定操作(如由US FDA提供)分离制备的细胞或组织。具体地，其指通过体外倍增和分选活的自体、同种异体和异种细胞或通过用于恢复细胞和组织的功能的其他方式改变细胞的生物特征的一系列行为用于治疗、诊断或预防目的的药物。
[0056]根据本发明用于预防和/或治疗肝纤维化或肝硬化的组合物包含源自人胚胎干细胞的间充质干细胞作为活性成分，其可作为细胞单独或在温育器中在细胞培养后注射入患者身体。例如，1^11(1￥&11等(1989，厶1'。11.如111'01.46:615-31)或001^1已8 Kondz1lka(Douglas Kondz1lka,Pittsburgh, 1998)报道的临床方法可用于施用所述组合物。除可从源自人胚胎干细胞的间充质干细胞初始分化的脂肪、骨、肌肉，神经元、软骨和心肌细胞外，所述组合物的制剂可包括药物上可接受的常规载剂。对于注射，所述制剂可包含防腐剂、止痛剂、增溶剂、稳定剂等，且对于局部施用，所述制剂可包含基底(base)、赋形剂、润滑剂、防腐剂等。
[0057]包含于本发明的药物组合物中的药物可接受载剂通常用于制剂中。其实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、甲基羟基苯甲酸酯、丙基羟基苯甲酸酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油，但不限于此。除上述组分，本发明的药物组合物可进一步包括润滑剂、润湿剂、甜味剂、芳香剂、乳化剂、悬浮剂和防腐剂。
[0058]根据本发明的药物组合物可根据本领域的技术人员容易实施的方法使用药物可接受的载剂和/或赋形剂制备成单剂量形式或多剂量包装。此处，所述药物组合物的制剂可为在油或水性介质中的药物组合物的溶液、悬浮液或乳液，且可进一步包括分散剂或稳定剂。
[0059]根据本发明的药物组合物可肠胃外施用(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)。优选地，根据本发明的药物组合物可通过心内注射施用。用于肠胃外施用的根据本发明的组合物(例如可注射溶液)可通过在药物可接受的载剂中的其分散液和/或溶液体内注射，例如，无菌纯化的水、约pH 7的缓冲剂或盐水溶液。本发明的药物组合物可包括常规的添加剂如防腐剂、稳定剂等。
[0060]此外，在本发明中，注射的间充质干细胞的量并无特定限制，但可为14-1O1t3细胞/注射，优选15-1O9细胞/注射，更优选5X 17细胞/注射。本发明的药物组合物的优选剂量可取决于多种因素合适地选择，包括配制方法、施用方法、患者年龄、体重、性别、疾病的严重性、饮食、施用路径和时间、排泄速度和响应的敏感性。
[0061]如本文使用，术语“预防”指通过施用本发明的组合物抑制肝纤维化或肝硬化或延迟肝纤维化或肝硬化进展的全部活动。
[0062]如本文使用，术语“预防”或“防止”指与通过施用本发明的组合物抑制或延迟肝纤维化或肝硬化相关的各种活动。
[0063]如本文使用，术语“治疗”或“缓解”指通过施用本发明的组合物缓解或有益改变肝纤维化或肝硬化的各种活动。
[0064]除非另外表明，本文使用的术语具有与本发明所述领域的技术人员通常理解的相同的含义。
[0065]本发明的药物组合物可与已通常用于治疗或预防肝纤维化和肝硬化的治疗方法组合施用。
[0066]本发明还提供用于缓解和/或预防肝纤维化和肝硬化的功能性保健食品，其包含源自人胚胎干细胞的间充质干细胞作为活性成分。
[0067]如果根据本发明的源自人胚胎干细胞的间充质干细胞用作食品添加剂，这些细胞可单独添加或可适当地与根据常规方法的其他食品或食品成分一起使用。组合物中的活性成分的含量可根据使用的目的(预防、保健或治疗处理)适当确定。一般而言，基于原材料的总重量，源自人胚胎干细胞的间充质干细胞在食品或饮品生产过程中可以0.0001-30wt%，优选0.1_10^%的量添加，但添加的源自人胚胎干细胞的间充质干细胞的量可依赖于其意欲的用途适当控制。对食品种类无特定限制。可添加源自人胚胎干细胞的间充质干细胞的食品的实例可包括肉、香肠、面包、巧克力、糖果(candies)、小吃、糖果(confect1nery)、披萨、面条、口香糖、乳制品包括冰淇淋、多种汤、饮料(be verage s)、茶、饮品(dr inks)、酒精饮料和多种维生素制备物。实施例
[0068]此后，本发明将参照实施例进一步说明。对本领域的技术人员显而易见的是这些实施例仅出于说明目的而不应理解为对本发明保护范围的限制。因此，本发明的实质性保护范围将通过所附权利要求和其等同物限定。
[0069]实施例1:源自人胚胎干细胞的间充质干细胞的产生
[0070]根据本发明的源自人胚胎干细胞的间充质干细胞根据下列方法构建和培养。
[0071](I)胚体的形成
[0072]首尔国立大学医院(Seoul Nat1nal University Hospital)中保持在未分化状态的人胚胎干细胞(东方#1，男性，STO补料器)用中性蛋白酶(dispase) (2mg/ml)处理并通过微操作分离，随后在无bFGF胚胎干细胞培养基中悬浮培养14天。
[0073](2)分化成间充质干细胞的诱导
[0074]由14天的悬浮培养制成的胚体附于组织培养皿，且随后诱导附着的胚体自发分化成间充质干细胞。当胚体在包含10% (v/v)的FBS(胎牛血清)的DMEM(Dulbecco ’ s ModifiedEagle’s Medium)中培养16天时，观察到胚体分化成间充质干细胞的诱导。
[0075](3)从分化的诱导产生的间充质干细胞的维持和增殖性培养
[0076]将实施例1-(2)中胚体附着后通过16天培养将从胚体分化的间充质干细胞通过用胰蛋白酶_EDTA(0.25%具有EDTA 4Na的胰蛋白酶)处理解离成单细胞，且随后再次附着至组织培养皿。随后，将细胞维持并在500ml的培养基(EGM-2MV，CC4147，Lonza)中于37°C增殖培养，所述培养基包含470ml的基础培养基、0.5ml的hEGF(人表皮生长因子)、0.5ml的VEGF(血管内皮生长因子)、2ml的hFGF-B(人基础成纤维细胞生长因子)、0.5ml的IGF-1(胰岛素样生长因子)、0.2ml的氢化可的松和0.5ml的抗坏血酸。
[0077]实施例2:源自人胚胎干细胞间充质干细胞对肝纤维化的预防作用
[0078]为检查实施例1中产生的间充质干细胞是否具有预防肝纤维化的作用，测试动物用已知作为肝纤维化诱导剂的硫代乙酰胺(TAA5C2H5NS)处理以诱导肝硬化。此外，间充质干细胞心内注射入测试动物，且检查动物中的肝硬化是否得到缓解。
[0079]硫代乙酰胺(TAA5C2H5NS)是一种与CCl4或D-半乳糖胺相似的诱导细胞坏死或死亡的肝毒素，已知硫代乙酰胺干扰RNA从核迀移入细胞质由此诱导对细胞膜的损伤和细胞结构和功能的破坏。
[0080]具体地，用TAA(在0.9 %正常盐水溶液中)以200mg/kg体重的剂量腹膜内注射免疫缺陷的小鼠(裸鼠，雄性、8-12周龄，Orient B1)，每周三次进行3周以诱导纤维化。在用TAA首次处理的24小时后，将实施例1中产生的5xl04细胞的间充质干细胞通过心内注射施用至小鼠一次，且在用TAA最终处理后的24小时，从小鼠取样组织并进行分析(图1)。①视觉观察取样的组织以确定组织聚集程度，②通过使用组织切片的纤维化Masson三色(Masson’strichrome)染色分析以比较纤维化缓解程度，③使用人细胞特异性表达因子HLA-abc通过免疫组化分析以确定注射的间充质干细胞是否残余，且④测