同作用。
发明内容
本发明提供了一种人参皂苷和黄芪多糖组成的药物组合物，其中人参皂苷和黄芪多糖的比例为1∶9～9∶1，优选为1∶4～4∶1；组合物中人参皂苷(以Re、Rg1、Rb1含量计)和黄芪多糖的含量之和大于等于50％而小于100％，优选为大于等于80％小于100％。
本发明提供了上述药物组合物在制备治疗肿瘤的药物中的应用；具体地提供了其在抑制肿瘤生长的药物中的应用；在增强抗癌药物疗效的药物中的应用；在降低抗癌药物毒性的药物中的应用；在预防或治疗放、化疗引起的白细胞降低的药物中的应用；在增强癌症患者机体免疫力的药物中的应用。
本发明提供的药物组合物可以根据制剂需要，加入相应辅料，以注射剂、片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、悬浮液、溶液、糖浆、口嚼剂形式存在，优选为冻干粉针。本发明提供的各种剂型均可以采用药学常规方法制备而成。
本发明提供的药物组合物可以按下述几种方法制备1、从黄芪、人参中分别提取黄芪多糖、人参皂苷；人参皂苷按文献吴正中，周国明，谢玉琼.正交试验法提取人参皂苷工艺的研究.中国药房，2002.01所述方法分离提取，得率为5.3％。黄芪多糖按文献李红民，黄仁泉，王亚洲.提高黄芪多糖提取收率的工艺研究.西北大学学报，2000.06所述方法分离提取，得率为11.7％；而后按比例组成组合物，该组合物中黄芪多糖、人参皂苷(以Re、Rg1、Rb1含量计)的实际含量之和不低于混合物总量的50％。
2、从市场购买人参皂苷和黄芪多糖，混合得到组合物，该组合物中黄芪多糖和人参皂苷(以Re、Rg1、Rb1含量计)的实际含量之和不低于混合物总含量的50％。
本发明人进行了下列试验来证实以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物在制备治疗和辅助治疗肿瘤的药物中的应用，组合物中人参皂苷和黄芪多糖在治疗或辅助治疗肿瘤时具有协同作用。
具体实施例方式制备例1人参皂苷和黄芪多糖的制备人参皂苷按文献吴正中，周国明，谢玉琼.正交试验法提取人参皂苷工艺的研究.中国药房，2002.01所述方法分离提取，得率为5.3％，纯度为81％。黄芪多糖按文献李红民，黄仁泉，王亚洲.提高黄芪多糖提取收率的工艺研究.西北大学学报，2000.06所述方法分离提取，得率为11.7％，纯度为85％。
制备例2制备以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的冻干粉针在洁净条件下，取人参皂苷40g、黄芪多糖80g，溶于1000ml注射用水，加入100g低分子右旋糖苷，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，按冻干粉针工艺冻干，制成1000支含人参皂苷40mg、黄芪多糖80mg的冻干粉针。
制备实施例3制备不同比例的冻干粉针按制备实施例2所述方法，制备得到人参皂苷与黄芪多糖以任一比例组合的冻干粉针。
试验例1不同配比药物组合物的抑制肿瘤生长作用1材料药物组合物按制备例3方法制备环磷酰胺，上海华联制药有限公司生产，批号000205；DMEM培养基，GIBCO公司；胰蛋白酶、MTT、ConA、IL-2，SIGMA公司生产；大鼠抗小鼠CD3、CD4、CD8单抗，FITC兔抗大鼠单抗，购自武汉生物制品研究所。
昆明种小鼠，5~8周龄，体重18~22g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供。雌雄兼用，每批实验采用同一性别。C57BL/6纯系小鼠，5~8周龄，体重18~22g，中国医学科学院实验动物繁育场提供。
细胞株小鼠肝癌H22、小鼠宫颈癌U14、小鼠黑色素瘤B16、小鼠Lewis肺癌，购自中国医学科学院北京药物研究所。
2方法H22肝癌和U14宫颈癌接种取于昆明鼠腹腔内接种传代七天的上述荷瘤小鼠，消毒腹部皮肤后，抽取腹水，加入三倍体积的注射用生理盐水稀释，消毒昆明鼠腋下皮肤，每只小鼠于腋下注射瘤细胞悬液0.2ml。
B16黑色素瘤和Lewis肺癌接种取已接种10天的Lewis肺癌、生长状态良好的小鼠，脱颈处死，用酒精消毒皮肤后，剥取肿瘤组织，加入五倍重量的生理盐水后用组织匀浆器研磨成匀浆，100目灭菌不锈钢网过滤。消毒每只小鼠左侧腋皮肤，接种瘤液0.2ml。
接瘤后第二天，动物随机分为如下9组并静脉注射给药空白对照组给予等容量生理盐水；阳性药对照给予环磷酰胺20mg/kg；组合物A组给予人参皂苷10mg/kg+黄芪多糖0mg/kg；组合物B组给予人参皂苷9mg/kg+黄芪多糖1mg/kg；组合物C组给予人参皂苷8mg/kg+黄芪多糖2mg/kg；组合物D组给予人参皂苷5mg/kg+黄芪多糖5mg/kg；组合物E组给予人参皂苷2mg/kg+黄芪多糖8mg/kg；组合物F组给予人参皂苷1mg/kg+黄芪多糖9mg/kg；组合物G组给予人参皂苷0mg/kg+黄芪多糖10mg/kg；每组15只，连续给药10天，末次给药后24h处死小鼠，剥取瘤组织称重。计算抑瘤率。
数据用x±SD表示，以组间T-test检验进行统计学处理。
3结果结果如表1所示以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的不同配比的药物组合物可明显抑制肿瘤生长(P＜0.05或P＜0.01)。
剂量相等的条件下(10mg/kg)，以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物抑瘤作用优于单用同剂量人参皂苷或黄芪多糖(P＜0.05)，提示组合物中人参皂苷和黄芪多糖具有协同作用。
表1 不同配比药物组合物对肿瘤生长的抑制作用(x±SD，n＝15)
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。与组合物A组比较#P＜0.05；与组合物G组比较△p＜0.05试验例2不同配比药物组合物的增强抗癌药物疗效作用1材料 同试验例12方法用小鼠H22肝癌和Lewis肺癌建立小鼠体内移植性肿瘤模型，接瘤后第二天，动物随机分为如下9组并静脉注射给药空白对照组给予等量生理盐水；环磷酰胺组给予环磷酰胺5mg/kg；环磷酰胺+组合物A组给予环磷酰胺5mg/kg+人参皂苷10mg/kg+黄芪多糖0mg/kg；环磷酰胺+组合物B组给予环磷酰胺5mg/kg+人参皂苷9mg/kg+黄芪多糖1mg/kg；环磷酰胺+组合物C组给予环磷酰胺5mg/kg+人参皂苷8mg/kg+黄芪多糖2mg/kg；环磷酰胺+组合物D组给予环磷酰胺5mg/kg+人参皂苷5mg/kg+黄芪多糖5mg/kg；环磷酰胺+组合物E组给予环磷酰胺5mg/kg+人参皂苷2mg/kg+黄芪多糖8mg/kg；环磷酰胺+组合物F组给予环磷酰胺5mg/kg+人参皂苷1mg/kg+黄芪多糖9mg/kg；环磷酰胺+组合物G组给予环磷酰胺5mg/kg+人参皂苷0mg/kg+黄芪多糖10mg/kg；每组15只，连续给药10天，末次给药后24h处死小鼠，剥取瘤组织称重，计算抑瘤率。数据用x±SD表示，以组间T-test检验进行统计学处理。
3结果结果如表2所示环磷酰胺5mg/kg为治疗小鼠H22肝癌及Lewis肺癌的无效剂量，仅有抑制肿瘤生长的趋势；以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物与其联用可明显提高其抑瘤率，表明以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物可以增强抗癌药物疗效。
剂量相等的条件下(10mg/kg)，以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物抑瘤作用优于单用同剂量人参皂苷或黄芪多糖(P＜0.05)，提示组合物中人参皂苷和黄芪多糖具有协同作用。
表2 环磷酰胺与组合物联合应用对小鼠H22肝癌、Lewis肺癌生长的抑制作用
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。与环磷酰胺组比较△P＜0.05；与组合物A组比较AP＜0.05；与组合物G组比较GP＜0.05试验例3不同配比药物组合物的降低抗癌药物毒性作用1材料 同试验例12方法用小鼠H22肝癌建立小鼠体内移植性肿瘤模型，接瘤后第二天，动物随机分为如下9组并静脉注射给药空白对照组给予等量生理盐水；环磷酰胺组给予环磷酰胺10mg/kg；环磷酰胺+组合物A组给予环磷酰胺10mg/kg+人参皂苷10mg/kg+黄芪多糖0mg/kg；环磷酰胺+组合物B组给予环磷酰胺10mg/kg+人参皂苷9mg/kg+黄芪多糖1mg/kg；环磷酰胺+组合物C组给予环磷酰胺10mg/kg+人参皂苷8mg/kg+黄芪多糖2mg/kg；环磷酰胺+组合物D组给予环磷酰胺10mg/kg+人参皂苷5mg/kg+黄芪多糖5mg/kg；环磷酰胺+组合物E组给予环磷酰胺10mg/kg+人参皂苷2mg/kg+黄芪多糖8mg/kg；环磷酰胺+组合物F组给予环磷酰胺10mg/kg+人参皂苷1mg/kg+黄芪多糖9mg/kg；环磷酰胺+组合物G组给予环磷酰胺10mg/kg+人参皂苷0mg/kg+黄芪多糖10mg/kg；每组15只，连续给药10天，末次给药后24h处死小鼠，取胸腺称重计算胸腺指数，用血象分析仪计数外周血白细胞。
数据用x±SD表示，以组间T-test检验进行统计学处理。
3结果结果如表3所示环磷酰胺10mg/kg在治疗小鼠H22肝癌及Lewis肺癌时表现出明显的毒性，降低胸腺指数、外周血白细胞数；以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物与其联用可明显降低环磷酰胺导致的毒副作用，升高胸腺指数和外周血白细胞数。
剂量相等的条件下(10mg/kg)，以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物减毒作用优于单用同剂量人参皂苷或黄芪多糖(P＜0.05)，提示组合物中人参皂苷和黄芪多糖具有协同作用。
表3 组合物在环磷酰胺治疗小鼠H22肝癌中的减毒作用
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。与环磷酰胺组比较△P＜0.05；与组合物A组比较AP＜0.05；与组合物G组比较GP＜0.05
试验例4不同配比药物组合物的在60Co治疗小鼠Lewis肺癌中的减毒作用1材料同试验例1。
2方法动物置于塑料盒内进行全身照射剂量率0.287Gy/min，靶皮距50cm，总剂量4Gy，溶剂对照组1给予假照射。用小鼠Lewis肺癌建立小鼠体内移植性肿瘤模型，接瘤后第二天，动物随机分为如下9组并静脉注射给药空白对照组给予等量生理盐水；60Co组；60Co+组合物A组60Co+人参皂苷10mg/kg+黄芪多糖0mg/kg；60Co+组合物B组给予60Co+人参皂苷9mg/kg+黄芪多糖1mg/kg；60Co+组合物C组给予60Co+人参皂苷8mg/kg+黄芪多糖2mg/kg；60Co+组合物D组给予60Co+人参皂苷5mg/kg+黄芪多糖5mg/kg；60Co+组合物E组给予60Co+人参皂苷2mg/kg+黄芪多糖8mg/kg；60Co+组合物F组给予60Co+人参皂苷1mg/kg+黄芪多糖9mg/kg；60Co+组合物G组给予60Co+人参皂苷0mg/kg+黄芪多糖10mg/kg；每组15只，连续给药10天，末次给药后24h处死小鼠，取胸腺称重计算胸腺指数，用血象分析仪计数外周血白细胞。
数据用x±SD表示，以组间T-test检验进行统计学处理。
3结果结果如表4所示60Co照射在治疗小鼠Lewis肺癌时表现出明显的毒性，降低胸腺指数、外周血白细胞数；以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物与其联用可明显降低60Co照射导致的毒副作用，升高胸腺指数和外周血白细胞数。
剂量相等的条件下(10mg/kg)，以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物减毒作用优于单用同剂量人参皂苷或黄芪多糖(P＜0.05)，提示组合物中人参皂苷和黄芪多糖具有协同作用。表4 组合物在60Co治疗小鼠H22肝癌中的减毒作用
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。与60Co组比较△P＜0.05；与组合物A组比较AP＜0.05；与组合物G组比较GP＜0.05
试验例5不同配比药物组合物对荷瘤小鼠免疫功能的影响1材料同试验例1。
2方法按前述方法用小鼠Lewis肺癌建立小鼠体内移植性肿瘤模型，接瘤后第二天，动物随机分为如下9组并静脉注射给药空白对照组给予等容量生理盐水；组合物A组给予人参皂苷10mg/kg+黄芪多糖0mg/kg；组合物B组给予人参皂苷9mg/kg+黄芪多糖1mg/kg；组合物C组给予人参皂苷8mg/kg+黄芪多糖2mg/kg；组合物D组给予人参皂苷5mg/kg+黄芪多糖5mg/kg；组合物E组给予人参皂苷2mg/kg+黄芪多糖8mg/kg；组合物F组给予人参皂苷1mg/kg+黄芪多糖9mg/kg；组合物G组给予人参皂苷0mg/kg+黄芪多糖10mg/kg；每组15只，连续给药10天，末次给药后，按文献杨铁虹，卢保华，贾敏，梅其炳.当归多糖对小鼠免疫功能的影响.中国药理学通报.2003.04所述方法测定脾细胞刺激指数(SI)、NK细胞活性、IL-2含量。
3结果结果如表5所示，以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的组合物可以提高荷瘤小鼠脾细胞刺激指数、NK细胞活性、IL-2含量。提示，本发明组合物具有明显增强免疫作用，有助于提高荷瘤小鼠自身的免疫能力。
剂量相等的条件下(10mg/kg)，以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物增强免疫作用优于单用同剂量人参皂苷或黄芪多糖(P＜0.05)，提示组合物中人参皂苷和黄芪多糖具有协同作用。
表5 不同配比药物组合物对荷瘤小鼠免疫功能的影响(x±SD，n＝15)
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。与组合物A组比较AP＜0.05；与组合物G组比较GP＜0.05
试验例6不同剂量药物组合物的增强抗癌药物疗效作用1材料 同试验例12方法用小鼠H22肝癌建立小鼠体内移植性肿瘤模型，接瘤后第二天，动物随机分为如下5组并静脉注射给药空白对照组给予等量生理盐水；环磷酰胺组给予环磷酰胺5mg/kg；环磷酰胺+组合物A组给予环磷酰胺5mg/kg+人参皂苷2.5mg/kg+黄芪多糖2.5mg/kg；环磷酰胺+组合物B组给予环磷酰胺5mg/kg+人参皂苷5mg/kg+黄芪多糖5mg/kg；环磷酰胺+组合物C组给予环磷酰胺5mg/kg+人参皂苷50mg/kg+黄芪多糖50mg/kg；每组15只，连续给药10天，末次给药后24h处死小鼠，剥取瘤组织称重，计算抑瘤率。数据用x±SD表示，以组间T-test检验进行统计学处理。
3结果结果如表6所示环磷酰胺5mg/kg为治疗小鼠H22肝癌的无效剂量，仅有抑制肿瘤生长的趋势；不同剂量的药物组合物(5mg/kg～100mg/kg)与其联用可明显提高其抑瘤率，表明以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物可以增强抗癌药物疗效。
表6 环磷酰胺与组合物联合应用对小鼠H22肝癌生长的抑制作用
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。与环磷酰胺组比较△P＜0.05，△△P＜0.01。
试验例7不同剂量药物组合物的降低抗癌药物毒性作用1材料 同试验例12方法用小鼠H22肝癌建立小鼠体内移植性肿瘤模型，接瘤后第二天，动物随机分为如下5组并静脉注射给药空白对照组给予等量生理盐水；环磷酰胺组给予环磷酰胺10mg/kg；环磷酰胺+组合物A组给予环磷酰胺10mg/kg+人参皂苷2.5mg/kg+黄芪多糖2.5mg/kg；环磷酰胺+组合物B组给予环磷酰胺10mg/kg+人参皂苷5mg/kg+黄芪多糖5mg/kg；环磷酰胺+组合物C组给予环磷酰胺10mg/kg+人参皂苷50mg/kg+黄芪多糖50mg/kg；每组15只，连续给药10天，末次给药后24h处死小鼠，剥取瘤组织称重，计算抑瘤率。数据用x±SD表示，以组间T-test检验进行统计学处理。
3结果结果如表7所示环磷酰胺10mg/kg在治疗小鼠H22肝癌时表现出明显的毒性，降低胸腺指数、外周血白细胞数；不同剂量的药物组合物(5mg/kg～100mg/kg)与其联用可明显降低环磷酰胺导致的毒副作用，升高胸腺指数和WBC。
表7 组合物在环磷酰胺治疗小鼠H22肝癌中的减毒作用
与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。与环磷酰胺组比较△P＜0.05，△△P＜0.01。
试验例8不同剂量药物组合物对荷瘤小鼠免疫功能的影响1材料同试验例1。
2方法按前述方法用小鼠Lewis肺癌建立小鼠体内移植性肿瘤模型，接瘤后第二天，动物随机分为如下4组并静脉注射给药空白对照组给予等容量生理盐水；组合物A组给予人参皂苷2.5mg/kg+黄芪多糖2.5mg/kg；组合物B组给予人参皂苷5mg/kg+黄芪多糖5mg/kg；组合物C组给予人参皂苷50mg/kg+黄芪多糖50mg/kg；每组15只，连续给药10天，末次给药后，按前述方法测定脾细胞刺激指数(SI)、NK细胞活性、IL-2含量。
3结果结果如表8所示，不同剂量的药物组合物(5mg/kg～100mg/kg)可以提高荷瘤小鼠脾细胞刺激指数、NK细胞活性、IL-2含量。提示，本发明组合物具有明显增强免疫作用，有助于提高荷瘤小鼠自身的免疫能力。
表8 不同配比药物组合物对荷瘤小鼠免疫功能的影响(x±SD，n＝15)
与空白对照组比较*P＜0.05，**uP＜0.01。
权利要求
1.一种药物组合物，由人参皂苷和黄芪多糖组成，其重量比为1∶9～9∶1；其中100％＞人参皂苷和黄芪多糖之和≥50％。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其优选重量比为1∶4～4∶1。
3.权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
4.权利要求1或2所述的药物组合物在抑制肿瘤生长的药物中的应用。
5.权利要求1或2所述的药物组合物在增强抗癌药物疗效的药物中的应用。
6.权利要求1或2所述的药物组合物在降低抗癌药物毒性的药物中的应用。
7.权利要求1或2所述的药物组合物在预防或治疗放、化疗引起的白细胞降低的药物中的应用。
8.权利要求1或2所述的药物组合物在增强癌症患者机体免疫力的药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种以人参皂苷和黄芪多糖为主要活性成分的药物组合物，及其在制备治疗或预防肿瘤的药物中的应用。
文档编号A61P35/00GK1868485SQ200510043609
公开日2006年11月29日 申请日期2005年5月24日 优先权日2005年5月24日
发明者田京伟, 张太平, 王超云, 蒋王林 申请人:山东绿叶天然药物研究开发有限公司