一种兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂及其制备方法，该制剂是将枯草芽孢杆菌活化，然后发酵培养，在发酵液中加入羧甲基纤维素，溶解制得混合液，再将混合液加入硫酸铝溶液中，形成凝聚囊，过滤得到凝聚囊，水洗，干燥得到兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂。本发明的枯草芽孢杆菌制剂为微囊制剂，它是将菌体包裹后低温干燥制成，具有耐强酸、耐受抗生素等优点，能够有效保护枯草芽孢杆菌穿过胃酸，进入肠道起到其作为益生菌的作用。同时，本发明的枯草芽孢杆菌制剂对抗生素耐受性强，可与抗生素同时使用，以达到更好的抗病增产效果。
【专利说明】一种兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂，同时还涉及该制剂的制备方法，属 于微生物制剂领域。
【背景技术】
[0002] 随着集约化养殖业的发展，兽类的各种疾病不断发生，而且日益严重。目前防治兽 类疾病的主要手段是使用抗生素，但抗生素的使用容易导致细菌耐药的产生及兽类产品中 药物的残留。因此，预防兽类的疾病发生，解决其副产品中药物的残留是亟待解决的问题。
[0003] 枯草芽孢杆菌是一种常见的益生菌，菌体在生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌 素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作 用；枯草芽孢杆菌能够迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并 产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑制其他致病菌生长；枯草芽孢杆菌能够刺激 动物免疫器官的生长发育，激活T、B淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫 和体液免疫功能，提高群体免疫力；枯草芽孢杆菌菌体自身合成a-淀粉酶、蛋白酶、脂肪 酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用；能合成维生素 B1、 B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动物体内干扰素和巨噬细胞的活性。因此枯草芽孢杆 菌可以对动物疾病的预防起到很好的效果，但是目前枯草芽孢杆菌制剂大多为菌粉，主要 是通过添加载体或不加载体的情况下直接加热或喷雾干燥制备而成，存在不耐强酸和对抗 生素敏感的缺陷，限制了其应用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂。
[0005] 本发明的目的还在于提供一种兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方法。
[0006] 为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是提供一种兽用枯草芽孢杆菌微囊 制剂，将枯草芽孢杆菌活化，然后发酵培养，在发酵液中加入羧甲基纤维素，溶解制得混合 液，再将混合液加入硫酸铝溶液中，形成凝聚囊，过滤得到凝聚囊，水洗，干燥得到兽用枯草 牙抱杆囷微囊制剂。
[0007] 所述兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂中枯草芽孢杆菌活菌数不低于l〇9CFU/g。
[0008] 本发明所采用的技术方案还在于提供一种兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方 法，包括以下步骤：
[0009] (1)将枯草芽孢杆菌接种到营养肉汤培养基中，在37°C、200r/min条件下培养 12-14h ；
[0010] (2)将步骤（1)活化的枯草芽孢杆菌接种于发酵培养基中，在37°C、200r/min条件 下发酵24-72h ;
[0011] (3)在发酵液中加入发酵液质量0. 1-1%的羧甲基纤维素，溶解制得混合液，再将 混合液加入混合液体积1-2倍的质量分数3-5%的硫酸铝溶液中，形成凝聚囊，过滤得到凝 聚囊，水洗，干燥得到兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂。
[0012] 所述营养肉汤培养基为：蛋白胨l〇g/L、牛肉膏3g/L、氯化钠5g/L，PH7-7. 2。
[0013] 所述步骤（2)枯草芽孢杆菌接种量为2-5%。
[0014] 所述发酵培养基为：葡萄糖3g/L、淀粉lg/L、豆饼粉30g/L、磷酸氢二钾5g/L、磷酸 二氢钠 3g/L、酵母粉 0? 2g/L、硫酸锰 0? lg/L，pH7-7. 2。
[0015] 所述步骤（2)中枯草芽孢杆菌发酵时间为48h。
[0016] 所述羧甲基纤维素的用量为发酵液质量0. 5%。
[0017] 所述干燥温度为60_80°C。
[0018] 本发明活化、发酵生产枯草芽孢杆菌的方法，可以最大程度上增加枯草芽孢杆菌 活菌数和微生物代谢产物，从而提高枯草芽孢杆菌的生物利用价值。本发明的枯草芽孢杆 菌制剂为微囊制剂，它是将菌体包裹后低温干燥制成，具有耐强酸、耐受抗生素等优点，能 够有效保护枯草芽孢杆菌穿过胃酸，进入肠道起到其作为益生菌的作用。同时，本发明的枯 草芽孢杆菌制剂对抗生素耐受性强，可与抗生素同时使用，以达到更好的抗病增产效果。
【具体实施方式】
[0019] 培养基的配制
[0020] 营养肉汤培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏3g/L、氯化钠5g/L，余量为水，pH7_7. 2。
[0021] 发酵培养基：葡萄糖3g/L、淀粉lg/L、豆饼粉30g/L、磷酸氢二钾5g/L、磷酸二氢钠 3g/L、酵母粉0. 2g/L、硫酸锰0. lg/L，余量为水，pH7-7. 2。
[0022] 上述培养基高压蒸汽灭菌30min，冷却。
[0023] 实施例1
[0024] 本实施例的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂，将枯草芽孢杆菌活化，然后发酵培养，在 发酵液中加入羧甲基纤维素，溶解制得混合液，再将混合液加入硫酸铝溶液中，形成凝聚 囊，过滤得到凝聚囊，水洗，干燥得到兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂；兽用枯草芽孢杆菌微囊 制剂中枯草芽孢杆菌活菌数不低于l〇 9CFU/g。
[0025] 本实施例的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0026] (1)将枯草芽孢杆菌接种到营养肉汤培养基中，在37°C、200r/min条件下培养 12h ；
[0027] (2)将步骤（1)活化的枯草芽孢杆菌以2%接种量接种于发酵培养基中，在37°C、 200r/min条件下发酵48h ;
[0028] (3)在发酵液中加入发酵液质量0. 5%的羧甲基纤维素，溶解制得混合液，再将混 合液加入混合液体积2倍的质量分数5%的硫酸铝溶液中，形成凝聚囊，过滤得到凝聚囊，水 洗，70°C干燥得到兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂。
[0029] 实施例2
[0030] 本实施例的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂，将枯草芽孢杆菌活化，然后发酵培养，在 发酵液中加入羧甲基纤维素，溶解制得混合液，再将混合液加入硫酸铝溶液中，形成凝聚 囊，过滤得到凝聚囊，水洗，干燥得到兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂；兽用枯草芽孢杆菌微囊 制剂中枯草芽孢杆菌活菌数不低于l〇 9CFU/g。
[0031] 本实施例的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0032] (I)将枯草芽孢杆菌接种到营养肉汤培养基中，在37 °C、200r/min条件下培养 13h ；
[0033] (2)将步骤（1)活化的枯草芽孢杆菌以5%接种量接种于发酵培养基中，在37°C、 200r/min条件下发酵24h ;
[0034] (3)在发酵液中加入发酵液质量1%的羧甲基纤维素，溶解制得混合液，再将混合 液加入混合液体积1. 5倍的质量分数4%的硫酸铝溶液中，形成凝聚囊，过滤得到凝聚囊，水 洗，60°C干燥得到兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂。
[0035] 实施例3
[0036] 本实施例的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂，将枯草芽孢杆菌活化，然后发酵培养，在 发酵液中加入羧甲基纤维素，溶解制得混合液，再将混合液加入硫酸铝溶液中，形成凝聚 囊，过滤得到凝聚囊，水洗，干燥得到兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂；兽用枯草芽孢杆菌微囊 制剂中枯草芽孢杆菌活菌数不低于l〇 9CFU/g。
[0037] 本实施例的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0038] (1)将枯草芽孢杆菌接种到营养肉汤培养基中，在37°C、200r/min条件下培养 14h ；
[0039] (2)将步骤（1)活化的枯草芽孢杆菌以3%接种量接种于发酵培养基中，在37°C、 200r/min条件下发酵72h ;
[0040] (3)在发酵液中加入发酵液质量0. 1%的羧甲基纤维素，再将混合液加入混合液体 积1倍的质量分数3%的硫酸铝溶液中，形成凝聚囊，过滤得到凝聚囊，水洗，80°C干燥得到 兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂。
[0041] 对比例
[0042] 本对比例的兽用枯草芽孢杆菌制剂(菌粉)，按实施例1的方法制备枯草芽孢杆菌 发酵液，在其中加入载体(玉米淀粉)，喷雾干燥，即得；兽用枯草芽孢杆菌制剂中枯草芽孢 杆菌活菌数不低于l〇 9CFU/g。
[0043] 实验例1
[0044] 本发明兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂耐酸分析
[0045] 实验方法：将实施例1-3和对比例的枯草芽孢杆菌制剂配制成I. OX IO9CFUAiL的 菌悬液，并与各PH值的缓冲液按体积比1:10混合，置于37°C摇床温育4h，梯度稀释，平板 涂布计数，并计算起存活率，结果见表1。
[0046] 存活率=各处理组的活菌数/I. 0 X 109CFU/mL
[0047] 表1枯草芽孢杆菌微囊制剂的耐酸研究
【权利要求】
1. 一种兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂，其特征在于，将枯草芽孢杆菌活化，然后发酵培 养，在发酵液中加入羧甲基纤维素，溶解制得混合液，再将混合液加入硫酸铝溶液中，形成 凝聚囊，过滤得到凝聚囊，水洗，干燥得到兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂。
2. 根据权利要求1所述的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂，其特征在于，所述兽用枯草芽 孢杆菌微囊制剂中枯草芽孢杆菌活菌数不低于l〇 9CFU/g。
3. -种如权利要求1所述的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方法，其特征在于，包 括以下步骤： (1) 将枯草芽孢杆菌接种到营养肉汤培养基中，在37°C、200r/min条件下培养12-14h ; (2) 将步骤（1)活化的枯草芽孢杆菌接种于发酵培养基中，在37°C、200r/min条件下发 酵 24-72h ; (3) 在发酵液中加入发酵液质量0. 1-1%的羧甲基纤维素，溶解制得混合液，再将混合 液加入混合液体积1-2倍的质量分数3-5%的硫酸铝溶液中，形成凝聚囊，过滤得到凝聚囊， 水洗，干燥得到兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂。
4. 根据权利要求3所述的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方法，其特征在于，所述 营养肉汤培养基为：蛋白胨l〇g/L、牛肉膏3g/L、氯化钠5g/L，pH7-7. 2。
5. 根据权利要求3所述的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方法，其特征在于，所述 步骤（2)枯草芽孢杆菌接种量为2-5%。
6. 根据权利要求3所述的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方法，其特征在于，所述 发酵培养基为：葡萄糖3g/L、淀粉lg/L、豆饼粉30g/L、磷酸氢二钾5g/L、磷酸二氢钠3g/L、 酵母粉 0. 2g/L、硫酸锰 0. lg/L，pH7-7. 2。
7. 根据权利要求3所述的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方法，其特征在于，所述 步骤（2)中枯草芽孢杆菌发酵时间为48h。
8. 根据权利要求3所述的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方法，其特征在于，所述 羧甲基纤维素的用量为发酵液质量〇. 5%。
9. 根据权利要求3所述的兽用枯草芽孢杆菌微囊制剂的制备方法，其特征在于，所述 干燥温度为60-80 °C。
【文档编号】C12N1/20GK104206702SQ201310405575
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2013年9月6日 优先权日:2013年9月6日
【发明者】陈建晖, 朱丽平, 李建正 申请人:郑州后羿制药有限公司