一种药物组合物及其用途的制作方法

专利名称：一种药物组合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物领域，特别是涉及一种中药组合物及其在神经元保护的用途。
背景技术：
益智,又名益智仁、益智子,为姜科植物益智Alpinia oxyphyl la Miq.的 干燥成熟果实。夏、秋间果实由绿变红时采收，晒干或低温干燥。产地广东、海南、广西、云南、福建等地。性味辛，温。归脾，肾经。本品呈椭圆形，两端略尖，长I. 2 2cm，直径I I. 3cm。表面棕色或灰棕色，有纵向凹凸不平的突起棱线13 20条，顶端有花被残基，基部常残存果梗。果皮薄而稍韧，与种子紧贴，种子集结成团，中有隔膜将种子团分为3瓣，每瓣有种子6 11粒。种子呈不规则的扁圆形，略有钝棱，直径约3mm，表面灰褐色或灰黄色，外被淡棕色膜质的假种皮；质硬，胚乳白色。有特异香气，味辛，微苦。三七，又名山漆、金不换、血参。五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.)F.H.Chen的干燥根。秋季花开前采挖，洗净，分开主根、支根及茎基，干燥。支根习称“筋条”，茎基习称“剪口”。味甘；微苦；性湿。归肝、胃、心、肺、大肠经。天麻,又名赤箭芝、独摇芝,为兰科植物天麻Gastrodia elata BI.的干燥块莖。立冬后至次年清明前采挖，立即洗净，蒸透，敞开低温干燥。甘平，归肝经。现代研究证实，天麻素(天麻甙)治疗神经衰弱和神经衰弱综合症病人，有效率分别为89. 44%和86. 87%。且能抑制咖啡因所致的中枢兴奋作用，还有加强戊巴比妥纳的睡眠时间效应。尼莫地平是一种亲水性Ca2+通道阻滞剂，容易透过血脑屏障，主要作用是与L-型Ca2+通道结合，减少细胞膜Ca2+通道开放数目，从而限制Ca2+进入细胞。基础研究提示，抑制Ca2+内流能保护神经元免受一系列损害的影响，表明尼莫地平具有神经保护潜能，特别是抵抗短暂缺血和缺氧的影响。在下丘脑、尾状核和大脑皮质特定区域，尼莫地平的结合位点数量众多，这对学习与记忆发挥重要作用。在神经元和脑血管细胞中也存在尼莫地平结合位点，尼莫地平通过影响神经传导和脑血流而发挥作用。与其他Ca2+通道阻滞剂不同的是，由于尼莫地平可直接作用于大脑局部血流的细小动脉平滑肌细胞，因此低剂量尼莫地平具有抗血管收缩和抗缺血效应。随着人均寿命的延长，老年人已成为当今社会的庞大群体，神经退行性疾病，例如痴呆的患病率也随之增加。其中，阿尔茨海默病和血管性痴呆最为常见，根据不同统计资料，阿尔茨海默病约占所有痴呆的50%-70%，而血管性痴呆占10%-25%。我国是世界上人口老龄化基数最大的国家，根据2005年北京协和医院牵头的一项跨省市流行病学调查结果估计，我国65岁以上老年人的痴呆患病率约为7. 8%。阿尔茨海默病是一组病因未明的原发性退行性脑变性疾病。多起病于老年期，潜隐起病，病程缓慢且不可逆，临床上以智能损害为主。病理改变主要为皮质弥漫性萎缩，沟回增宽，脑室扩大，神经元大量减少，并可见老年斑，神经原纤维结等病变，胆碱乙酰化酶及乙酰胆碱含量显著减少。起病在65岁以前者称老年前期痴呆，或早老性痴呆，多有同病家族史，病情发展较快，颞叶及顶叶病变较显著，常有失语。

发明内容
本发明解决的技术问题是提供一种保护神经元的药物组合物，特别是提供一种中药组合物用于保护神经元。具体来说，本发明是通过如下技术方案实现的一种保护神经元或抑制神经元损伤的药物组合物，包含益智、三七和天麻。优选地，一种保护神经元或抑制神经元损伤的药物组合物，包含益智5-15重量份三七4-12重量份天麻3_10重量份。优选为益智8-12重量份三七7-12重量份天麻5_9重量份； 更优选为益智10重量份三七8重量份天麻7重量份。其中，所述的神经元损伤是Glu损伤。一种保护神经元或抑制神经元损伤的药物制剂，其采用所述的药物组合物和药学上可接受的辅料或载体制成。其中，所述药物制剂为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、丸剂、控释制剂或口服液体制剂。一种保护神经元或抑制神经元损伤的药物制剂单元，其中，每单元采用所述的总重量12-37g的药物组合物和药学上可接受的辅料或载体制成，优选采用所述总重量20-30g的药物组合物和药学上可接受的辅料或载体制成。每个药物制剂单元是临床上的一次服用剂量，一般以一日两次进行服用。该剂量也适用于其他的单位制剂中，即每单位制剂采用总重量12_37g的所述的药物组合物和适当量的药学上接受的辅料或载体制成。该单位制剂中含有的药物组合物是通过本发明中的实验确定，通过本发明中的效果实施例1-3可以看出在中高剂量时，具有很好保护神经元和抑制神经元损伤的效果，根据实验结果判定，并考虑到毒性的问题，证明在中剂量的范围内的本发明药物组合物在人体具有很好的保护神经元和抑制神经元损伤的作用，并可以达到治疗神经退行性疾病的效果。一种保护神经元或抑制神经元损伤的试剂盒，其特征在于含有1-3个所述的试剂单元。所述的药物组合物、药物制剂和/或药物制剂单元在制备保护神经元或抑制神经元损伤的药物中的应用；优选所述神经元损伤是Glu的损伤。所述药物组合物、药物制剂和/或药物制剂单元在制备治疗神经退行性疾病的药物中的应用。其中，所述的神经退行性疾病包含阿尔茨海默病、血管性痴呆、共济失调毛细血管扩张症、小脑萎缩症、帕金森氏病、原发性侧索硬化症和/或脊髓性肌萎缩症的药物中的应用。


图I :各组皮层神经元在MTT测定中的OD值。其中A为正常组；B为模型组；C为西药组；D、E、F为益智仁低、中、高剂量组；G、H、I为合方低、中、高剂量组(本发明低、中、高剂量组)。
图2:丙酮酸标准曲线。图3 :各组皮层神经元在LDH漏出率检测中的OD值。其中A为正常组；B为模型组；C为西药组；D、E、F为益智仁低、中、高剂量组；G、H、I为合方低、中、高剂量组(本发明低、中、高剂量组)。
具体实施例方式关于益智，历代医家及本草论著都说益智能补肾壮阳，固精缩尿，温脾止泄，悦色延年，提高记忆力。而且是“久服轻身”，是一味补肾防衰良药。据现代药理研究证实，益智含有多种化合物、微量生物及结晶性中性物质等营养成分，其水煎剂和乙醇浸出物能够增 强阳虚动物的脾脏和增加胸腺重量，说明它对特异性细胞免疫功能也有促进作用，并能改善阳虚动物的营养、体重和耐受力等，对阳虚怕冷的病人有明显的强壮和治疗作用。益智中所含的苯丙基糖甙类化合物能明显提高男性的性功能和记忆力。日本医学家研究也发现，益智的提取化合物可以作为性功能障碍和健忘的治疗剂，并认为这对身心疾病也具有预防和治疗作用，属于安全有效的功能改善药。无怪乎中医说益智温而不热，暖而不燥，补而不峻，涩而不泄，有缓和之性，很适合长期从事脑力劳动者和体质虚弱者作为键脑益智和延缓衰老，益寿延年之品服用。关于三七，发明人经过研究发现，三七具有抗脑缺血作用，静脉注射PNS(三七总皂甙)可明显扩张麻醉小鼠软脑膜微血管，加快血流速度，增加局部血流量。对家兔双侧颈总动脉及股动脉快速放血后造成不完全性脑缺血，PNS静脉注射，能显著缓解因缺血所致的脑电波低平，显著降低大脑皮层组织水、钠、钙含量及脑静脉血中CPK (肌酸磷酸激酶)和(乳酸脱氢酶LDH)的活性。三七抗脑缺血作用，除与扩张脑血管，增加局部血流量有关外，尚与延缓缺血组织ATP的分解，改善能量代谢，以及抑制脂质过氧化，提高脑组织中SOD (超过氧化物歧化酶)活性，清除氧自由基等作用有关。同时，其成分具有扩张血管、降低血压，改善微循环，增加血流量，预防和治疗心脑组织缺血、缺氧症；促进蛋白质、核糖核酸(RNA)JA氧核糖核酸(DNA)合成，强身健体；促进血液细胞新陈代谢，平衡调节血液细胞；双向调节中枢神经，提高脑力，增强学习和记忆能力；增强机体免疫功能，抗肿瘤；延缓衰老等功效。关于天麻，发明人发现其具有明目和显著增强记忆力的作用。天麻对人的大脑神经系统具有明显的保护和调节作用，能增强视神经的分辨能力，目前已用作高空飞行人员的脑保健食品或脑保健药物。上述三个药材单独在保护神经元损伤，特别是作为治疗神经退行性疾病都还没有报道。本发明通过研究本发明组合物在保护神经元损伤上最终用于治疗神经退行性疾病。关于神经元损伤的保护方面，发明人经过总结发现，谷氨酸对神经元的损伤作用主要是通过激活相应受体主要包括KA/AMPA，NMDA(N-甲基-D-天(门)冬氨酸)和mGluR，mGluRl和mGluR5介导的，导致Ca2+超载。神经元内Ca2+超载激发损伤级联反应主要有以下两种方式( I)激活各种酶类，进而损伤神经元细胞结构，最终使细胞损伤和凋亡，其中所述激活的酶类包括①磷脂酶A (PLA)和磷脂酶C(PLC);②钙依赖性蛋白酶calpain 核酸内切酶一氧化氮合酶；⑤蛋白激酶。(2)导致线粒体损伤，其中钙离子超载，造成线粒体肿胀，最终导致线粒体释放更多的Ca2+，同时释放细胞色素C和自由基，后移位至胞浆内，最终导致细胞凋亡。阿尔茨海默病主要表现为脑细胞的广泛死亡，特别是基底节区的脑细胞。正常情况下，基底节区发出的纤维投射到大脑与记忆和认知有关的皮质，它释放乙酰胆碱。短期记忆的形成必须有乙酰胆碱的参与，患者与正常人相比乙酰胆碱转移酶的含量比正常人减少90%。经解剖发现，患者脑中有广泛的神经元纤维缠结，轴突缠结形成老年斑。老年斑中含有坏死的神经细胞碎片、铝、异常的蛋白，阿尔茨海默病患者脑内β -淀粉样蛋白过度积聚。目前公认的发病机制主要有两种I、由于淀粉样前蛋白的异常导致蛋白成分漏出细胞膜，导致神经元纤维缠结和细胞死亡，基因位于21号染色体。

2、与载脂蛋白E (ΑΡ0-Ε4)的基因有关，ΑΡ0-Ε4的增多能对抗ΑΡ0-Ε2或ΑΡ0-Ε3的功能。ΑΡ0-Ε4使神经细胞膜的稳定性降低，导致神经元纤维缠结和细胞死亡。APO-基因纯合子比杂合子患病几率高。通过上述神经元损伤的机理以及神经退行性疾病的机制，作为本领域常识，可以通过保护神经元，达到减少神经元损伤，进而治疗本发明所述的疾病，其中所述的疾病可以是各种神经退行性疾病，如阿尔茨海默病、血管性痴呆、共济失调毛细血管扩张症、小脑萎缩症、帕金森氏病、原发性侧索硬化症和脊髓性肌萎缩症。近年来的研究表明，中枢高浓度的Glu水平会导致神经细胞的死亡。本研究结果发现，脑缺血/再灌注可以导致海马的Glu浓度上升，细胞外的Glu富集，可能通过改变突触后NMDA受体的活性上调，引起大量Ca2+内流引起急性的渗透性损伤和慢性的氧化损伤，而导致海马神经细胞的丢失，海马的形态学损伤。因此，脑缺血/再灌注引起的海马内Glu浓度的升高，这可能造成海马神经细胞的兴奋性毒性损伤，也可能是海马损伤的基础，是海马依赖的学习记忆能力下降的神经内分泌学基础。而现在的机制研究均已经证明保护神经元和抑制神经元损伤可以治疗神经退行性疾病，如阿尔茨海默病、血管性痴呆、共济失调毛细血管扩张症、小脑萎缩症、帕金森氏病、原发性侧索硬化症和脊髓性肌萎缩症。脑缺血、阿尔茨海默病、亨廷顿病等疾病的一个共同特点是谷氨酸产生的过度兴奋，这可能损伤到海马神经元，所以保护神经元，减少神经元纤维缠结可以有效地防治神经退行性疾病，如阿尔茨海默病、血管性痴呆、共济失调毛细血管扩张症、小脑萎缩症、帕金森氏病、原发性侧索硬化症和脊髓性肌萎缩症。实施例首先，对下面效果实施例和制备实施例中所用的测定装置和测定方法进行说明如下益智、三七、天麻均购于同仁堂医药公司；大鼠购于北京维通利华实验动物有限公司PBS成分为购于上海优宁维生物科技有限公司酶标仪购于贝克曼商贸(中国)有限公司(BECKMAN COULTER)型号AD340STriton-X-100 :即聚乙二醇辛基苯基醚，购于上海优宁维生物科技有限公司丙酮酸标准品购于上海优宁维生物科技有限公司
尼莫地平购于北京中医药大学第一附属医院东直门医院辅酶I :成分为烟酰胺腺嘌呤二核苷，购于上海优宁维生物科技有限公司。B27 :购于北京赛诺科为生物科技有限公司其他培养基、维持液、试剂和设备均是市售的可以达到本发明要求的常规试剂。制备实施例实施例I益智浸膏的制备取益智药材100g，将其放在煎煮锅内，第一次加入8倍于药材重量的水，煎煮I小时；第二次给予6倍于药材重量的水，煎煮I小时，合并两次煎液，并滤过。在70°C条件下， 将滤液浓缩成相对密度为I. 30，后在60°C条件下，经抽真空干燥处理，经100目过筛，制成浸膏14. Ig0合方药物浸膏的制备 取生药材益智50g,三七40g,天麻35g,将其放在煎煮锅内，第一次给予8倍于药材重量的水，煎煮I小时；第二次给予6倍于药材重量的水，煎煮I小时，合并两次煎液，并滤过。在70°C条件下，将滤液浓缩成相对密度为I. 30，后在60°C条件下，经抽真空干燥处理，经100目过筛，得到浸膏29. 25g，出膏率23. 4%。实施例2使用益智150g，三七40g，天麻30g，按照实施例I相同的方法制备药物浸膏24. Sg,出膏率11. 3%。将得到的浸膏12. 4g喷雾干燥成干浸膏粉，后加入适量的糊精和蔗糖共5. Ig,混合搅拌均匀，加入胶囊中，制成胶囊50粒，每胶囊O. 35g，每次5粒，每日两次。实施例3使用的益智50g，三七40g，天麻30g，按照实施例I相同的方法制备药物浸膏18g，出膏率15%。取得到的浸膏9g，加入淀粉4. 0g，硬脂酸镁O. 5g混合搅拌均匀，后进行压片，压成45片，制成片剂，每片O. 30g,每次3片，每日三次。实施例4使用的益智80g，三七120g，天麻90g，按照实施例I相同的方法制备药物浸膏52. Sg,出膏率18. 2%。取浸膏26. 4g在60°C条件下，经抽真空干燥处理，经100目过筛，制成粉末，加入30g炼蜜和3. 6g红糖,混合搅拌均勻,后进行塑型成圆形,制成10丸,每丸6g,每日两次，每次I丸。实施例5取生药材益智IOg,三七8g,天麻7g,将其放在煎煮锅内，第一次给予8倍于药材重量的水，煎煮I小时；第二次给予6倍于药材重量的水，煎煮I小时，合并两次煎液，并滤过，制成水煎剂，将得到煎液的等分为两份，每次服用一份，每日服用两次。实施例6 取生药材益智60g，三七35g，天麻25g，按照实施例5的方法制成水煎剂后，将得到煎液的等分为两份，每次服用一份，每日服用两次。实施例7取生药材益智仁IOg,三七8g,天麻7g,远志8g,胡桃肉10g。按照实施例5的方法制成水煎剂后，将得到煎液的等分为两份，每次服用一份，每日服用两次。
效果实施例II.实验用药单味益智浸膏实施例I制备的益智浸膏本发明药物组合物的浸膏实施例I制备的本发明药物组合物的浸膏。2.含药血清的制备取健康雄性SD (Sprague Dawley)大鼠90只，体重200± IOg,随机分为9组,每组10只。即正常组(等体积的蒸馏水)，模型组(等体积的蒸馏水)，西药组(尼莫地平8. Img/kg),益智仁高剂量组(I. 8g/kg)(简称益高组)，益智仁中剂量组(O. 9g/kg)(简称益中组)，益智仁低剂量组(O. 45g/kg)(简称益低组)，合方高剂量组(本发明药物组合物I. 05g/kg)(简称合高组)，合方中剂量组(本发明药物组合物O. 53g/kg)(简称合中组)，合方低剂量组(本发明药物组合物O. 26g/kg)(简称合低组)。灌胃给药，I次/d，连续7d。末次给药 后，动物禁食，次日10%水合氯醛麻醉(O. 35ml/100g)，腹主动脉取血，室温静置2h后，4°C，3000r/min,离心IOmin,分离血清,经56°C, 30min水浴灭活,O. 22 μ m滤膜过滤灭菌,冻存管分装，-80°C保存备用。3.皮层神经元的原代培养24h内新生SD大鼠4只，头部75%酒精消毒后，取脑组织，分离皮层，用解剖液清洗2次，显微镜下去除血管、脑膜等结缔组织，在平皿中剪成Imm3碎块，加入与平皿中解剖液等体积的EDTA (终浓度O. 02%)/胰酶(终浓度为O. 125%)混合液，37°C消化25min，中间轻摇两次。吸出组织块于15ml离心管，加入接种液终止消化，4°C、1000r/min、离心5min，弃上清液。加入约IOml接种液吹打、静置、取上清液，用200目滤网过滤，上述吹打步骤反复进行，直到组织完全溶解。收集细胞悬液，取20 μ I滴入细胞计数板，进行活细胞计数，调整细胞密度至1*106个/ml，均匀接种在事先O. 001%多聚赖氨酸包被过的2块96孔培养板和3块24孔培养板中，静置在37°C、5%C02饱和湿度CO2培养箱内培养24h，后全部换成维持液，后每隔2d将维持液的一半进行换液I次，并在倒置显微镜下观察细胞生长情况，准备待用。培养液组成接种液79. 5%DMEM (达尔伯克(氏)必须基本培养基)+10%马血清+10%胎牛血清+0. 5%青链霉素维持液96. 5%NBM (迈内特(氏)基底核神经细胞诱导培养基，英文全称Neurobasal A Medium) +2%B27 (是神经元无血清培养的常用添加剂，在N2添加剂的硒、腐胺、铁传递蛋白和孕酮等成分的基础上进一步添加了激素、抗氧化剂等成分)+1%NGF (神经生长因子)+0. 5%青链霉素4.皮层神经元给药细胞培养至第10d，弃去维持液，向上述2块96孔培养板和3块24孔培养板中加入等量预热的含药物血清的培养液，其中各板的分组情况根据测定方法不同而不同，具体见测定方法时的分组情况，其中关于分组主要分为9组空白组，模型组，西药组，益智仁高剂量组，益智仁中剂量组，益智仁低剂量组，本发明药物组合物高剂量组，本发明药物组合物中剂量组，本发明药物组合物低剂量组，将上述给药后的神经元细胞在37°C下培养24h，待用。其中含药培养液组成
5%含药血清+5%马血清+0. 5%青链霉素+89. 5%DMEM5.皮层神经元谷氨酸损伤模型制备药物作用24h后，除正常组加入等量的DMEM外，各组加入DMEM配制的Glu (Glu终浓度为200 μ mol/L)，在37°C下培养20min，弃上清液，用预热的D-Hanks液洗2次，加入DMEM，37°C 培养 24h。6.检测6. I MTT 检测6. I. I MTT 检测原理MTT名为噻唑蓝，为淡黄色，MTT试验是用于分析活的、具有代谢活性的哺乳动物细胞活力的一种方法。活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶能作用于MTT的四氮唑环，使其断 裂，形成兰紫色结晶物-甲瓒衍生物，沉积在细胞内。该结晶可被二甲基亚砜(DMSO)溶解，在560-610nm处有一个较宽的最大吸收峰，用酶标仪可定量测定570nm处光密度值(OD)。由于甲瓒生成量与线粒体琥珀酸脱氢酶活性呈正相关，可用OD值大小反映琥珀酸脱氢酶的活性，从而间接反映活细胞数量。活细胞越多，紫色产物越多，则OD值越高。MTT代谢率实际上是反映线粒体内膜脱氢酶的活性，即反线粒体的功能，而线粒体为细胞能量供应的工厂，故MTT代谢率降低，意味着细胞代谢活力降低。在细胞的病理变化中，线粒体被认为是细胞受损最灵敏的指标，因此MTT法能够十分灵敏地反映细胞毒性程度。6. I. 2 MTT 检测步骤将一块96孔板中上清液弃去，每孔加入100 μ 1DMEM，再加入20 μ IMTT (PBS配为5mg/ml)，混匀，37°C孵育4h。弃上清液，每孔加入150 μ 1DMS0,室温振荡lOmin，用酶标仪测定570nm的OD值。细胞存活率=(各组吸光度值/空白组吸光度值)X 100%。其中96孔板分组如表I所示，共有12列，每列8个复孔。表I 96孔板的分组情况表
权利要求
1.一种保护神经元或抑制神经元损伤的药物组合物，包含益智、三七和天麻。
2.如权利要求I所述保护神经元或抑制神经元损伤的药物组合物，包含 益智5-15重量份三七4-12重量份天麻3-10重量份。
3.如权利要求I或2所述保护神经元或抑制神经元损伤的药物组合物，包含 益智8-12重量份三七7-12重量份天麻5-9重量份； 优选为益智10重量份三七8重量份天麻7重量份。
4.如权利要求1-3任一项所述的保护神经元或抑制神经元损伤药物组合物，其中所述的神经元损伤是Glu损伤。
5.一种保护神经元或抑制神经元损伤的药物制剂，其采用权利要求1-4任一项所述的药物组合物和药学上可接受的辅料或载体制成。
6.如权利要求5所述保护神经元或抑制神经元损伤的药物制剂，所述药物制剂为片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、丸剂、控释制剂或口服液体制剂。
7.一种保护神经元或抑制神经元损伤的药物制剂单元，其中，每单元采用权利要求1-4任一项所述总重量12-37g的药物组合物和药学上可接受的辅料或载体制成，优选采用利要求1-4任一项所述总重量20-30g的药物组合物和药学上可接受的辅料或载体制成。
8.一种保护神经元或抑制神经元损伤的试剂盒，其特征在于含有1-3个权利要求7所述的试剂单元。
9.权利要求1-4任一项所述的药物组合物、权利要求5-6所述的药物制剂和/或权利要求7药物制剂单元在制备保护神经元或抑制神经元损伤的药物中的应用；优选所述神经元损伤是Glu的损伤。
10.权利要求1-4任一项所述的药物组合物、权利要求5-6所述的药物制剂和/或权利要求7药物制剂单元在制备治疗神经退行性疾病的药物中的应用。
11.如权利要求10所述的药物组合物在制备药物中的应用，所述的神经退行性疾病包含阿尔茨海默病、血管性痴呆、共济失调毛细血管扩张症、小脑萎缩症、帕金森氏病、原发性侧索硬化症和/或脊髓性肌萎缩症的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种药物组合物及其用途，具体来说，本发明涉及一种保护神经元或抑制神经元损伤的药物组合物，该药物组合物包含以下组分益智5-15重量份，三七4-12重量份，天麻3-10重量份。本发明还涉及一种保护神经元或抑制神经元损伤的药物制剂，以及一种药物制剂单元及试剂盒。本发明还提供了所述的药物组合物在制备保护神经元的药物中的应用；优选在制备治疗神经退行性疾病的药物中的应用；更优选在制备治疗阿尔茨海默病、血管性痴呆、共济失调毛细血管扩张症、小脑萎缩症、帕金森氏病、原发性侧索硬化症和脊髓性肌萎缩症的药物中的应用。
文档编号A61P25/16GK102813868SQ201210270268
公开日2012年12月12日 申请日期2012年7月31日 优先权日2012年7月31日
发明者李傅尧, 马捷, 李峰, 刘晓萌, 景昊 申请人:李峰