解、在本发明范围内中、本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合、从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅、在 此不再一一累述。
[0039] 下面结合具体实施例、进一步阐述本发明。应理解、这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法、通常按照常规条 件、或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明、否则百分比和份数是重量百分比和重量 份数。
[0040] 本发明的反应原理：
[0041]
[0044]将丙烯酸甲酯（lmmol)溶解在二氯甲烷中（2mL)，冰峪冷却下向上述反应液中缓 慢滴加溴素（1_〇1)的二氯甲烷溶液（lmL)，滴加完毕，继续在0°C搅拌1小时，然后室温搅 拌过夜。反应结束，饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，过滤，分出有机相，水洗，浓缩。上述 浓缩液（lmmol)溶解在DMF中，小心加入叠氮化钠（1. 5mmol)，60°C搅拌30分钟后，继续补 加叠氮化钠（lmmol)，搅拌30分钟。反应液冷却至室温，用冰冷的正己烧萃取，水洗，干燥浓 缩得烯基叠氮化合物，直接用于下一步反应。
[0045] 将上述烯基叠氮化合物（1.OOmmol)和酮酯（L50mmol)溶解在甲醇中（10mL)，搅 拌下加入冰醋酸（2.OOmmol)和醋酸锰水合物（0.lOmmol)，加完，反应混合物在40°C继续搅 拌2h。反应完毕，用pH9的铵盐缓冲溶液淬灭反应，乙酸乙酯萃取两次。合并有机相，无水 硫酸镁干燥，过滤减压浓缩，柱层析分离纯化得到2, 3, 5-三取代吡咯衍生物。
[0046] 采用上述通用方法依次制备得到以下中间体：
[0047]
[0048] 通用方法二：2, 5,6-三取代吡咯[2, 1-f] [1，2, 4]三嗪的合成
[0049]
[0050] 将2,3,5_三取代吡咯衍生物（lmmol)溶于四氢呋喃（lOmL)中，氮气保护下缓慢 加入叔丁醇钾的四氢呋喃溶液（2. 5_〇1)，滴加完毕，室温搅拌半小时。反应液在冰水浴冷 却下，缓慢滴加氯胺的乙醚溶液（1. 5mmol)，滴加完毕继续室温反应2小时。反应完毕，缓慢 滴加饱和硫代硫酸钠溶液淬灭反应，分出有机相，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得 到粗品，直接用于下步反应。将上述粗品溶于四氢呋喃（25mL)，缓慢滴加苯甲酰异硫氰酸 酯（0. 7mmol)的四氢呋喃溶液（20mL)，反应液搅拌过夜。减压除去溶剂，粗品用无水乙醚 沉淀，过滤得到黄色固体：1-(3_苯甲酰基硫脲）-lH-吡咯-2, 5-二甲酸甲酯，直接用于下 步反应。
[0051] 将上述黄色固体置于100mL反应瓶中，加入2M的氢氧化钠水溶液（12. 5mL)，加热 至85°C。反应2小时后，反应液冷却至室温，加入乙醇继续搅拌。向上述反应液滴加冰醋酸 (25mmol)，冰浴冷却下继续搅拌，析出固体，过滤收集固体，冷的乙醇洗涤，乙醚洗涤得到白 色固体4-羟基-2-巯基吡咯[2, 1-f] [1，2, 4]三嗪-6-甲酸甲酯。
[0052] 将上述白色固体（0.5mmol)溶于四氢呋喃（25mL)，搅拌下一次性加入碘甲烷 (6. 5_〇1)，继续搅拌过夜。反应完毕，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液（20mL),继续 搅拌，析出固体，过滤收集固体，水洗，干燥，得到类白色固体4-羟基_2_(甲硫基）吡咯 [2, 1-f] [1，2, 4]三嗪-6-甲酸甲酯。
[0053] 将4-羟基_2_(甲硫基）吡咯[2, 1-f] [1，2, 4]三嗪-6-甲酸甲酯（lmmol)置于 圆底烧瓶中，加入三氯氧磷（1.2mm〇l)后加热回流4小时。反应结束后，减压除去多余的三 氯氧磷，将剩余物倒入冰水中，用氨水调节pH值至近中性，析出固体，过滤，水洗，无水乙醚 洗涤，干燥得到黄色固体4-氯_2_(甲硫基）吡咯[2, 1-f] [1，2, 4]三嗪-6-甲酸甲酯。
[0054] 将上述黄色固体（lg)悬浮于异丙醇（20mL)中，冰浴冷却下缓慢加入硼氢化钠粉 末（3mmol)，加完继续反应3小时。过滤除去反应液中的固体，二氯甲烷洗涤，滤液浓缩得油 状物。上述油状物悬浮于二氯甲烷（30mL)中，然后向其中缓慢加入DDQ(3. 3mmol)，继续反 应半小时。过滤除去反应液中析出的固体，二氯甲烷洗涤，滤液减压浓缩，浓缩液用硅胶逐 层新分离纯化得到黄色固体2-(甲硫基）吡咯[2, 1-f] [1，2, 4]三嗪-6-甲酸甲酯。
[0055] 将上述2_(甲硫基）吡略[2, 1-f] [1，2, 4]三嗪-6-甲酸甲酯（0? 5mmol)溶于甲 醇（10mL)中，加入氢氧化锂水溶液（lmmol)，加热至50°C反应2小时。反应完毕冷却至室 温，加入2N稀盐酸中和，析出固体，过滤，干燥得到2-(甲硫基）吡咯[2, 1-f] [1，2, 4]三 嗪-6-甲酸。将上述2-(甲硫基）吡咯[2，l-f][l，2,4]三嗪-6-甲酸（0.5mmol)溶于 DMF(lOmL)中，依次加入HATU(0. 6mmol)和NHR1R2 (0. 5mmol)，室温搅拌3小时。反应完毕， 加入二氯甲烷萃取，依次用水，饱和碳酸氢钠，饱和氯化铵洗涤，干燥，浓缩，柱层析分离纯 化得到2-(甲硫基）吡咯[2, 1-f] [1，2, 4]三嗪-6-甲酰胺衍生物。
[0056] 将2-(甲硫基）吡咯[2, 1-f] [1，2, 4]三嗪-6-甲酰胺衍生物（0. 4mmol)溶于氯 仿（lOmL)中，冰浴冷却下，分批加入MCPBA(1.2mmol)，室温搅拌2小时。加入饱和硫代硫 酸钠淬灭反应，分出有机相，用饱和碳酸氢钠，水洗涤，干燥浓缩得黄色固体，直接用于下步 反应。
[0057] 采用上述通用方法依次制备得到以下中间体：
[0058]
[0059]
[0060]
[0061] 通用方法三：2_氨基-5,6-取代吡咯[2, 1-f] [1，2, 4]三嗪的合成
[0062]
[0063] 将2-甲砜基-吡咯[2, 1-f] [1，2, 4]三嗪衍生物（0.lmmol)，芳香胺（0. 2mmol) 和N-甲基吡咯烷酮（lmL)置于微波管中，密封加热到120°C-140°C，反应4小时。反应完 毕，混合物用二氯甲烷稀释，水洗，干燥，过滤浓缩，粗品用制备HPLC或者制备-TLC分离纯 化，得到黄色目标产物吡咯[2, 1-f] [1，2, 4]三嗪-2-基）-芳胺衍生物。
[0064] 采用以上方法，依次制备得到如下目标化合物实施例1至实施例25 :
[0065]
[0066]
[0067]
[0068]
[0069]
[0070]测试例1本发明化合物对不同CDK激酶活性的测定
[0071] ⑶K激酶抑制活性实验采用LANCE? Ultra技术，在ATP浓度为Km情况下，分别 在CDK4/CycD3,CDK6/CycD3激酶上对受试化合物进行筛选。测试过程中，受试化合物初始 浓度均选择为3333nM，各受试化合物均选择10个梯度稀释浓度，梯度稀释倍数为3倍，每浓 度1个复孔进行检测。
[0072] 测试步骤：1、采用IX反应缓冲液将激酶、底物、ATP分别配制成2. 5X的酶/底物 混合液和2. 5X的ATP溶液。实验中，CDK4/CycD3激酶的终浓度为：0. 76ng/ul，ATP终浓度 为：80uM ;CDK6/CycD3激酶的终浓度为：0. 5ng/ul，ATP终浓度为：50uM ;向384孔板中加入 2. 5X的酶/底物混合液，室温孵育5分钟；再加入2. 5XATP溶液，室温反应30分钟。2、用 LANCE?Detection Buffer, IX配制2 X的LANCE?Ultra Europium-anti-phosph 〇-eIF4E_binding protein l(Thr37/46)备用。酶反应进行30分钟后，向384孔板中加入 10mM的EDTA，室温反应5分钟。再加入LANCE?UltraEuropium-anti-phosph〇-eIF4E-binding protein l(Thr37/46)，室温反应1小时。3、将384孔板放于HERAEUS Multifuge X1R离心机中2000rpm离心2分钟；于EnVisionTM上进行数据测定，选用337nM波长的激光 作为激发光，测定RFU665nM以及RFU615nM，并以RFU665nM/RFU615nMX 10000作为最终数据 进行分析。4、米用Graphpad Prism 5. 0对数据进行Log (inhibitor) vs. response-Variable