8. 4Hz)，7. 38 (t，1H)，7. 28 (s，1H)，7. 20 (d，1H，J=7. 2Hz)， 6. 90 (m, 1H) ,6. 87 (m, 1H) ,6. 53 (m, 1H) ,4. 19 (s, 1H), 3. 98(s,3H) ,3. 38 (m, 2H. ) ,2. 54 (m, 1H)，2. 12 (m，1H)，0· 39 (m，2H)，0· 27 (m，2H)。
[0145] ESI_MS(m / z) :[Μ+Η]+414· 2。
[0146] 实施例6 : (E) -N- (4- (3-乙炔某苯胺某）-7-乙氣某喹啤啉-6-某）-4-(环丙某胺 某）-2- 丁烯酰胺（化合物6)的合成
[0147]
[0148] a. N- (3-乙炔某苯某）-6-硝某-7-乙氣某喹啤啉-4-胺的合成
[0150] 将无水乙醇（4. 4g)与300ml四氢呋喃混合均匀，剧烈搅拌下加入叔丁醇钾（16g)， 加毕，室温搅拌1. 5小时。降温至5°C，分批加入7-氟-6-硝基-4-羟基-喹唑啉（IOg)， 完全加完后升至室温搅拌，TLC跟踪至反应完毕后。降温至5°C，滴加水300ml。滴毕，控制 内温5°C，用6mol / L盐酸调PH到6~7。在35°C条件下减压浓缩，抽滤，滤饼用50ml纯 化水淋洗2次，60°C鼓风干燥3小时得7-乙氧基-6-硝基-4-羟基-喹唑啉（中间体A) (10.2g，收率 91% )。
[0151] 将中间体A(10.2g)混悬于300ml三氯甲烷中，搅拌均匀后降温至5°C，向滴入草酰 氯（18ml)。滴毕，维持该反应温度，搅拌下滴入DMF的三氯甲烷溶液（2ml溶解在50ml三氯 甲烷中）。完全加完后，升温至70°C回流反应，TLC跟踪至反应完毕后。降温至25°C，向其 中分批加入无水硫酸镁（58g)和碳酸氢钠（40g)的混合物，加料过程中控制内温<30°C，加 毕，室温搅拌至反应液PH= 5-6左右。抽滤，滤饼用三氯甲烷淋洗2次（30ml)，制得中间体 B的溶液三氯甲烷溶液，直接进行下一步反应。
[0152] 20°C搅拌下向上述中间体B的溶液三氯甲烷溶液中滴入间乙炔基苯胺的三氯甲 烷溶液（8. 46g溶解在50ml三氯甲烷中），滴毕，35°C搅拌反应，TLC检测至中间体B消失， 反应完毕。直接抽滤，滤饼用50ml三氯甲烷淋洗2次，60°C真空干燥3-4小时得N-(3-乙 炔基苯基）-6-硝基-7-乙氧基喹唑啉-4-胺（中间体C，14g)。
[0153] b. (E)-N-(4_(3-乙炔某苯胺某）-7_乙氣某喹啤啉-6-某）-4-(环丙某胺 某）-2- 丁烯酰胺（化合物6)的合成
[0154]
[0155] 将中间体C(8g)溶于100mL乙醇和100mL纯化水中，搅拌均匀后加入还原铁粉 (6g，4. 5eq)，然后搅拌下分批加入氯化铵（5. 76g，4. 5eq)。加完升温至60°C温度搅拌反应， TLC跟踪至原料点消失。降温至KTC，加入100mL纯化水和200ml二氯甲烷后搅拌30分 钟，分离二氯甲烷相，水相用二氯甲烷等量萃取2次，合并二氯甲烷相，用200ml纯化水反萃 2次，有机相无水硫酸钠干燥，30°C条件下减压浓缩至干，所得固体在30°C条件下真空干燥 3小时得N-(3-乙炔基苯基）-6-胺基-7-乙氧基喹唑啉-4-胺（中间体D) (5. 47g，收率 76% ) 〇
[0156] 将中间体D (5. 47g)溶于四氢呋喃（200ml)中，降温至(TC，缓慢滴入4-溴巴豆酰 氯的四氢呋喃溶液（制备方法见实施例1)，TLC点板跟踪至中间体D点消失后停止滴入。 加适量水淬灭，减压移除四氢呋喃，加水200ml，二氯甲烷200ml萃取三次，合并二氯甲烷相 无水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析得黄色泡沫状固体中间体E (4. 4g，收率55 % )。
[0157] 将中间体E(4. 4g)溶于150ml DMF中，搅拌均匀后，加入环丙胺750mg，碳酸钾 2. 4g，碘化钾2. 2g。混合均匀后，升温至40°C搅拌反应，TLC跟踪至中间体E反应完全。加 水200ml，二氯甲烷等量萃取三次，合并二氯甲烷相，水硫酸钠干燥，减压浓缩后柱层析得目 标产物（E) -N- (4- (3-乙炔基苯胺基）-7-乙氧基喹唑啉-6-基）-4-(环丙基胺基）-2- 丁 烯酰胺（收率25% )(化合物6)。
[0158] 1H-NMlUeOOMHz, DMS0-d6，δ ppJ :9. 75 (s，lH)，9.46 (s，lH)，8.94 (s，lH)，8.53 (s， 1H)，8. 01 (s，1H)，7. 88 (d，1H，J=8. 4Hz)，7. 38 (t，1H)，7. 26 (s，1H)，7. 20 (d，1H，J=7. 2Hz)， 6. 91 (m, 1H) ,6. 54 (d, 1H, J=15. 0Hz) ,4. 30(q,2H) ,4. 20 (s, 1H), 3. 42(m,2H) ,2. 14 (m, 1H), I. 47 (t, 3H)，0· 39 (m, 2H)，0· 27 (m, 2H)。
[0159] ESI_MS(m / z) :[Μ+Η]+428· 3。
[0160] 实施例7 :(S, E)-N-(4_(3-乙炔某苯胺某）-7-(四氧呋喃-3-某氣某）喹啤 啉-6-某）-4-(环丙某胺某）-2- 丁烯酰胺（化合物7)的合成
[0161]
[0162] 与化合物1的制备类似的方法，以3-炔基苯胺为原料，可以得到化合物7 (19 %产 率），为黄色固体。
[0163] 1H-NMlUeOOMHz, DMS0-d6，δ ppJ :9.77 (s，lH)，9.41 (s，lH)，8.96 (s，lH)，8.53 (s， 1H)，8. 01 (s，1H)，7. 87 (d，1H，J=8. 4Hz)，7. 38 (t，1H)，7. 23 (s，1H)，7. 20 (d，1H，J=7. 8Hz)， 6. 90 (m，1H)，6. 55 (d，1H，J=15. 0Hz)，5. 29 (d，1H，J=3. 0Hz)，4. 20 (s，1H)，4. 00 (m，2H)， 3. 93 (m，1H)，3. 78 (m，1H)，3. 42 (m，2H)，2. 34 (m，1H)，2. 14 (m，2H)，0· 39 (m，2H)，0· 27 (m，2H)。
[0164] ESI_MS(m / z) :[Μ+Η]+470· 2。
[0165] 实施例8 : (E)-N-(4-(3-氯-4-氟苯胺某）-7-(2,2,2-三氟乙氣某喹啤 啉-6-某）-4-(环丙某胺某）-2- 丁烯酰胺（化合物8)的合成
[0166]
[0167] 与化合物1的制备类似的方法，以2,2,2_三氟乙醇为原料，可以得到化合物 8 (22%产率），为黄色固体。
[0168] 1H-NmrGOOMHz, DMS0-d6，δ ppJ :9. 86 (s，lH)，9. 58 (s，lH)，8.81 (s，lH)，8. 56 (s， 1H)，8. 13 (dd，1H，1=6. 8Hz，J2=2. 8Hz)，7. 79 (m，1H)，7. 48 (s，1H)，7. 42 (t，1H)，6. 88 (m，1H)， 6. 45 (d，1H，J=15. 6Hz)，5. 02 (m，2H)，3. 38 (m，2H)，2. 80 (m，1H)，2. 10 (m，1H)，0· 37 (m，2H)， 0· 24 (m，2H)。
[0169] MS(m / z) :[Μ+Η]+510· 2。
[0170] 实施例9:(S, E)-N-(4_(3-氯-4-氟苯胺某）-7-(四氧呋喃-3-某氣某）喹啤 啉-6-某）-4-(异丙某胺某）-2- 丁烯酰胺（化合物9)的合成
[0171]
[0172] 与化合物1的制备类似的方法，以异丙胺为原料，可以得到化合物9 (23 %产率）， 为黄色固体。
[0173] 1H-NmrGOOMHz, DMS0-d6，δ ppJ :9.80 (s，lH)，9.42 (s，lH)，8.92 (s，lH)，8.52 (s， 1H)，8. 12(dd，1H，1=6. 8Hz，J2=2. 4Hz)，7. 79(m，1H)，7. 42(t，1H)，7. 23(s，1H)，6. 87(m， 1H)，6. 56 (d，1H，J=15. 2Hz)，5. 28 (d，1H，J=3. 2Hz)，3. 99 (m，2H)，3. 93 (m，1H)，3. 78 (m，1H)， 3. 39 (m，2H)，2. 78 (m，1H)，2. 33 (m，1H)，2. 14 (m，1H)，I. 01 (d，6H)。
[0174] ESI_MS(m / z) :[Μ+Η]+500· 1。
[0175] 实施例10 :(S, E)-N-(4_(3-乙炔某苯胺某）-7-(四氧呋喃-3-某氣某）喹啤 啉-6-某）-4-(异丙某胺某）-2- 丁烯酰胺（化合物10)的合成
[0176]
[0177] 与化合物1的制备类似的方法，以三乙炔基苯胺和异丙胺为原料，可以得到化合 物10 (19%产率），为米黄色固体。
[0178] 1H-NmrGOOMHz, DMS0-d6，δ ppJ :9.74 (s，lH)，9.41 (s，lH)，8.93 (s，lH)，8.51 (s， 1H)，7. 99 (s，1H)，7. 86 (t，1H)，7. 37 (t，1H)，7. 22 (s，1H)，7. 18 (t，1H)，6. 86 (m，1H)，6. 55 (d， 1H，J=15. 6Hz)，5. 28 (d，1H，J=2. 8Hz)，4. 18 (s，1H)，3. 99 (m，2H)，3. 92 (m，1H)，3. 77 (m，1H)， 3. 38 (m，2H)，2. 76 (m，1H)，2. 30 (m，1H)，2. 14 (m，1H)，I. 01 (d，6H)。
[0179] ESI_MS(m / z) :[Μ+Η]+472· 3。
[0180] 生物学实验
[0181] 可以使用以下试验来测定本发明所述化合物对EGFR酪氨酸激酶的抑制作用以及 在体内对EGFR高表达的人鳞状表皮癌Α431裸鼠移植瘤的生长抑制作用。
[0182] A) EGFR激酶活件分析
[0183] 体外激酶分析用 Cell Signaling Technology 公司的 HTScan EGF Receptor Kinase Assay Kit (#7909)检测。操作步骤参照试剂盒说明书，该方法在体外检测待测化 合物对EGFR受体酪氨酸激酶对底物肽磷酸化的抑制作用。室温下激酶反应缓冲液中温育 ATP和底物肽以及待测化合物，孵育一段时间后，加入终止液终止反应并将样品转移到链霉 亲和素包被的96孔板中，洗板并用HRP标记的抗底物磷酸化抗体检测底物肽上的磷酸化水 平，用TMB显色，2M硫酸中止反应。检测450nm吸收波长，计算IC 5tl值（nM)。结果如表2所 /Jn 〇
[0184] 表2 :本发明化合物对EGFR磷酸化的抑制作用
[0185]
[0186] 注：阳性对照药物：N-[4_[(3-氯-4-氟苯基）氨基]-7-[[(3S)_四氢-3-呋喃 基]氧基]-6-喹唑啉基]-4-(二甲基氨基）-2- 丁烯酰胺。
[0187] B)本发明化合物对EGFRT790M耐药NCI-H1975细朐的增葙抑制作用分析
[0188] 本发明化合物对EGFRT790M耐药NCI-H1975细胞（该细胞是EGFRT90M突变细胞， 对吉非替尼、厄洛替尼等EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药，属肺癌细胞株）（购自上海细胞所） 的增殖抑制测定采用SRB方法，该方法检测本发明化合物对细胞增殖的抑制作用。
[0189] NCI-H1975在含10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的RPMI1640培养基 中，在37°C、5% CO2细胞培养箱中培养细胞，应用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸（EDTA)从细胞 培养瓶中收获细胞。细胞以7000 /孔（100 μ