9)。然而，当考虑用于设置合适条件和标准的实验时，实际需要的细胞数目进一步增加。
[0021]解决上述现有间充质干细胞培养系统的问题的最理想备选方案是使用人全能性干细胞以产生间充质干细胞。然而，目前为止，从人全能性干细胞分化成间充质干细胞的诱导需要通过特定细胞因子(例如BMP、bFGF)的诱导步骤，其花费高昂且需要对浓度进行控制，或需要在具有异种病原体风险的异种供体(0P9小鼠细胞系)上的诱导步骤和其后通过特定标记物(例如CD73)的分选。由于这些原因，间充质干细胞在再生药物和细胞疗法领域中用作理想细胞治疗产物具有局限性。
【发明内容】
[0022]技术问题
[0023]进行本发明以解决本领域中存在的上述问题，且本发明的目的是使用源自人胚胎干细胞的间充质干细胞开发用于预防和/或治疗肝纤维化和肝硬化的药物组合物或功能性保健食品。
[0024]然而，通过本发明实现的技术目的不限于上述目的，但本领域的技术人员从如下说明将显而易见地理解其他未提及的目的。
[0025]技术方案
[0026]为实现上述目的，本发明提供用于预防和/或治疗肝纤维化或肝硬化的组合物，其包含源自人胚胎干细胞的间充质干细胞作为活性成分。
[0027]本发明还提供用于缓解和/或预防肝纤维化和肝硬化的功能性保健食品，其包含源自人胚胎干细胞的间充质干细胞作为活性成分。
[0028]本发明还提供用于治疗肝纤维化或肝硬化的方法，其包括将源自人胚胎干细胞的间充质干细胞施用至受试者的步骤。
[0029]本发明还提供源自人胚胎干细胞的间充质干细胞作为活性成分用于治疗肝纤维化或肝硬化的用途。
[0030]优势作用
[0031]本发明的间充质干细胞可从所有人的全能干细胞通过分化获得，而无论其基因背景的差异，且具体地，可将其诱导以从人胚胎干细胞分化，并可通过增殖培养以大量产生。此外，本发明的间充质干细胞与常规源自骨髓的间充质干细胞相比对肝纤维化的预防具有优异效果，且因此可有效用作可预防和治疗肝纤维化或肝硬化的细胞治疗产物或功能性保健食品中的活性成分。
[0032]附图简述
[0033]图1是总结用TAA和间充质干细胞处理的测试动物的时间间隔和取样步骤的示意图。
[0034]图2显示对未处理的正常组(TAA-/E-MSC-)、用TAA处理以诱导肝纤维化的测试组(TAA+/E-MSC-)和诱导肝纤维化后用间充质干细胞注射的测试组(TAA+/E-MSC+)实施Masson三色(MT)染色的结果。此处，图2a显示MT染色结果的显微镜观察结果，图2b显示纤维化程度的数字量化结果。
[0035]图3显示对未处理的正常组(TAA-/E-MSC-)、用TAA处理以诱导肝纤维化的测试组(TAA+/E-MSC-)和诱导肝纤维化后用间充质干细胞注射的测试组(TAA+/E-MSC+)的肝组织实施Pico-Sir ius红染色的结果。
[0036]图4显示对未处理的正常组(正常)、用TAA处理以诱导肝纤维化的测试组(仅TAA)和通过TAA处理诱导肝纤维化后用间充质干细胞注射的测试组(TAA+E-MSC)实施免疫组化的结果。
[0037]图5显示在图4所示的结果中，扩大并观察通过TAA处理诱导肝纤维化后用间充质干细胞注射的测试组(TAA+E-MSC)中与人特异型抗体HLA-abc反应部分的结果。
[0038]图6显示对未处理的正常组(TAA-/E-MSC-)、用TAA处理以诱导肝纤维化的测试组(TAA+/E-MSC-)和通过TAA诱导肝纤维化后用间充质干细胞注射的测试组(TAA+/E-MSC+)的肝组织测量肝毒性参数(AST和ALT)的结果。
[0039]图7显示对未处理的正常组(正常)、用TAA处理以诱导肝纤维化的测试组(TAA)和通过TAA诱导肝纤维化后用人胚胎干细胞衍生的间充质干细胞注射的测试组(TAA+/E-MSC)，和通过TAA诱导肝纤维化后用骨髓衍生的间充质干细胞注射的测试组的肝组织实施MT染色、观察和量化评估的结果。
[0040]用于实施本发明的最佳模式
[0041]发明人已从人全能干细胞特别是人胚胎干细胞产生大量的间充质干细胞，且已发现产生的间充质干细胞具有针对肝纤维化的预防性作用，表明源自人胚胎干细胞的间充质干细胞可在用于保护肝脏和预防和治疗肝纤维化或肝硬化的组合物中有效用作活性成分，由此完成本发明。
[0042]此后，将对本发明进行详述。
[0043]本发明提供用于预防和/或治疗肝纤维化或肝硬化的组合物，其包含源自人胚胎干细胞的间充质干细胞作为活性成分。
[0044]本发明还提供用于治疗肝纤维化或肝硬化的方法，其包括将源自人胚胎干细胞的间充质干细胞施用至受试者的步骤。
[0045]根据本发明的间充质干细胞有效通过包括下列a)_c)步骤的方法产生，但不限于此:a)从人全能肝细胞形成胚体;b)将胚体附着至组织培养皿，并诱导附着的胚体以自发分化成间充质干细胞;且c)维持并增殖性培养由胚体分化诱导产生的间充质干细胞。
[0046]此外，从人全能干细胞形成胚体的步骤可根据本领域已知的方法实施。例如，该步骤可通过用蛋白酶处理人全能干细胞并以板或悬液状态在无bFGF(基础成纤维细胞生长因子)胚胎干细胞培养基中培养经处理的人全能干细胞来实施。
[0047]此外，间充质干细胞优选由包括下列步骤a)_c)的方法产生，但不限于此:
[0048]a)培养人全能干细胞12-16天以形成胚体；
[0049]b)在包含补充了 FBS(胎牛血清)的基础 DMEM(Dulbecco ’ s Modified Eagle’sMedium)的培养基中培养胚体以诱导胚体分化成间充质干细胞;和
[0050]c)在维持间充质干细胞特性(identity)的同时增殖性培养间充质干细胞。
[0051]如本文使用，术语“干细胞”指可无限繁殖以形成组织或器官的特化的细胞的主细胞。干细胞是发育上全能或多能的细胞。干细胞可分裂以产生两个子干细胞，或一个干细胞和一个祖(“过度”)细胞，其随后增殖成组织成熟的完全成形的细胞。这种干细胞可以多种方式分类。根据分化能力(其为最常用于分类的方法)可将干细胞分为能够分化成三胚层的全能干细胞、能够分化成三胚层中一或多层的多能干细胞，和仅能够分化成某种胚层的单能干细胞。
[0052]如本申请使用的，“全能干细胞”指具有分化成生物体三胚层中任何的潜力的干细胞，且一般包括胚胎干细胞和诱导的全能干细胞(iPSs)。成人干细胞可分为多能干细胞和单能干细胞。
[0053]如本申请使用的，术语“分化”指其中细胞的结构或功能在分裂、增殖和其生长过程中特化的现象，即，生物体细胞或组织的特征和功能改变以实施给予细胞或组织的功能。一般而言，其指其中相对简单的系统分为两种或多种性质不同的部分系统的现象。例如，其意指任何生物系统的部分之间发生性质的差别(所述生物系统在最初彼此相同)，例如卵的部分间的差异如头或身体(其在个体发育中最初彼此性质上相同)发生，或细胞间差异如肌细胞或神经细胞发生，或作为其结果生物系统分为性质上可区别的部分或部分系统。
[0054]当全能干细胞无板或支持物在无bFGF(基础成纤维细胞生长因子)的胚胎干细胞培养基中悬浮培养时，可产生分化衍生物。如本领域报道，由该方法产生的分化衍生物可根据特定的诱导物分化成形成内胚层、中胚层和外胚层所需的全部细胞类型，且该方法是用于证明全能干细胞全能性的体外方法。
[0055]如本文使用，术语“细胞治疗剂”指用于治疗、诊断和预防目的的药物，其包含通过从人、培养物和特