中的应用：
[0121] W1、抑制关节表面纤维化的产品；
[0122] W2、抑制软骨侵蚀的产品；
[0123] W3、预防和/或治疗滑膜炎的产品；
[0124] W4、保护软骨和/或滑膜的产品；
[0125] W5、预防和/或治疗类风湿性关节炎的产品。
[0126] 本发明提供的siRNA可以作为关节炎及相关炎症的治疗药物，可通过骨关节腔局 部注射siRNA或其制剂抑制炎症因子表达实现对关节炎症的治疗。
【附图说明】
[0127] 图1为抑制ADAMTS-5基因的有效siRNA筛选。
[0128] 图2为siRNA-RB-04免疫印迹实验。
[0129] 图3为siRNA-RB-04下调炎症因子。
[0130] 图4为siRNA结构对靶基因沉默效果的影响。
[0131] 图5为硫代磷酸（P-S键）的修饰位置示意图。
[0132] 图6为化学修饰增强寡聚核酸血清稳定性。
[0133] 图7为大鼠组织病理切片分析。
[0134] 图8为大鼠关节液炎症因子含量。
[0135] 图9为抑制ADAM17基因的有效siRNA筛选。
[0136] 图10为siRNA-AD-08免疫印迹实验。
[0137] 图11为siRNA-AD-08下调炎症因子。
[0138] 图12为siRNA结构对靶基因沉默效果的影响。
[0139] 图13为化学修饰增强寡聚核酸血清稳定性。
[0140] 图14为大鼠组织病理切片分析。
[0141] 图15为大鼠关节液炎症因子含量。
[0142] 图16为siRNA联合应用下调炎症因子。
[0143] 图17为大鼠组织病理切片分析。
【具体实施方式】
[0144] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0145] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0146] hFLS细胞（人成纤维样滑膜细胞）为Cell Applications产品，产品目录号为 408_05aD
[0147] 293T细胞为ATCC产品，产品目录号为CRL-3216。
[0148] MCF-7细胞为ATCC产品，产品目录号为HTB-22。
[0149] Human IL-I β immunoassay检测试剂盒为AssayPro产品，产品目录号为 EI2200-1。
[0150] pGCsi-Hl/Neo在文献"季国忠，张发明，黄曙等.Smad4/DPC4基因小发夹RNA质粒 表达载体的构建和鉴定[J].医学研宄生学报，2006，19(11) :973-977"中公开过，公众可从 广州市锐博生物科技有限公司获得。
[0151] Lipofectamine2000 试剂盒为 Invitrogen 产品。
[0152] 雄性SD大鼠（220±20g)为广东省医学实验动物中心产品。
[0153] 下述实施例中的siRNA均为双链siRNA分子，注射大鼠的各注射液的溶剂均为 PBS0
[0154] 实施例1、抑制ADAMTS-5基因 mRNA表达的有效寡聚核酸的筛选
[0155] 一、进行siRNA设计以确定靶向于ADAMTS-5的siRNA，并进行生物信息筛选，确保 序列对于ADAMTS-5序列是特异性的且对于来自任何其他基因的序列不是特异性的。靶序 列使用NCBI提供的BLAST搜索引擎相对于GenBank中的序列进行核对，经过初步实验筛 选出 8 个有效 siRNA，分别命名为 siRNA-RB-01、siRNA-RB-02、siRNA-RB-03、siRNA-RB-04、 siRNA-RB-05、siRNA-RB-06、siRNA-RB-07、siRNA-RB-08。以上 siRNA 为针对 ADAMTS-5 基 因序列不同位置设计的siRNA。
[0156] 二、细胞转染
[0157] 实验分为 10 组，分别为 siRNA-RB-01 至 siRNA-RB-08 实验组，No target (NTC)阴 性对照组、NC空白对照组。
[0158] siRNA-RB-01至siRNA-RB-08实验组的设置方法如下：
[0159] 将hFLS细胞用0. 25%的胰酶进行消化，用DMEM培养基制成浓度为I X IO4个/ml 的细胞悬液，将其接种于12孔培养板中，每孔500ul，当hFLS细胞生长至对数生长期（即 生长达80%融合成片）时，按照Lipofectamine2000试剂盒的说明书，将各个对应的siRNA 按照50nM的终浓度转染hFLS细胞。
[0160] No target (NTC)阴性对照组：将实验组的siRNA替换为随机非特异siRNA，其余步 骤不变。其中，随机非特异siRNA不是特异针对于靶基因（ADAMTS-5基因）所设计的siRNA， 序列如下：
[0161] 正义链：5' -AGAUCGUUAGUUAGGUUGC dTdT-3' ；
[0162] 反义链：5 ' -GCAACCUAACUAACGAUCUdTdT-3 '。
[0163] NC空白对照组：不加 siRNA，其余步骤与实验组一致。
[0164] 三、在转染24h后收集各组hFLS细胞，于IOOOrpm离心5分钟，去除上清，Trizol 法提取各组的RNA。
[0165] 四、将各组的RNA反转录为cDNA，以各组的cDNA为模板，以F和R为引物，进行实 时荧光定量PCR，检测结果如图1所示，以β-actin为内参基因。
[0166] 引物如下：
[0167] F: 5 ' -CTGCTCCCAGAAACAACG-3 ' ；
[0168] R: 5 ' -ATTCAGTGCCATCGGTCA-3 '。
[0169] 图1表明，经过前期筛选获得的8个有效siRNA中，siRNA-RB-04对ADAMTS-5的 基因的沉默效果最好，抑制了 90%的基因表达量。
[0170] 其中siRNA-RB-04正义链的序列如SEQ ID No. 1所示，反义链的序列如SEQ ID No. 2所示。
[0171] siRNA-RB-04 正义链：5' -GGAUUUAUGUGGGCAUCAU-3'（SEQ ID No. 1)
[0172] siRNA-RB-04 反义链：5'-AUGAUGCCCACAUAAAUCC-3'（SEQ ID No. 2)
[0173] 五、Western blot 检测
[0174] 取siRNA-RB-04实验组的hFLS细胞，弃去细胞培养液，用PBS洗涤细胞2遍，倒 掉PBS，加入适量预冷的2XLysis Buffer，用细胞刮将细胞刮下，置于冰上充分裂解细胞 30min，于低温离心机4°C，12000g，离心15min，取上清液，用Bradford法测定蛋白浓度，最 后将样品蛋白的终浓度均调整为2 μ g/ μ 1，于_80°C冰箱保存备用。分别取12 μ g总蛋白 量的样品，加入等体积的2X loading buffer上样缓冲液。将二者充分混匀后，在沸水中煮 浴10分钟，4°C存放备用。根据目的蛋白分子量大小配制相应浓度的胶（10%的SDS-PAGE 分离胶和5 %的浓缩胶），等胶制备好后，将梳子拔去后用电泳缓冲液清洗上样孔，将之前 准备好的样品上样，每孔加入蛋白样品，进行电泳。电泳结束后，使用转移电泳装置，在4°C， 400mA恒流条件下电转2小时，将蛋白转移到PVDF膜上，随后进行显色和曝光分析。
[0175] 同时以NC空白对照组和No target (NTC)阴性对照组进行上述实验作为对照。
[0176] 结果如图2所示。
[0177] 图2中，Control为NC空白对照组，no target为No target (NTC)阴性对照组， siRNA 为 siRNA-RB-04 实验组。
[0178] 图2表明，siRNA-RB-04显著抑制了 ADAMTS-5的蛋白表达，后续选用siRNA-RB-04 做进一步分析。
[0179] 实施例2、寡聚核酸对炎症因子的抑制
[0180] 一、实验分为如下各组：
[0181] 1^1^-8丨1?隱-1?-04实验组：原代培养1^1^细胞至6孔板，当细胞密度约50%时， 按照Lipofectamine2000试剂盒说明书，将siRNA-RB-04按照50nM的终浓度转染hFLS细 胞。
[0182] 2931'-8丨1?隱-1?-04实验组：原代培养2931'细胞至6孔板，当细胞密度约50%时， 按照Lipofectamine2000试剂盒说明书，将siRNA-RB-04按照50nM的终浓度转染细胞。
[0183] hFLS-No target (NTC)阴性对照组：将 hFLS-siRNA-RB-04 实验组的 siRNA 替换为 随机非特异siRNA，其余步骤与hFLS-siRNA-RB-04实验组一致。其中，随机非特异siRNA不 是特异针对于靶基因（ADAMTS-5基因）所设计的siRNA :
[0184] 正义链：5' -AGAUCGUUAGUUAGGUUGC dTdT-3' ；
[0185] 反义链：5 ' -GCAACCUAACUAACGAUCUdTdT-3 '。
[0186] 293T-No target (NTC)阴性对照组：将 293T-siRNA-RB-04 实验组的 siRNA 替换为 随机非特异siRNA，其余步骤与293T-siRNA-RB-04实验组一致。其中，随机非特异siRNA不 是特异针对于靶基因（ADAMTS-5基因）所设计的siRNA :
[0187] 正义链：5' -AGAUCGUUAGUUAGGUUGC dTdT-3' ；
[0188] 反义链：5 ' -GCAACCUAACUAACGAUCUdTdT-3 '。
[0189] hFLS-NC空白对照组：hFLS-siRNA-RB-04实验组中不加 siRNA，其余步骤与 hFLS-siRNA-RB-04 实验组一致。
[0190] 293T-NC空白对照组：293T-siRNA-RB-04实验组中不加 siRNA，其余步骤与 293T-siRNA-RB-04 实验组一致。
[0191] 二、转染24小时后，换无血清饥饿培养各组细胞24小时。
[0192] 三、在各组细胞中加入IL l-α，使其终浓度为l〇ng/ml，刺激24小时。
[0193] 四、提取各组细胞的RNA并反转录为cDNA，以各组的cDNA为模板，分别以TNF-F和 TNF-R为引物，以cox2-F和cox2-R为引物，以IL-1I3-F和IL-Iii-R为引物，进行实时荧光 定量PCR，对应的检测TNF、C0X-2和IL-Ιβ基因的表达水平，以β-actin为内参基因。
[0194] TNF-F: 5，-CGAGTGACAAGCCTGTAGCC-3，；
[0195] TNF-R: 5 ' -TGAAGAGGACCTGGGAGTAGAT-3 '。
[0196] cox2-F :5,-CAGGGTTGCTGGTGGTAGGA-3' ；
[0197] cox2