专利名称：OsMADS57蛋白或其编码基因在促进水稻分蘖中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及ー种0sMADS57蛋白或其编码基因在促进水稻分蘖中的应用。
背景技术：
植物株型是影响作物产量的重要因素之一，特别对水稻作物而言。目前知道水稻的分蘖数目、分蘖角度、植株高度、叶夹角、水稻穗子的大小和水稻小穗分支多少共同决定了水稻株型，而水稻的分蘖数和穗子的形状又是决定水稻产量的最重要因素。对于水稻分蘖发育而言，分蘖期是水稻营养生长的最主要时期，包括从分蘖芽的分化到幼穗的形成。一般水稻品种，生长环境条件(温度、水分、营养状況)及其种植密度也会影响分蘖的发育。生长周期长的水稻品种一般比生长周期短的水稻分蘖要少ー些。水稻分蘖包括ー级分蘖和ニ级分蘖。根据分蘖结实的情况，分蘖又分为有效分蘖和无效分蘖两种。有效分蘖的多少是决定水稻产量重要因素之一，所以我们通过各种手段尽可能的増加可育分蘖数量。随着科学研究的进展，特别是水稻的基因组学和生物信息学的迅速发展。目前，水稻中与分蘖发育相关的ー些基因陆续被克隆出来。如我国学者李家洋实验室克隆的MOCl基因直接影响水稻的分蘖数目，当该基因突变后表现出分蘖減少的表型，该基因的超表达转基因植株表现出分蘖增多的表型。该实验室最新研究发现MOCl相互作用的蛋白TAD1，编码这个蛋白的基因突变后表现出分蘖增多的表型。研究表明水稻中D17/HTD1及拟南芥同源基因MAX3和DlO及拟南芥同源基因MAX4均编码类胡萝卜素切割双氧酶蛋白，它们分别简称 carotenoid cleavage deoxygenate protein 7 (CCD7)和 carotenoid cleavagedeoxygenate protein 8 ((XD8)。MAX3和MAX4这两个基因參与了植物分支激素(独脚金内酷)的生物合成，这个激素合成的途径中发现位于(XD7和(XD8的下游存在另外ー些关键基因，例如拟南芥中编码ー种细胞色素P450酶MAX1，水稻还没有相关同源基因的报道。2009年李家洋课题组报道了ー个和dlO经典分蘖突变体表型类似的突变体d27，D27编码ー个铁离子包含蛋白，亚细胞定位显示该基因和叶绿体共定位，主要在茎和根的微管细胞中表达。最终实验证据表明D27可能是独脚金内酯生物合成途径的ー个新成员。另ー个影响水稻分蘖发育的基因D3则编码ー个含F-box的LRR蛋白，这个基因突变后也表现出分蘖增多的表型。2009年几个课题组相继报道了另ー个和分蘖相关的突变体dl4/htd2/d88，同样具有独脚金内酯途径中经典突变体的表型，即分蘖数增多和植株矮化，还表现出穂子变短和种子变小的表型。2003年日本一个课题组根据同源性分析发现玉米的TE0SINTEBRANCHED I (TBl)高度同源性基因OsTBl/FCl，该基因编码TCP转录因子家族的蛋白，是分蘖发育的负调控因子。这个基因的突变体表现出分蘖数增多和半矮化的表型，该基因超表达转基因植株表现出分蘖減少的表型。2009年日本另外ー个课题组发现了这个基因的另ー个突变体fcl，独脚金内酯处理该突变体的生理实验证明fcl表现出对这个激素不敏感的表型，作者推測OsTBl/FCl也可能位于MAX/RMS/D遗传途径的下游，部分參与了独脚金内酯的信号传导。2009 年 a rice dwarf and low_tillering(dlt)mutant 被发现和研究,这个突变体表现出矮化和分蘖减少的表型，相应的DLT转基因证实了该突变体的表型，结果表明dlt突变体表现出类似于水稻中油菜素内酯缺陷和信号突变体的表型。组成型超表达技术和反义转基因是ー个已经发展比较成熟的研究基因功能的技木。它是将基因以正向和反向的方式插入到强启动子的下游，可以使表达的基因转录本在体内得到强的表达和表达量降低，从而使目的蛋白表达量增加和表达量減少。当对某ー个感兴趣的基因进行功能鉴定时，采用组成型超表达和反义转基因技术可以使我们了解在该基因的表达很大程度的增强和内源基因的表达量減少，研究目的基因表达增强和表达减少的情况下，植物的生长发育等过程是否会受到影响，从未可以推断该基因的可能的生物学功能。
发明内容
本发明的ー个目的是提供0sMADS57蛋白或其编码基因或表达0sMADS57的重组载体的新用途。
本发明提供了 0sMADS57蛋白或其编码基因或表达0sMADS57的重组载体在促进植物分蘖中的应用；所述0sMADS57蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2。上述应用中，所述0sMADS57蛋白的编码基因的核昔酸序列为序列表中的序列I或序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸；所述表达0sMADS57的重组载体为将所述0sMADS57的编码基因插入表达载体中，得到表达0sMADS57的载体；所述表达0sMADS57的重组载体具体为将所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸插入表达载体pUN1301的BamHI和KpnI酶切位点间得到的载体，且所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的5’端通过所述pUN1301的BamHI酶切位点与其连接，所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的3’端通过所述PUN1301的KpnI酶切位点与其连接。上述应用为将所述0sMADS57蛋白的编码基因导入目的植物中，得到分蘖数大于所述目的植物的转基因植物。上述应用中，所述0sMADS57蛋白的编码基因通过所述表达0sMADS57的重组载体导入目的植物中。上述应用中，所述目的植物为单子叶植物或双子叶植物，所述单子叶植物具体为水稻。本发明的另ー个目的是提供ー种培育转基因植物的方法。本发明提供的方法，为将上述的应用中的所述0sMADS57蛋白的编码基因导入目的植物中，得到分蘖数大于所述目的植物的转基因植物。上述方法中，所述0sMADS57蛋白的编码基因通过重组载体导入目的植物中。上述方法中，所述重组载体具体为将所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸插入表达载体PUN1301的BamHI和KpnI酶切位点间得到的载体，且所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的5’端通过所述pUN1301的BamHI酶切位点与其连接，所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的3’端通过所述pUN1301的KpnI酶切位点与其连接。本发明的第三个目的是提供ー种重组载体。本发明提供的重组载体，为将上述的应用中的所述0sMADS57的编码基因插入表达载体中，得到表达0sMADS57的载体。
所述重组载体为将所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸插入表达载体pUN1301的BamHI和KpnI酶切位点间得到的载体，且所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的5’端通过所述pUN1301的BamHI酶切位点与其连接，所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的3’端通过所述pUN1301的KpnI酶切位点与其连接。本发明的实验证明，在粳稻中花十号中克隆到ー个0sMADS57基因，将其正向插入表达载体，得到正义表达载体；利用正义表达载体导入水稻中花十号，得到正义转基因水稻株系，与野生型水稻相比，正义转基因水稻株系的分蘖增多。
图I为RT-PCR方法扩增到0sMADS57的全长图2为超表达载体pUN_0sMADS57 (正义)的物理图谱图3为超表达转基因水稻(正义)的定量PCR鉴定图4为0sMADS57超表达转基因水稻(正义)分蘖的表型
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例I、0sMADS57蛋白及其编码基因的获得根据数据库分析的结果设计引物超表达载体构建使用引物5^端引物5’ -CGGGATCCATGGGGAGGGGGAAGATAGT-3’ (下划线序列为 BamHI 位点，序列 3)，3'端引物5 ’ -GGGGTACCTTAAGGCAGATGAAGTCCCAGT-3，(下划线序列为KpnI位点，序列4)。提取粳稻中花十号三叶期幼苗总RNA，采用RT-PCR方法扩增到0sMADS57的726bp全长cDNA。具体操作过程如下I)植物总RNA的提取选取IOOmg三叶期水稻中花十号(Oryza sativa L. cvZhonghua 10)的幼苗(李梅芳，水稻花培品种一中花10号，农业科技通讯，1998年第I期第26页。公众可从中国科学院植物研究所获得。)为材料，在液氮中研磨，将液氮中研碎的冻干粉转入到含lml Trizol试剂(Invitrogen)的I. 5ml离心管中，充分混勻；25°C放置5分钟；每管中加入O. 2ml新鲜氯仿，剧烈振摇15秒，25°C温育2_3分钟；12，OOOrpm，4°C，离心15分钟；把上清的水相O. 5ml转移到一个新的I. 5ml离心管中，加O. 5ml异丙醇，25°C放置10分钟使RNA沉淀；12，OOOrpm, 4°C，离心10分钟；去上清，将RNA沉淀用Iml 75%こ醇清洗2次，超净台吹至半干；用50 μ I DEPC-ddH20重悬沉淀，60°C水浴10分钟，以溶解RNA沉淀获得RNA溶液。将此RNA溶液分装后-70°C保存，备做反转录的模板。2) RT-PCR :取I μ I上述RNA溶液，用DEPC_ddH20稀释100倍，用分光光度计测定RNA浓度。參照RT-PCR试剂盒(Promega)说明书，根据RNA的定量結果，取含有2 μ gRNA的上述RNA溶液，加l.Oyg Oligo dT引物，用DEPC_ddH20补充至15 μ 1，混匀后70°C变性5分钟，冰浴5分钟。短暂离心后，加入25 μ I反转录混合物(5 μ IM-MLV 5XReactionBuffer,6 μ I dNTP Mixture (2. 5mM), I μ I M-MLV Reverse Transcriptase,0. 5 μ I RNaseInhibitor, 12. 5μ I DEPC_ddH20)。混匀后，42°C水浴I小时完成反转录过程；75°C水浴10分钟使反转录酶失活，得到含有第一链cDNA的混合物。取I μ I上述第一链cDNA作为PCR的模板，按以下体系进行PCR反应0. 2 μ ILATaq (5υ/μ1)、10μ1 2XGC buffer, I. 8μ I dNTPs, O. 5 μ I 5 '端弓I 物(ΙΟμΜ)，O. 5 μ 13'端引物(10 μ Μ)，加 ddH20 终体积 20 μ I。5'端引物和3'端引物分别如下以超表达构建引物序列5'端引物5’ -CGGGATCCATGGGGAGGGGGAAGATAGT-3’ (下划线序列为 BamHI 位点，序列 3)，3'端引物5 ’ -GGGGTACCTTAAGGCAGATGAAGTCCCAGT-3，(下 划线序列为KpnI位点，序列4)为引物，进行PCR扩增，得到PCR产物(正义)。上述PCR程序为94° C预变性30s后进入PCR循环，循环參数为98° C 10秒变性一55° C 15秒复性一72° C 40秒延伸，35个循环后在72° C继续合成10分钟。将上述PCR产物(正义)经过O. 8%的琼脂糖凝胶电泳分离，结果如图I所示，PCR产物(正义)的条带大小为726bp。回收PCR产物(正义)进行测序，结果为PCR产物(正义)的核苷酸序列具有序列表中序列I自5’末端第1-726位核苷酸，序列I的OFR为序列表中序列I自5’末端第1-726位核苷酸。该PCR产物的基因命名0sMADS57，0sMADS57编码的蛋白为0sMADS57，该蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2。实施例2、0sMADS57蛋白及其编码基因的应用一、过表达载体pUN-MADS57 (正义)l、pUN1301质粒的获得第一歩剪取约O. 2g玉米幼苗，置于液氮中研磨；然后加入800 μ L新配制的提取缓冲液(含 O. IM Tris-HCl ρΗ8· O, 50mM EDTA，O. 5M NaCl，1%SDS 和 I % β -巯基こ醇)，剧烈振荡使其全部悬浮；65°C水浴30分钟，每5分钟颠倒混匀一次；然后加入250 μ L预冷的5Μこ酸钾水溶液，立即颠倒混匀，冰浴5分钟；加入等量酚/氯仿，抽提一次，12000rpm离心5分钟；收集上清液，加入O. 6倍体积的异丙醇沉淀DNA，室温放置40分钟；4°C 12000rpm离心15分钟，弃上清；沉淀用70%、100%こ醇各洗一次；干燥后，溶于20 μ L含100 μ g/mLRNaseA的ddH20中，得到玉米基因组DNA。第二步取上述玉米基因组DNA溶液2μ L作为模板，以带有Hind III识别位点的5 '引物(GGAAGCTTCTGCAGTGCAGCGTGACCCGG)和带有BamHI识别位点的3 '引物(CGGGATCCAAGTAACACCAAACAACAGGG)为引物，进行 PCR 扩增，PCR 反应条件为先 94°C 3 分钟；再94°C 45秒，62°C 45秒，72°C 2分钟，共35个循环，最后72°C 10分钟。反应结束后，对PCR产物进行O. 8%琼脂糖凝胶电泳检测，表明得到长度约为2kb的扩增片段，与预期结果相符，回收该目的片段，用限制性内切酶Hind III和BamHI双酶切后回收，得到片段经测序，该片段为序列表中的序列5自5’末端的第1-1986位核苷酸，为带有粘性末端的玉米泛素启动子(UbiPix))。(玉米泛素启动子(UbiPro)也可以人工合成获得。)
第三步用限制性内切酶Sac I和EcoR I将Noster poly A终止序列从质粒载体PBI 121 (北京拜尔迪生物技术有限公司目录号MP-091)上切下，连接到载体pUC19 (北京百泰克生物技术有限公司目录号DP7801 M^Sac I和EcoR I位点间，得到重组载体，命名为pUC19_Noster。再用限制性内切酶Hind III和BamHI双酶切pUC19_Noster,琼脂糖凝胶电泳检测后，回收线性化的载体大片段，并将该回收片段与第二步中经酶切获得的带有粘性末端的玉米泛素启动子(UbiPro)相连,得到重组载体,命名为pUN19。
第四步用限制性内切酶EcoR I 部分酶切和Hind III完全酶切从第三步购建的重组载体PUN19切下包含UbiPro和Noster的长度约为2. 3kb的片段，将该片段克隆入质粒载体 PCAMBIA1301 (Biovector Co.，LTD 公司目录号 Biovec-II)的 EcoR I 和 Hind III位点处，得到重组载体，命名为pUN1301。2、过表达载体pUN-MADS57 (正义)的获得用限制性内切酶KpnI和BamHI对I步骤获得的质粒pUN1301进行双酶切，酶切体系为质粒 10μ l、10x 酶切缓冲液 5μ l、BglIIly I (IOU/μ I)、SacI O. 8 μ I (lOU/μ I),加ddH20补充反应体系至50 μ 1，37°C酶切4小吋。用琼脂糖凝胶电泳对酶切产物进行分离，回收线性化的PUN1301大片段，溶于20 μ I ddH20中。用限制性内切酶KpnI和BamHI对由实施例I得到的726bp PCR产物(正义)进行双酶切，酶切体系为质粒1(^1，酶切缓冲液5“1、8&111!1114 1 (IOU/μ I)、加ddH20补充反应体系至50μ 1，37°C酶切4个小时。再加入KpnI O. 2 μ I (IOU/μ 1)，37°C酶切20分钟。用O. 8%琼脂糖凝胶电泳对酶切产物进行分离，用AxyPrep公司的DNA凝胶回收试剂盒回收该片断，回收726bp的0sMADS57片段(正义)。将10 μ I回收的726bp的0sMADS57 (正义)、6μ I回收的载体pUN1301大片段溶液、2 μ I (3U/ μ I)Τ4 DNA连接酶和2 μ I IOx连接酶缓冲液混和，16°C连接16小时，得到的连接产物转化大肠杆菌DH5 α感受态细胞，经含卡那霉素的抗性平板筛选得到阳性克隆。提取阳性克隆中的重组质粒，进行测序验证，该质粒为将序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸插入pUN1301的BamHI和KpnI酶切位点间得到的载体，将该质粒命名为pUN-0sMADS57 (正义)，且序列表中的序列I自5’末端第1_726位核苷酸的5’端通过所述PUN1301的BamHI酶切位点与其连接，序列表中的序列I自5’末端第1_726位核苷酸的3’端通过所述pUN1301的KpnI酶切位点与其连接。pUN_0sMADS57中启动子、基因和终止子的结构正确。在该表达载体中采用玉米泛素启动子(UbiPro)启动目的片段0sMADS57在植物中超表达，其物理图谱示意图如图2所示。ニ、转0sMADS57水稻(正义)的获得及鉴定I、转0sMADS57水稻(正义)的获得参照电激仪(Easy JecT Plus电激仪，英国EquiBio公司)操作指南，将PUN-MADS57 (正义)用电击法转化农杆菌EHA105 (Biovector Co.，LTD公司目录号Biovec-ΙΙ)，经含卡那霉素的抗性平板筛选得到阳性克隆的超表达工程菌，命名为EHA105/pUN-0sMADS57 (正义)。将EHA105/pUN_0sMADS57 (正义)导入中花十号水稻(Oryza sativaL. cvZhonghualO,以下简称野生型水稻)的愈伤组织中，再用含300mg/L头孢霉素的无菌水洗漆
4-5遍，无菌滤纸吸干后转至N6D2S1培养基上，筛选一代；两周后，转移至N6D2S2培养基上筛选ニ代(2周/代);取出经过3代筛选生长旺盛的抗性愈伤组织，转移至分化培养基(1)，上，在分化培养箱(12小时光周期，白天28°C，夜晚25°C)中培养7天；然后转移至分化培养基
(2)，上，在分化培养箱中培养至产生再生苗。再生的植株在生根壮苗培养基上生根壮苗；待小苗长至10厘米左右时，打开容器封ロ膜，炼苗2-3天，然后将小苗移入人工气候室栽培，获得10个株系共60棵TO代转OsMADS57水稻(正义)。所用培养基如下
NA培养基N6大量元素，B5微量元素，Bjf生素，300 mg/L水解
酪蛋白，500 mg/L脯氨酸，500 mg/L谷氨酰胺，30 g/L蔗糖，2 mg/L 2, 4-D, 7 g/L agar, pH 5. 8N6D2S1 培养基NA, 25 mg/L 潮霉素(Hygromycine)，600 mg/L 头抱霉素(Cefotaxime), pH 5.8 N6D2S2培养基NA, 50 mg/L潮霉素，300 mg/L头孢霉素，pH5. 8AAM-AS培养基AAM盐分和氨基酸，MS维生素，100 μπιοΙ/L乙酰丁香酮(Acetosyringone, AS), pH 5.2N6D2C 培养基NA, IOg/!/葡萄糖，ΙΟΟμοιοΙ/L 乙酰丁香酮，pH 5. 2
分化培养基(1): MS盐分和维生素，300 mg/L水解酪蛋白，50 rag/L潮霉素，I mg/L 6-BA (6-苄氨基嘌呤，已核实)，O. 5 mg/L
KT (氯吡苯服，已核实)，0.2 mg/L ZT (玉米素)，
O. 25 mg/L NAA (萘乙酸，已核实)，30 g/L蔗糖，30 g/L 山梨醇，7 g/L agar, pH 5. 8
分化培养基(2): MS盐分和维生素，300 mg/L水解酪蛋白，50 mg/L潮
霉素，I mg/L 6-BA, O. 5 mg/L KT, 0.2 mg/L ZT，
O. 5 mg/L NAA, 30 g/L 蔗糖，20 g/L 山梨醇，7 g/L agar， pH 5.8
生根壮苗培养基1/2 MS盐分，MS锥生素，I mg/L多效唑，O. 5 mg/L NAA,
8 g/L agar, pH . 82、转0sMADS57水稻(正义)的鉴定I )、⑶S组织化学染色将由实施例I获得的70棵TO代转0sMADS57水稻(正义)的2_3mm长的根段分别放到⑶S染色液中，抽气几分钟，然后置于37°C温育过夜，染色后的组织用70%こ醇脱色。根呈蓝色的植株即为阳性转基因材料。⑶S染色液(pH 7. O)组分为100mM Na3PO4 (pH 7.0)，O. l%Triton X-100, IOmM EDTA，0. 5mM 亚铁氰化钾，0. 5mM 铁氰化钾，lmg/ml X-Gluc0 结果共鉴定出6个株系合计50棵阳性TO代转0sMADS57水稻(正义)，将此幼苗移至温室栽培，按照不同株系收种，得到Tl代转基因种子，在此基础上经过繁种得到纯合T2代种子。在以后的实验中选取转OsMADS57水稻(正义)株系I (OEl)和2 (0E2)的纯合种子T2为材料。2)、定量 PCR 鉴定从OEl和0E2的T2转0sMADS57水稻(正义)幼苗中提取mRNA，并分别转录获得cDNA，以野生型水稻(水稻中花十号)为对照。利用荧光实时定量PCR法，以cDNA为模板，以I μ I 5'端引物 I (10 μ Μ) (5' -GCACCAACATGAAAACTGTGA-3' )，I μ I 3'端引物 I (10 μ Μ)(5 ' -CTCCCTCTGCCAAATCTTAATT-3 ')为引物，对阳性 T2 转 0sMADS57 水稻(正义)的表达丰度进行检测。用于定量分析的试剂为SYBR Green Realtime PCR Master Mix(TOYOBO)。所用仪器为美国Stratagene公司实时荧光定量PCR仪Mx3000P。吸取I μ I第一链cDNA溶液，稀释50倍作为模板，按以下体系进行PCR反应10 μ I SYBR Green Realtime PCRMaster Mix, 4 μ I 模板，I μ I 5'端引物 I (10 μ Μ)，I μ I 3'端引物 I (10 μ Μ)，加 ddH20 终体积20 μ I0结果如图3所示，在Actin基因作为内參的情况下，与野生型水稻相比，OEl和0Ε2 的Τ2幼苗中0sMADS57的表达丰度有了不同程度的上调，说明目的基因(0sMADS57)再转录水平已经成功表达。采用同样的方法将空载体PUN1301导入野生型水稻中得到TO代转空载体水稻，从TO代转pUN1301水稻上收获Tl代转pUN1301水稻种子，播种，从Tl代转pUN1301水稻上收获T2代转pUN1301水稻种子。三、转0sMADS57水稻(正义)的表型观察将T2代转0sMADS57水稻(正义)的OEl和0E2种子、中花十号野生型水稻种子(ZHlO)和T2代转pUN1301水稻种子，均播种在花卉营养土和蛭石的混合物里(两者的混合比例为4:1)，30で萌发后放在温室里(32で)培养至3叶期，接着把生长的幼苗种植于水稻田中。每个株系30个，实验重复三次，结果取平均值。对植株分蘖数进行观察，结果如下拍照如图4A所示，可以看出，与野生型水稻相比，T2代转0sMADS57水稻(正义)0E1的分蘖数增多。在播种后约第70天统计T2代转0sMADS57水稻(正义)的OEl和0E2种子、中花十号野生型水稻种子(ZHlO)和T2代转pUN1301水稻分蘖数，结果如图4B所示，T2代转0sMADS57水稻(正义)OEU T2代转0sMADS57水稻(正义)0E2、中花十号野生型水稻(ZHlO)的分蘖数分别为14个、17个和26个。T2代转pUN1301水稻和野生型水稻结果无显著差异。
权利要求
1.OsMADS57蛋白或其编码基因或表达OsMADS57的重组载体在促进植物分蘖中的应用； 所述OsMADS57蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于所述OsMADS57蛋白的编码基因的核苷酸序列为序列表中的序列I或序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸； 所述表达OsMADS57的重组载体为将所述OsMADS57的编码基因插入表达载体中，得到表达OsMADS57的载体； 所述表达OsMADS57的重组载体具体为将所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸插入表达载体PUN1301的BamHI和KpnI酶切位点间得到的载体，且所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的5’端通过所述pUN1301的BamHI酶切位点与其连接，所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的3’端通过所述pUN1301的KpnI酶切位点与其连接。
3.根据权利要求I或2所述的应用，其特征在于所述应用为将所述OsMADS57蛋白的编码基因导入目的植物中，得到分蘖数大于所述目的植物的转基因植物。
4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于所述OsMADS57蛋白的编码基因通过所述表达OsMADS57的重组载体导入目的植物中。
5.根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于 所述目的植物为单子叶植物或双子叶植物，所述单子叶植物具体为水稻。
6.ー种培育转基因植物的方法，为将权利要求1-5中任一所述的应用中的所述OsMADS57蛋白的编码基因导入目的植物中，得到分蘖数大于所述目的植物的转基因植物。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述OsMADS57蛋白的编码基因通过重组载体导入目的植物中。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于所述重组载体为将所述OsMADS57的编码基因插入表达载体中，得到表达OsMADS57的载体； 所述重组载体具体为将所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸插入表达载体pUN1301的BamHI和KpnI酶切位点间得到的载体，且所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的5’端通过所述pUN1301的BamHI酶切位点与其连接，所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的3’端通过所述pUN1301的KpnI酶切位点与其连接。
9.ー种重组载体，为将权利要求1-5中任一所述的应用中的所述OsMADS57的编码基因插入表达载体中，得到表达OsMADS57的载体。
10.根据权利要求9所述的重组载体，其特征在于所述重组载体为将所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸插入表达载体PUN1301的BamHI和KpnI酶切位点间得到的载体，且所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的5’端通过所述pUN1301的BamHI酶切位点与其连接，所述序列表中的序列I自5’末端第1-726位核苷酸的3’端通过所述PUN1301的KpnI酶切位点与其连接。
全文摘要
本发明公开了一种OsMADS57蛋白或其编码基因在促进水稻分蘖中的应用。本发明提供了OsMADS57蛋白或其编码基因或表达OsMADS57的重组载体在促进植物分蘖中的应用。本发明的实验证明，在粳稻中花十号中克隆到一个OsMADS57基因，将其正向插入表达载体，得到正义表达载体；利用正义表达载体导入水稻中花十号，得到正义转基因水稻株系，与野生型水稻相比，正义转基因水稻株系的分蘖增多。
文档编号C12N15/82GK102690838SQ201210182988
公开日2012年9月26日 申请日期2012年6月5日 优先权日2012年6月5日
发明者徐云远, 种康, 郭思义 申请人:中国科学院植物研究所