专利名称：一种硫普罗宁冻干制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种硫普罗宁冻干制剂及其制备方法。
背景技术：
硫普罗宁(tiopronin)为一种新型含游离巯基的甘氨酸衍生物，本品已在国外上市，上市的剂型有口服制剂和注射剂，注射剂中主要有水针和冻干，其中水针因配成硫普罗宁钠盐，稳定性差，存储时易发生水解反应，有效期较短，影响产品的安全和疗效。而冻干制剂可以明显提高产品的稳定性，同时更好地保证产品的安全和疗效。
冻干制剂是采用无菌操作法将滤过除菌的药物溶液分装于灭菌西林瓶中，经冷冻干燥方法使水冻结后直接升华除去，留下饼状固体，加灭菌的胶塞并轧铝盖而成。冻干制剂适用于不耐热或在水溶液中长期贮存不稳定，但在干燥状态下稳定地化学药品和生物制品。硫普罗宁符合上述要求，适合制成冻干制剂。
目前国内批准上市的硫普罗宁冻干制剂主要由河南新谊药业股份有限公司生产，中国专利CN1194678C公开了该制剂以右旋糖酐40为赋形剂。另外，中国专利CN1582911A公开了以氨基酸、磷酸盐作为药物赋形剂的硫普罗宁冻干制剂。选用右旋糖酐40为赋形剂，因其粘度较大，生产过程中灌装量不容易控制；而选择氨基酸、磷酸盐作为赋形剂，冻干成品外观不饱满。
发明内容
本发明的目的在于提供一种便于生产且生产成本低的硫普罗宁冻干制剂及其制备方法。
本发明的目的是这样实现的一种硫普罗宁冻干制剂，它含有药物活性成分硫普罗宁化合物和药物赋形剂，它们的重量比是1～10∶1，其中的药物赋形剂或是麦芽糖或/和蔗糖或/和果糖。
上述药物赋形剂优选麦芽糖，硫普罗宁化合物与麦芽糖的重量比是2∶1。
上述硫普罗宁冻干制剂的制备方法，包括以下步骤
配液将活性成分硫普罗宁化合物加入适量注射用水，搅拌溶解完全后按所述配比加入药物赋形剂混匀，再加入注射用水至规定量；
除热原在上述配液中以重量/体积百分比的方式加入0.01～0.1％注射用活性炭吸附，过滤除去活性炭，收集滤液；
灭菌、灌装将上述药液进行正压除菌过滤，然后灌装；
冻干将制品在40℃～55℃预冻，当制品温度均匀时，开始对制品抽真空，当制品温度达到低共熔点时，进行升华干燥，以除去制品中的大量水分；然后进行反复升华干燥和加温干燥，直至制品温度曲线与真空曲线重合。
上述除热原过程中，在以重量/体积百分比的方式加入0.02％注射用活性炭后，吸附15分钟，用0.45μm微孔滤膜过滤除去活性炭，收集滤液。
上述正压除菌过滤，压力在0.1Mpa以下，用0.22μm微孔滤膜过滤。
上述冻干过程中，在40℃～55℃预冻1～2小时，然后打开压缩机，开始对制品抽真空，压力在9～10Mpa，时间20分钟；当制品温度达到-15℃～17℃时，进行升华干燥，干燥时间20小时，除去制品中90％的水分；当制品温度达到-10℃～5℃时，进行反复升华干燥过程，干燥时间5小时；最后加温干燥，干燥温度10℃～15℃，直至制品温度曲线与真空曲线重合。
冻干箱内自动全加塞。
封口管制西林瓶分批从冻干箱取出，加铝塑复合盖封口。
作为冻干制剂的配方设计，必须确保干燥后的固体物所应有的特性，例如干燥后饼状物结晶均匀，色泽一致，固体支架基本上保持原来的体积，并有足够的强度，避免贮存时破碎等。单独的药物活性成分常常不能满足这一特性要求，因此往往需要加入一些辅料，使之符合冻干制剂的特性要求；并且为了使结晶均匀，色泽一致，质地良好，具有一定的物理强度和较快的溶解度，也需要加入一些赋形剂和附加剂。用作冻干制剂的赋形剂要求纯度高，无毒、无抗原性，热原易除去，引湿性小，低共熔点高，冻干后外观洁白、均匀、细腻，价廉易得等。本发明中采用麦芽糖或/和蔗糖或/和果糖作为硫普罗宁冻干制剂的赋形剂，既可适当增加冷冻物的固体量，干燥过程中，当冰从产品中升华以后，这些赋形剂能很好地起支架作用，使干燥物能基本上保持原来体积，满足冻干制剂的剂型要求，又能使硫普罗宁冻干制剂在其制备过程中灌装量容易控制，冻干后成品外观饱满，克服了现有技术的不足。而且作为赋形剂的麦芽糖、蔗糖和果糖价廉易得，降低了硫普罗宁冻干制剂的生产成本。
以下通过影响因素试验、室温留样稳定性试验和加速试验，说明本发明产品的质量稳定性。同时进行过敏性、溶血性和局部(血管、皮肤、粘膜、肌肉等)刺激性等特殊安全性试验，以说明本发明产品安全、有效。
一、本发明中硫普罗宁冻干制剂的产品化学稳定性试验
试验方法
参照硫普罗宁原料药质量标准标准号WS1-(X-295)-2003Z、注射用硫普罗宁质量标准标准号WS-360(X-284)-98以及中国药典二部2000年版附录有关注射剂的要求，对本发明中的硫普罗宁冻干制剂取样进行1、影响因素试验；2、室温留样稳定性试验；3、加速试验。
1、影响因素试验
A.光照试验
将本发明样品置培养皿中，置注射剂澄明度检测仪下，在0、5、10天时取样品测定。
光照度4000lx。
离光源距离50mm。
试验结果见表1。
表1光照试验结果
结论本发明中的硫普罗宁冻干制剂在强光下照射10天，各项质量指标与0天比较基本一致，即本发明制成的冻干制剂对光稳定。
B.高温试验
将本发明样品放入培养皿中，分置40℃、60℃的保温箱中，在0、5、10天取样品测定，试验结果见表2～表3。
表240℃高温试验结果
表360℃高温试验结果
结论本发明中的硫普罗宁冻干制剂在40℃和60℃高温放置10天，各项考察指标与0天比较基本一致，即高温下稳定。
2、室温留样稳定性试验
参照中国药典2000年版附录XIXC药物稳定性试验指导原则，温度25±2℃，相对湿度60％±10％，室温放置，每3个月考察一次。
结果如表4
表4室温留样考查结果
结论室温留样一年，产品各项指标符合注射用硫普罗宁质量标准要求。
3、加速试验
参照中国药典2000年版附录XIXC药物稳定性试验指导原则，温度40±2℃，相对湿度75％±10％，室温放置，每隔一段时间考察一次。
结果如表5。
表5加速试验留样考查结果
结论加速试验留样6月，产品各项指标符合要求。
以上各项试验及相关数据说明，本发明中的硫普罗宁冻干制剂质量稳定，符合注射用硫普罗宁质量标准。
二、本发明中硫普罗宁冻干制剂的安全性试验
试验目的观察本发明中硫普罗宁冻干制剂在注射中对动物局部、血管有无刺激，对血球有无溶血，对豚鼠有无全身性过敏，对小鼠有无异常不良反应，为临床应用提供参考。
1.刺激性试验
1.1局部刺激性试验
1.1.1材料
(1)受试药为本发明中硫普罗宁冻干制剂，临床用药高压灭菌10ml链霉素瓶装，批号040201，每瓶含硫普罗宁0.1g配液2ml/支安瓶装，(5％碳酸氢钠PH7.5～8.5)，临床用时两瓶合一再加0.9％NS或5％葡萄糖液至200ml供ivgtt。
(2)动物日本大耳白兔，I级合格。
1.1.2试验方法
取体重2.2-2.3kg，健康无伤家兔2只，分别在其左右两腿股四头肌内，按无菌操作各注入受试药物注射用硫普罗宁1ml(100mg)，注后48hr剖杀动物，剖取注射部股四头肌，纵向切开，观察注射局部有无红肿等局部刺激反应，并按表6评分表评分，换成相应的反应级分。
表6肌肉局部刺激反应评分表
试验结果根据评分算出4块股四头肌反应级的总和，如各股四头肌反应的最高与最低组之差大于2时，应另取2只家兔重新试验。在初试或重试的2只家兔4块股四头肌反应级之和小于10时，则认为供试品的局部刺激试验符合规定。
1.1.3结果
外观检查，给家兔的股四头肌肌注硫普罗宁静滴液1ml，注射部位及周围肌肉无红肿、无溃烂、无坏死，属无刺激反应，取肌注部病理切片检查。
4块股四头肌反应级的总和为3，小于10，病理切片结果，各注射点均无明显刺激反应。
结论本发明中硫普罗宁冻干制剂的静滴液对家兔肌肉无明显刺激反应。
1.2血管刺激试验
1.2.1材料
(1)受试药同1.1.1.(1)。
(2)动物同1.1.1.(2)。
1.2.2试验方法
(1)取体重2.0～2.1kg大耳白兔2只，右耳沿静脉按0.1g.(kg.d)-1，缓慢滴入受试药，滴速为60～70滴.min-1左耳滴等量0.9％氯化钠，100ml(kg.d)-1每天静滴1次，连续于同一滴注点滴3次，末次滴注后24hr断颈动脉处死家兔取耳缘静脉血管耳片，每只实验与对照部各取1片，10％甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色，光镜观察，观察血管有无组织变性或坏死。
1.2.3结果
外观观察静滴血管及其血管周围组织无红肿、无变性、更无坏死、无异常反应。取静滴血管作病理切检查。
结论可见静滴注射用硫普罗宁液与滴注等量0.9％氯化钠注射液后，实验与对照血管无明显差异、无不良反应。实验与对照静滴血管及管壁均无变性或坏死，亦未见血栓形成，表明本发明中硫普罗宁冻干制剂的静滴液对血管无明显刺激作用。
2溶血试验
2.1材料
2.1.1受试药同1.1.1.(1)。
2.1.2受试动物同1.1.1.(2)。
2.1.3器材离心机，水浴锅，试管，离心管，竹签，蒸馏水(Ag)，注射用NS，三角瓶，量筒，注射器(灭菌1ml、10ml各2支)。
2.2试验方法
取家兔1只，自耳缘静脉取血约20ml，置三角瓶中，用竹签搅动去纤维蛋白，然后将血液移入到刻度离心管内加入NS 5～10ml，混匀后离心(2000r.min-1)5min去上清液，，再加NS混匀离心，反复洗血球3次，至上清液呈无色透明方可用于试验，将干净红血球按其容积，用NS稀释成2％的混悬液(红细胞2ml加NS至100ml)。
取试管7支，编号排列于试管架上，按表2加入各种溶液，第6管不加注射用硫普罗宁液而加NS，作为空白对照管，第7管仍不加注射用硫普罗宁液而加蒸馏水(Ag)代替NS，，作为溶血的阳性对照管，将各管轻轻摇匀，在37℃水浴中保温1hr取出后按表7依次记录结果。
表7本发明中的硫普罗宁冻干制剂对红细胞的影响
注(-)表示无溶血(--)表示不凝集(+++)表示全溶血(-)表示不加药(Ag)表示蒸馏水。
一般认为，凡1hr后第三管以前的各管出现溶血，，部分溶血或出现凝集反应的制剂，不宜作静脉注射或静滴用。
结论从表7可见，从1管至第5管，1小时内红细胞下沉较好，上层液体无色澄明，表明无溶血。下沉的红细胞经振摇后分散较快，表明无凝集。
3.过敏试验
3.1材料
3.1.1受试药同1.1.1(1)。
3.1.2受试动物豚鼠，白色或脚白色，英国种远交系I级合格。
3.1.3器材无菌注射器，灭菌生理盐水，量筒或大容量灭菌注射器。
3.2试验方法
取体重200～250g健康无伤白色或脚白色豚鼠18只，按体重随机均分3组，3组依次间日腹腔注射注射用硫普罗宁液ivgtt 0.5ml致敏，卵蛋白1％0.5ml，0.9％氯化钠注射液0.5ml，连续3次；然后各组分两次，每次3只，分别在第1次注射后14天、21天脚背iv注射用硫普罗宁液、1％卵蛋白、0.9％氯化钠注射液各2ml攻击，iv攻击后15min内观察攻击后豚鼠有无竖毛，呼吸困难，痉挛，喷嚏、干呕或咳嗽3声以上等过敏反应中的两种以上者、或有罗音、抽搐、虚脱、死亡现象之一者，应判受试药有全身过敏反应。
3.3结果
首次ip注射用硫普罗宁注射液、0.9％氯化钠注射液致敏豚鼠后14，21天通过脚撑iv2ml(0.04g).只-1攻击.均未见豚鼠出现竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕、咳嗽、亦无罗音、抽搐、虚脱，无一只死亡，第14天攻击3只中有1只有抓鼻现象，表明注射用硫普罗宁液与0.9％氯化钠注射液一样对豚鼠全身均无过敏作用，但1％卵蛋白组无论14天或21天攻击后，均见全部死亡，反应评分均为4。
4.小鼠异常毒性检查
4.1材料
4.1.1受试药同1.1.1.(1)
4.1.2受试动物小白鼠，昆明种远交系I级合格小鼠20只。
4.1.3器材灭菌1ml注射器，小鼠固定器，75％乙醇，灭菌NS等.。
4.2静脉注射检查
取体重18-22g健康小鼠5只，雌雄兼用，按体重尾iv0.25ml(10gbw)-1剂量为25ml.kg-11次iv后观察48hr，结果5只小鼠iv注射用硫普罗宁静滴液48hr生长正常，无异常反应，无一只死亡。
4.3腹腔注射检查
取18-22g健康无伤小鼠5只，按体重ip0.25ml(10gbw)-1剂量为25ml.kg-11次ip后，观察48hr结果5只小鼠ip注射用硫普罗宁静滴液生长正常，无异常毒性反应，亦无一只死亡。
4.4皮下注射检查
取体重18-22g健康小鼠5只，雌雄兼用，按体重于小鼠背sc0.25ml.(10gbw)-10.2ml，剂量为25ml.kg-1im后48hr，结果5只小鼠SC注射用硫普罗宁静滴液，且生长良好，无异常反应，无一只死亡。
4.5口服灌胃检查
取体重18-22g健康小鼠5只，雌雄兼用，按体重ig0.15ml(10gbw)-1剂量25ml.kg-11次ig为后观察48hr，结果5只小鼠ig注射用硫普罗宁静滴液后生长良好，无异常反应，且无一只死亡。
5.小结
经2只家兔4块股四头肌各im 2ml注射用硫普罗宁液，反应评分总和为3，＜10，符合刺激试验规定。每日给家兔左耳沿静脉滴注100ml.kg-1注射用硫普罗宁0.1g注射液，右耳ivgtt 0.9％氯化钠注射液连续静滴3次后，剖取耳缘静脉血管，结果注射用硫普罗宁液与0.9％氯化钠注射液反应相似，肉眼观察与病理切片检查，均未见异常，表明注射用硫普罗宁液对血管无刺激反应，首次0.5mlip注射用硫普罗宁液间日1次，共3次，致敏后14、21天以iv2ml攻击，结果两次攻击后均无过敏反应；溶血试验结果表明注射用硫普罗宁液无溶血、无凝集作用。经4种途径给注射用硫普罗宁液对小鼠均无异常毒性反应。
通过以上各项试验表明本发明中的硫普罗宁冻干制剂的安全性符合注射用药规定。
具体实施例方式
下面通过具体实施例进一步说明本发明，但本发明不局限于这些实施例。实施例中提及的百分数均为重量百分比。
实施例1
按表8中实施例1配方，制备工艺如下
配液加无菌无热原的注射用水溶解，加水到2000ml。
除热原
将上述药液中，按照重量/体积百分比的方式加入0.01％注射用活性炭，吸附15分钟，用0.45μm微孔滤膜过滤除去活性炭，收集滤液；
灭菌
将上述药液按无菌操作法进行正压除菌过滤，压力在0.1Mpa压力下，用0.22μm微孔滤膜过滤，滤过前应先进行起泡点试验，滤液送样进行细菌内毒素检查和半成品含量、pH检查，合格后灌装。
灌装
管制西林瓶的处理管制西林瓶，规格为5ml，预处理时用0.5～1.0HCL液将管制西林瓶灌满，100℃下30分钟进行热处理，生产用水洗管制西林瓶(粗洗)---纯水洗管制西林瓶(精洗)---注射用水洗管制西林瓶(终洗)洗净的管制西林瓶经220℃下烘烤2小时，彻底除去热原，降至60℃后置无菌室备用。
灌装在100级洁净度超净工作间进行灌装，半加塞。
冻干
在40℃-55℃预冻1～2小时，然后打开压缩机，开始对制品抽真空，压力在9～10Mpa，时间20分钟。当制品温度达到-15℃～17℃时，进行升华干燥，干燥时间20小时，除去制品中90％的水分。当制品温度达到-10℃～5℃时，进行反复升华干燥过程，干燥时间5小时。最后加温干燥，干燥温度10℃～15℃，待制品温度曲线与真空曲线重合时，即示冻干过程完成。总干燥时程控制在30h。
冻干箱内自动全加塞。
封口管制西林瓶分批从冻干箱取出，加铝塑复合盖。
实施例2
按表8中实施例2配方，制备工艺如下
配液加无菌无热原的注射用水溶解，加水到2000ml。
除热原
将上述药液中，按照重量/体积百分比的方式加入0.02％注射用活性炭，吸附15分钟，用0.45μm微孔滤膜过滤除去活性炭，收集滤液；
其他工艺步骤同实施例1。
实施例3
按表8中实施例3配方，制备工艺如下
配液加无菌无热原的注射用水溶解，加水到2000ml。
除热原
将上述药液中，按照重量/体积百分比的方式加入0.05％注射用活性炭，吸附15分钟，用0.45μm微孔滤膜过滤除去活性炭，收集滤液；
其他工艺步骤同实施例1。
实施例4
按表8中实施例4配方，制备工艺如下
配液加无菌无热原的注射用水溶解，加水到2000ml。
除热原
将上述药液中，按照重量/体积百分比的方式加入0.1％注射用活性炭，吸附15分钟，用0.45μm微孔滤膜过滤除去活性炭，收集滤液；
其他工艺步骤同实施例1。
实施例5～实施例27
按表8中配方，制备工艺同实施例1。
以上实施例均制成冻干品1000支。
表8本发明配方表(单位克)
权利要求
1、一种硫普罗宁冻干制剂，它含有药物活性成分硫普罗宁化合物和药物赋形剂，它们的重量比是1～10∶1，其中的药物赋形剂或是麦芽糖或/和蔗糖或/和果糖。
2、如权利要求1所述的硫普罗宁冻干制剂，其特征在于所述药物赋形剂是麦芽糖，硫普罗宁化合物与麦芽糖的重量比是2∶1。
3、如权利要求1或2所述的硫普罗宁冻干制剂的制备方法，包括以下步骤
A、配液将活性成分硫普罗宁化合物加入适量注射用水，搅拌溶解完全后按所述配比加入药物赋形剂混匀，再加入注射用水至规定量；
B、除热原在上述A步所得配液中以重量/体积百分比的方式加入0.01～0.1％注射用活性炭吸附，过滤除去活性炭，收集滤液；
C、灭菌、灌装；将上述药液进行正压除菌过滤，然后灌装；
D、冻干
将制品在40℃～55℃预冻，当制品温度均匀时，开始对制品抽真空，当制品温度达到低共熔点时，进行升华干燥，以除去制品中的大量水分；然后进行反复升华干燥和加温干燥，直至制品温度曲线与真空曲线重合。
4、如权利要求3所述的硫普罗宁冻干制剂的制备方法，包括以下步骤
A、配液将活性成分硫普罗宁化合物加入适量注射用水，搅拌溶解完全后按所述配比加入药物赋形剂混匀，再加入注射用水至规定量；
B、除热原在上述A步所得配液中以重量/体积百分比的方式加入0.02％注射用活性炭，吸附15分钟，用0.45μm微孔滤膜过滤除去活性炭，收集滤液；
C、灭菌、灌装；将上述药液进行正压除菌过滤，然后灌装；
D、冻干
在40℃～55℃预冻1～2小时，然后打开压缩机，开始对制品抽真空，压力在9～10Mpa，时间20分钟；当制品温度达到-15℃～17℃时，进行升华干燥，干燥时间20小时，除去制品中90％的水分；当制品温度达到-10℃～5℃时，进行反复升华干燥过程，干燥时间5小时；最后加温干燥，干燥温度10℃～15℃，直至制品温度曲线与真空曲线重合。
5、如权利要求3所述的硫普罗宁冻干制剂的制备方法，其中所述正压除菌过滤，压力在0.1Mpa以下，用0.22μm微孔滤膜过滤。
全文摘要
本发明提供了一种硫普罗宁冻干制剂及其制备方法。本发明含有药物活性成分硫普罗宁化合物和药物赋形剂，它们的重量比是1～10∶1，其中的药物赋形剂或是麦芽糖或/和蔗糖或/和果糖。本发明便于生产且生产成本低，其质量稳定性和安全性符合现行硫普罗宁注射剂标准。
文档编号A61P1/00GK1723886SQ200510057159
公开日2006年1月25日 申请日期2005年7月8日 优先权日2005年7月8日
发明者汪渡, 王建标 申请人:王建标