鼠抗-ny-eso-1t细胞受体的制作方法【专利摘要】本发明提供分离的或纯化的T细胞受体(TCR)，所述T细胞受体具有对NY-ESO-1的抗原特异性。还提供的是相关多肽，蛋白，核酸，重组表达载体，分离的宿主细胞，细胞群，抗体，或其抗原结合部分，和药物组合物。本发明还提供使用本发明的TCR或相关物质检测哺乳动物中癌症存在的方法和治疗或预防哺乳动物中癌症的方法。【专利说明】鼠抗-NY-ES0-1T细胞受体[0001]对相关申请的交叉引用[0002]本专利申请要求2012年5月22日提交的美国临时专利申请号61/650,020的权益，其通过引用以其整体并入本文。[0003]通过引用并入电子提交的材料[0004]通过引用以其整体并入本文的是与此同时提交的计算机可读的核苷酸/氨基酸序列表并且识别如下：命名为"713415ST25.TXT"一个23,462字节ASCII(Text)文件，日期为2013年4月30日。[0005]发明背景[0006]在一些患者中，过继性细胞治疗可以是对癌症的有效疗法。然而，对于过继性细胞治疗的整体成功的障碍仍然存在。例如，仅50%的黑素瘤样品可能产生肿瘤反应性T-细胞。非黑素瘤癌症产生肿瘤反应性T-细胞也可能是困难的。此外，很多患者可能不具有能用手术切除治疗的肿瘤。因此，存在对用于治疗患有癌症的患者的T-细胞受体的需求。[0007]发明简述[0008]本发明提供一种分离的或纯化的T-细胞受体（TCR)，所述T-细胞受体具有对NY-ESO-1的抗原特异性并且包含鼠可变区。本发明还提供相关多肽和蛋白，以及相关核酸，重组表达载体，宿主细胞，和细胞群。本发明还提供的是抗体，或其抗原结合部分，和与本发明的TCR相关的药物组合物。[0009]本发明还提供检测哺乳动物中癌症存在的方法和治疗或预防哺乳动物中癌症的方法。本发明的检测哺乳动物中癌症存在的方法包括（i)将包含癌细胞的样品与本文描述的本发明的TCR，多肽，蛋白，核酸，重组表达载体，宿主细胞，宿主细胞群，或抗体，或其抗原结合部分中任一种接触，从而形成复合体，和（ii)检测所述复合体，其中复合体的检出表明在哺乳动物中存在癌症。[0010]本发明的治疗或预防哺乳动物中癌症的方法包括以在哺乳动物中有效治疗或预防癌症的量向哺乳动物施用本文中描述的任意TCR，多肽，或蛋白，包含编码本文中描述的任意TCR，多肽，蛋白的核苷酸序列的任意核酸或重组表达载体，或包含编码本文中描述的任意TCR，多肽，或蛋白的重组载体的任意宿主细胞或宿主细胞群。[0011]附图的一些场景的简述[0012]图1A和1B是显示在与以不同浓度的NY-ESO_l157_165脉冲的树突细胞共培养时，转染有鼠抗-NY-ESO-1TCR(阴影圆圈）或人抗-NY-ESO-1TCR(无阴影圆圈）的人CD8+(图1A)或CD4+(图1B)T细胞的干扰素（IFN)-y分泌的图表。[0013]图2A和2B是显示单独培养（培养基）或与用对照肽脉冲的T2细胞，用NY-ES0-1157_16#脉冲的T2细胞，或不同肿瘤细胞系888mel(NY-ESO-1-)，Sk23mel(NY-ES0-1_)，C0A-A2-CEA(NY-ES0-1_)，A375mel(NY-ESO-1+)，1363mel(NY-ESO-1+)，或C0S-A2-ES0(NY-ES0-1+)之一共培养的转染有鼠抗-NY-ES0-1TCR(阴影线条）或人抗-NY-ES0-1TCR(无阴影线条）的人CD8+(图2A)或CD4+(图2B)T细胞的IFN-y分泌的图表。[0014]发明详述[0015]本发明提供一种分离的或纯化的T-细胞受体（TCR)，所述T-细胞受体具有对NY-ESO-1的抗原特异性并且包含鼠可变区。NY-ESO-1是癌症睾丸抗原（CTA)，其仅在肿瘤细胞和睾丸和胎盘的不表达MHC的生殖细胞中表达。NY-ESO-1在多种人癌症中表达，包括但不限于黑素瘤，乳腺癌，肺癌，前列腺癌，甲状腺癌，卵巢癌，和滑膜细胞肉瘤。NY-ESO-1蛋白可以包含SEQIDNO:1，由或基本由SEQIDNO:1组成。[0016]所述TCR可以具有对任意NY-ES0-1蛋白、多肽或肽的抗原特异性。在本发明的实施方案中，所述TCR具有对包含SEQIDNO:1，由或基本由SEQIDNO:1组成的NY-ES0-1蛋白的抗原特异性。在本发明的优选的实施方案中，所述TCR具有对包含SLLMWITQC(SEQIDNO:2)，由或基本由SLLMWITQC(SEQIDNO:2)组成的NY-ES0-1157-165肽的抗原特异性。[0017]本文中使用的表述"具有抗原特异性"意为所述TCR能够特意结合并免疫地识别NY-ES0-1，从而所述TCR对NY-ES0-1的结合引发免疫应答。[0018]在本发明的一个实施方案中，本发明的TCR能够以I类主要组织相容性复合体(MHC)依赖的方式识别NY-ES0-1。本文中使用的"I类MHC依赖的方式"意为在I类MHC分子的情况下结合NY-ES0-1时，所述TCR引发免疫应答。所述I类MHC分子可以是本领域中已知的任意I类MHC分子，例如，HLA-A分子。在本发明的实施方案中，所述I类MHC分子是HLA-A2分子。[0019]在本发明的实施方案中，本发明的TCR包含鼠可变区。本发明的TCR还可以包含源自任意合适物种诸如，例如，人或小鼠的恒定区。优选地，本发明的TCR还包含鼠恒定区。在特别优选的实施方案中，本发明的TCR是包含鼠可变区和鼠恒定区二者的鼠TCR。[0020]如本文中使用的，术语"鼠，"当涉及本文中描述的TCR或TCR的任意组成部分（例如，互补决定区（CDR)，可变区，恒定区，a链，和/或0链）时，意为源自小鼠的TCR(或其组成部分），即，源于或一度由小鼠T细胞表达的TCR(或其组成部分）。理想的是，所述TCR(或其组成部分）表达在人宿主细胞表面。[0021]本发明的TCR提供很多优点，包括当用于过继性细胞转移时的优点。例如，不受限于特定理论或机制，人们相信，因为NY-ES0-1由多种癌症类型的细胞表达，本发明的TCR有利地提供破坏多种类型癌细胞的能力并且，因此，治疗或预防多种类型癌症。另外，不受限于特定理论或机制，人们相信，因为NY-ES0-1是仅在肿瘤细胞和睾丸和胎盘的不表达MHC的生殖细胞中表达的癌症睾丸抗原，本发明的TCR有利地靶向癌细胞的破坏，同时最小化或排出对正常、非癌细胞的破坏，从而降低，例如，最小化或排除毒性。人们还相信，与人TCR相比，鼠TCR可以提供人宿主细胞表面上增加的表达（例如，更大数量的TCR)和/或增加的功能性（如通过例如，细胞因子释放和细胞毒性测量）。不受限于特定理论和机制，人们相信，所述改善的表达和/或功能性由宿主细胞中内源性和外源性（转导的）TCR链混合的减少导致。因此，人们相信，鼠TCR可以比外源性人TCR更有效替代人宿主细胞表面上的内源性TCR。人们还相信，与人宿主细胞表达的外源性人TCR相比，鼠TCR提供改善的TCR链配对和/或改善的与人宿主细胞的CD3复合体的相互作用。[0022]本发明的实施方案提供一种TCR，所述TCR包含两条多肽（即，多肽链），诸如TCR的a链，TCR的0链，TCR的Y链，TCR的S链，或其组合。如果所述TCR具有对NY-ES0-1的抗原特异性并包含鼠可变区，本发明的TCR多肽可以包含任意氨基酸序列。[0023]在本发明的优选的实施方案中，所述TCR包含两条多肽链，其各自包含可变区，所述可变区包含TCR的互补决定区（⑶R)l，⑶R2,和⑶R3。优选地，所述第一多肽链包含含有氨基酸序列SEQIDNO:3的CDRl(a链的CDR1，含有氨基酸序列SEQIDNO:4的CDR2(a链的⑶R2)，和含有氨基酸序列SEQIDNO:5的⑶R3(a链的⑶R3)，并且所述第二多肽链包含含有氨基酸序列SEQIDNO:6的CDR1(0链的CDR1)，含有氨基酸序列SEQIDNO:7的CDR2(0链的CDR2)，和含有氨基酸序列SEQIDNO:8的CDR3(0链的CDR3)。在这个意义上，本发明的TCR可以包含选自由以下各项组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0s:3-5,6-8，和3-8。优选地，所述TCR包含SEQIDNOs:3-8的氨基酸序列。[0024]备选地或另外，所述TCR可以包含含有上文列出的⑶Rs的TCR的可变区的氨基酸序列。在这个意义上，所述TCR可以包含SEQIDNO:9(a链的可变区）或10(0链的可变区），或SEQIDN0s:9和10二者的氨基酸序列。优选地，本发明的TCR包含SEQIDNOs:9和10的氨基酸序列。[0025]备选地或另外，所述TCR可以包含TCR的a链和TCR的0链。本发明的TCR的a链和0链各自可以独立地包含任意氨基酸序列。优选地，所述a链包含上文列出的a链的可变区。在这个意义上，本发明的TCR可以包含SEQIDNO:11的氨基酸序列。此种类型的发明TCR可以与TCR的任意0链配对。优选地，本发明的TCR的0链包含上文列出的0链的可变区。在这个意义上，本发明的TCR可以包含SEQIDNO:12的氨基酸序列。因此，本发明的TCR可以包含SEQIDNO:11或12,或SEQIDNOs:11和12二者的氨基酸序列。优选地，本发明的TCR包含SEQIDNOs:11和12的氨基酸序列。[0026]本发明还提供的是一种分离的或纯化的多肽，所述多肽包含本文中描述的任意TCR的功能部分。本文中使用的术语"多肽"包括寡肽并且指通过一个或多个肽键连接的氨基酸单链。[0027]就本发明的多肽而言，如果所述功能部分特异结合NY-ES0-1，所述功能部分可以是包含TCR(所述部分是其部分）的相邻氨基酸的任意部分。当用于涉及TCR时，术语"功能部分"指发明的TCR的任意部分或片段，所述部分或片段保留所述TCR(所述部分或片段是其部分）（亲本TCR)的生物学活性。功能部分包括，例如，保留特异结合NY-ES0-1，或检测，治疗，或预防癌症能力至与亲本TCR类似程度、相同程度或更高程度的那些TCR部分。关于亲本TCR，所述功能部分可以包含亲本TCR的例如，约10%，25%，30%，50%，68%，80%，90%，95%，或更多。[0028]所述功能部分可以在所述部分的氨基或羧基末端，或在二者的末端都包含另外的氨基酸，所述另外的氨基酸未在亲本TCR的氨基酸序列中发现。理想的是，所述另外的氨基酸不干预所述功能部分的生物学功能，例如，特异结合NY-ES0-1，具有检测癌症，治疗或预防癌症的能力等。更理想的是，与亲本TCR的生物学活性相比所述另外的氨基酸增强生物学活性。[0029]所述多肽可以包含本发明TCR的a和0链之一或二者的功能部分，诸如包含本发明TCR的a链和/或0链的可变区的CDR1，CDR2,和CDR3的一个或多个的功能部分。在这个意义上，所述多肽可以包含含有SEQIDN0:3(a链的⑶Rl)，4(a链的⑶R2)，5(a链的CDR3)，6(f3链的CDRl)，7(f3链的CDR2)，8(f3链的CDR3)，或其组合的氨基酸序列的功能部分。优选地，本发明的多肽包含含有SEQIDNOs:3-5,6-8,或SEQIDNOs:3-8的全部的功能部分。更优选地，所述多肽包含含有SEQIDN0s:3-8氨基酸序列的功能部分。[0030]备选地或另外，本发明的多肽可以包含，例如，本发明TCR的可变区，所述可变区包含上文列出的⑶R区的组合。在这个意义上，所述TCR可以包含SEQIDNO:9(a链的可变区）或10(0链的可变区），或SEQIDN0s:9和10二者的氨基酸序列。优选地，所述多肽包含SEQIDNOs:9和10的氨基酸序列。[0031]备选地或另外，本发明的多肽可以包含本文中描述的TCR之一的a或0链的全长。在这个意义上，本发明的多肽可以包含SEQIDNO:11或12的氨基酸序列。备选地，本发明的多肽可以包含本文中描述的TCR的两条链。例如，本发明的多肽可以包含SEQIDNOs:11和12两条氨基酸序列。[0032]本发明还提供一种分离的或纯化的蛋白，所述蛋白包含本文中描述的多肽中的至少一种。"蛋白"意为包含一个或多个多肽链的分子。[0033]本发明的蛋白可以包含含有氨基酸序列SEQIDNO:9的第一多肽链和含有氨基酸序列SEQIDNO:10的第二多肽链。本发明的蛋白可以，例如，包含含有氨基酸序列SEQIDNO:11的第一多肽链和含有氨基酸序列SEQIDNO:12的第二多肽链。在此种情况下，本发明的蛋白可以是TCR。备选地，如果例如，所述蛋白包含含有SEQIDN0:11和SEQIDNO:12的单个多肽链，或如果所述蛋白的第一和/或第二多肽链还包含其它氨基酸序列，例如，编码免疫球蛋白或其部分的氨基酸序列，那么本发明的蛋白可以是融合蛋白。在这个意义上，本发明还提供一种融合蛋白，所述融合蛋白包含至少一种本文中描述的本发明的多肽以及至少一种其它多肽。所述其它多肽可以作为融合蛋白的分开的多肽存在，或可以作为与本文中描述的本发明的多肽之一在框内（串联）表达的多肽存在。所述其它多肽可以编码任意肽或蛋白分子，或其部分，包括，但不限于免疫球蛋白，⑶3,⑶4,⑶8,MHC分子，⑶1分子，例如，CDla，CDlb，CDlc，CDld，等。[0034]所述融合蛋白可以包含一个或多个拷贝的本发明的多肽和/或一个或多个拷贝的所述其它多肽。例如，所述融合蛋白可以包含1，2,3,4,5，或更多个拷贝的本发明的多肽和/或其它多肽。制备融合蛋白的合适方法是本领域中已知的，并且包括，例如，重组方法。参见，例如，Choi等人，Mol.Biotechnol.31:193-202(2005)。[0035]在本发明的一些实施方案中，本发明的TCR，多肽，和蛋白（包括功能部分和功能变体）可以表达为包含连接a链和0链的接头肽的单个蛋白。适于连接a链和0链的任意接头肽可以用于本发明的TCR，多肽，和蛋白（包括功能部分和功能变体）。在本发明的实施方案中，所述接头肽是小RNA病毒2A肽。在这个意义上，本发明的TCR，多肽，和蛋白(包括功能部分和功能变体）还可以包含接头肽，所述接头肽包含含有SEQIDNO:13的氨基酸序列。所述接头肽可以有利地促进重组TCR，多肽，和/或蛋白在宿主细胞中的表达。在通过宿主细胞表达包括所述接头肽的构建体时，所述接头肽可以被切下，产生分开的a和0链。[0036]本发明的蛋白可以是包含至少一种本文中描述的本发明的多肽的重组抗体。本文中使用的"重组抗体"指重组的（例如，遗传改造的）蛋白，所述蛋白包含至少一种本发明的多肽和抗体、或其部分的多肽链。抗体、或其部分的多肽，可以是重链、轻链、重链或轻链的可变区或恒定区，单链可变片段（scFv)、或抗体的Fc、Fab、或F(ab)2'片段等。抗体，或其部分的多肽链，可以作为重组抗体的分开的多肽存在。备选地，抗体、或其部分的多肽链，可以作为与本发明的多肽在框内（串联）表达的多肽存在。抗体、或其部分的多肽，可以任意抗体或任意抗体片段的多肽，包括本文中描述的任意抗体和抗体片段的多肽。[0037]本发明的范围内包括的是本文中描述的本发明的TCR，多肽，和蛋白的功能变体。本文中使用的术语"功能变体"指与亲本TCR，多肽，或蛋白具有相当程度或显著序列同一性或相似性的TCR，多肽，或蛋白，所述功能变体保留所述TCR，多肽，或蛋白（所述功能变体是其变体）的生物学活性。功能变体包括，例如，保留对NY-ESO-1的特异结合能力至与亲本TCR，多肽，或蛋白相似程度、相同程度、或更高程度的那些本文中描述的（亲本TCR，多肽，或蛋白）的TCR，多肽，或蛋白变体。关于亲本TCR，多肽，或蛋白，所述功能变体可以与亲本TCR，多肽，或蛋白在氨基酸序列上，例如，至少约30%，50%，75%，80%，90%，91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，99%或更多相同。[0038]所述功能变体可以，例如，包含具有至少一个保守氨基酸置换的亲本TCR，多肽，或蛋白的氨基酸序列。保守氨基酸置换是本领域中已知的，并且包括这样的氨基酸置换，其中一个具有某物理和/或化学性质的氨基酸改变为另一个具有相同化学或物理性质的氨基酸。例如，所述保守氨基酸置换可以是酸性氨基酸置换为另一个酸性氨基酸（例如，Asp或Glu)，具有非极性侧链的氨基酸置换为另一个具有非极性侧链的氨基酸（例如，Ala，Gly，Val，lie，Leu，Met，Phe，Pro,Trp，Val，等），碱性氨基酸置换为另一个碱性氨基酸（Lys，Arg，等），具有极性侧链的氨基酸置换为另一个具有极性侧链的氨基酸（Asn，Cys，Gln，Ser，Thr，Tyr，等），等。[0039]备选地或另外，所述功能变体可以包含具有至少一个非保守氨基酸置换的亲本TCR，多肽，或蛋白氨基酸序列。在此种情况下，优选所述非保守氨基酸置换不干扰或抑制所述功能变体的生物学活性。优选地，所述非保守氨基酸置换增强所述功能变体的生物学活性，从而与亲本TCR，多肽，或蛋白相比，所述功能变体的生物学活性增加。[0040]所述TCR，多肽，或蛋白可以基本上由本文中描述的一个或多个具体说明的氨基酸序列组成，从而所述功能变体的其它组分，例如，其它氨基酸，实质上不改变功能变体的生物学活性。在这个意义上，本发明的TCR，多肽，或蛋白可以，例如，基本上由SEQIDNO:11或12,或SEQIDN0s:ll和12二者的氨基酸序列组成。同样，例如，本发明的TCR，多肽，或蛋白可以基本上由SEQIDN0:9或10,或SEQIDN0s:9和10二者的氨基酸序列组成。此夕卜，本发明的TCR，多肽，或蛋白可以基本上由SEQIDN0:3(a链的CDRl)，4(a链的CDR2)，5(a链的CDR3)，6(0链的CDR1)，7(0链的CDR2)，8(0链的CDR3)，或其任意组合，例如，SEQIDNOs:3-5,6-8,或3-8的氨基酸序列组成。[0041]本发明的TCR，多肽，和蛋白（包括功能部分和功能变体）可以是任意长度，S卩，可以包含任意数量的氨基酸，只要所述TCR，多肽，或蛋白（或其功能部分或功能变体）保留其生物学活性，例如，特异结合NY-ES0-1，检测哺乳动物中癌症，或治疗或预防哺乳动物中癌症等的能力。例如，所述多肽可以是50至5000个氨基酸长，诸如50,70,75,100,125,150，175,200,300,400,500,600,700,800,900,1000或更多个氨基酸长。在这个意义上，本发明的多肽还包括寡肽。[0042]本发明的TCR，多肽，和蛋白（包括功能部分和功能变体）可以包含合成的氨基酸，所述合成的氨基酸代替一个或多个天然存在的氨基酸。此种合成的氨基酸是本领域中已知的，并且包括，例如，氨基环己烷羧酸，正亮氨酸，a-氨基正癸酸，高丝氨酸，S-乙酰氨甲基-半胱氨酸，反式-3-和反式-4-羟脯氨酸，4-氨基苯丙氨酸，4-硝基苯丙氨酸，4-氯苯丙氨酸，4-羧基苯丙氨酸，苯基丝氨酸羟基苯丙氨酸，苯基甘氨酸，a-萘基丙氨酸，环己基丙氨酸，环己基甘氨酸，吲哚啉-2-羧酸，1，2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸，氨基丙二酸，氨基丙二酸单酰胺，N'-苄基-N'-甲基-赖氨酸，N'，N'-二苄基-赖氨酸，6-羟基赖氨酸，鸟氨酸，a-氨基环丙烷羧酸，a-氨基环己烷羧酸，a-氨基环庚烷羧酸，a-(2-氨基-2-降莰烷）-羧酸，a，丫-二氨基丁酸，a，0-二氨基丙酸，高苯丙氨酸，和a-叔丁基甘氨酸。[0043]本发明的TCR，多肽，和蛋白（包括功能部分和功能变体）可以被糖基化，酰胺化，羧化，磷酸化，酯化，N-乙酰化，通过例如二硫化物桥环化，或转变为酸加成盐和/或任选地二聚化或多聚化，或缀合。[0044]当本发明的TCR，多肽，和蛋白（包括功能部分和功能变体）为盐的形式时，优选地，所述多肽为药用盐的形式。合适药用酸加成盐包括源自无机酸的那些，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、偏磷酸盐、硝酸和硫酸盐，以及有机酸的那些，诸如酒石酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、富马酸盐、苯甲酸盐、乙醇酸盐、葡萄糖酸盐、琥珀酸盐、和芳基磺酸盐例如，对甲苯磺酸盐。[0045]可以通过本领域中已知的方法获得本发明的TCR，多肽，和/或蛋白（包括其功能部分和功能变体）。从头合成多肽和蛋白的合适方法在参考文献中描述，所述参考文献诸如Chan等人，FmocSolidPhasePeptideSynthesis,OxfordUniversityPress，Oxford,UnitedKingdom,2005：PeptideandProteinDrugAnalysis,ed.Reid,R.,MarcelDekker，Inc.，2000：EpitopeMapping,ed.Westwoood等人，OxfordUniversityPress，Oxford，UnitedKingdom，2000;和美国专利5,449,752。同样，可以使用本文中描述的核酸使用标准重组方法重组成产多肽和蛋白。参见，例如，Sambrook等人，MolecularCloning：ALaboratoryManual,第3版，ColdSpringHarborPress，ColdSpringHarbor，NY2001;和Ausubel等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssociates和JohnWiley&Sons，NY，1994。此外，本发明的一些TCR，多肽，和蛋白（包括其功能部分和功能变体）可以从来源诸如植物、细菌、昆虫、哺乳动物例如小鼠、人等分离和/或纯化。分离和纯化方法是本领域中公知的。备选地，本文中描述的TCR，多肽，和/或蛋白（包括其功能部分和功能变体）可以由公司诸如Synpep(Dublin，CA)，PeptideTechnologiesCorp.(Gaithersburg，MD)，和MultiplePeptideSystems(SanDiego,CA)商业合成。在这方面，本发明的TCR，多肽，和蛋白可以是合成的，重组的，分离的，和/或纯化的。[0046]本发明范围中包括的是缀合物，例如，生物缀合物，所述缀合物包含本发明的TCR，多肽，或蛋白（包括任意其功能部分或变体），核酸，重组表达载体，宿主细胞，宿主细胞群，或抗体、或其抗原结合部分的任一个。缀合物，以及通常合成缀合物的方法，是本领域中已知的（参见，例如，Hudecz，F.，MethodsMol.Biol.298:209-223(2005)和Kirin等人，InorgChem.44(15):5405-5415(2005))。[0047]本发明还提供的是包含编码本文中描述的任意TCR，多肽，或蛋白（包括其功能部分和功能变体）的核苷酸序列的核酸。[0048]本文中使用的"核酸"包括"多聚核苷酸"，"寡核苷酸"和"核酸分子"，并且通常意为DNA或RNA的聚合物，其可以是单链或双链的，合成的或获得（例如，分离和/或纯化）自天然来源，其可以含有天然，非天然或改变的核苷酸，并且其可以含有天然，非天然或改变的核苷酸间连接，诸如磷酰胺醋（phosphoroamidate)连接或硫代磷酸醋连接，替代未修饰的寡核苷酸的核苷酸之间建立的磷酸二酯。通常优选所述核酸不包含任何插入，删除，倒位，和/或置换。然而，如本文中讨论的，在一些情况中，对于核酸而言，包含一个或多个插入，删除，倒位，和/或置换可以是合适的。[0049]优选地，本发明的核酸是重组的。本文中使用的术语"重组"指（i)在活细胞外通过将天然或合成的核酸片段连接于可以在活细胞中复制的核酸分子而构建的分子，或（ii)上述（i)中描述的那些复制产生的分子。为了本文中的目的，所述复制可以是体外复制或体内复制。[0050]可以基于化学合成和/或酶连接反应使用本领域中已知的步骤构建所述核酸。参见，例如，Sambrook等人，在前，和Ausubel等人，在前。例如，可以使用天然存在的核苷酸或设计以增加分子的生物学稳定性或增加杂交时形成的双螺旋的物理稳定性的不同修饰的核苷酸（例如，硫代磷酸酯衍生物和吖啶置换的核苷酸）化学合成核酸。可以用于产生所述核酸的修饰的核苷酸的实例包括，但不限于，5-氟尿嘧啶，5-溴尿嘧啶，5-氯尿嘧啶，5-碘尿嘧啶，次黄嘌呤，黄嘌呤，4-乙酰胞嘧啶，5-(羧基羟甲基）尿嘧啶，5-羧甲基氨甲基-2-硫尿苷，5-羧甲基氨甲基尿喃啶，二氢尿喃啶，|3-D-半乳糖基queosine，肌苷，N6-异戊烯基腺嘌呤，1-甲基鸟嘌呤，1-甲基肌苷，2,2-二甲基鸟嘌呤，2-甲基腺嘌呤，2-甲基鸟嘌呤，3-甲基胞嘧啶，5-甲基胞嘧啶，N6-取代的腺嘌呤，7-甲基鸟嘌呤，5-甲基氨甲基尿嘧啶，5-甲氧基氨甲基-2-硫代尿嘧啶，0-D-甘露糖基que〇Sine，5'-甲氧基羧甲基尿嘧啶，5-甲氧基尿嘧啶，2-甲基硫代-N6-异戊烯基腺嘌呤，尿嘧啶-5-羟乙酸（V)，wybutoxosine，假尿喃啶，queosine，2-硫胞喃啶，5-甲基-2-硫尿喃啶，2-硫尿喃啶，4-硫尿嘧啶，5-甲基尿嘧啶，尿嘧啶-5-羟乙酸甲酯，3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基）尿嘧啶，和2,6_二氨基嗓呤。备选地，本发明的一种或多种核酸可以购自公司，诸如MacromolecularResources(FortCollins，CO)和Synthegen(Houston，TX)〇[0051]所述核酸可以包含编码本发明的任意TCR，多肽，或蛋白，或其功能部分或功能变体的任意核苷酸序列。例如，所述核酸可以包含含有以下各项，由以下各项组成，或基本上由以下各项组成的核苷酸序列：SEQIDNO:19(野生型a链）或SEQIDNO:20(野生型0链）或SEQIDNOs:19和20二者。[0052]在一些实施方案中，所述核苷酸序列可以被密码子优化。不受限于特定理论或机制，人们相信，核苷酸序列的密码子优化增加mRNA转录本的翻译效率。核苷酸序列的密码子优化可以包括将天然密码子置换为另一个编码相同氨基酸，但可以由在细胞中更容易获得的tRNA翻译的密码子，从而增加翻译效率。核苷酸序列的优化还可以减少干扰翻译的二级mRNA结构，从而增加翻译效率。在本发明的实施方案中，密码子优化的核苷酸序列可以包含以下各项，由以下各项组成，或基本上由以下各项组成：SEQIDNO:15(密码子优化的a链），SEQIDNO:16(密码子优化的0链），SEQIDNO:21(密码子优化的a链可变区），SEQIDNO:22(密码子优化的0链可变区），SEQIDNOs:15和16二者，SEQIDNOs:21和22二者，SEQIDNOs:15和20二者，或SEQIDNOs:16和19二者。[0053]在本发明的实施方案中，就本发明的其它方面而言，编码本发明的TCR，多肽，和蛋白（包括其功能部分和功能变体）的核苷酸序列还可以包含编码本文中描述的任意接头肽的核苷酸序列。在本发明的实施方案中，所述接头肽可以由包含SEQIDNO:14的核苷酸序列编码。[0054]本发明还提供包含与本文中描述的任意核酸至少约70%或更多，例如，约80%，约90%，约91%，约92%，约93%，约94%，约95%，约96%，约97%，约98%，或约99%相同的核苷酸序列的核酸。[0055]所述核苷酸序列备选地可以包含与SEQIDNO:15，SEQIDNO:16，SEQIDNO:19，SEQIDNO:20,SEQIDNO:21，SEQIDNO:22,SEQIDNOs:15和16二者，SEQIDNOs:19和20二者，SEQIDNOs:21和22二者，SEQIDNOs:15和20二者，或SEQIDNOs:16和19二者简并的核苷酸序列。优选地，所述核酸包含含有SEQIDNO:15,16,19,20,21，或22，SEQIDNOs:15和16,SEQIDNOs:19和20,SEQIDNOs:21和22,SEQIDNOs:15和20，或SEQIDNOs:16和19的核苷酸序列，或与其简并的核苷酸序列。[0056]本发明还提供一种分离的或纯化的核酸，所述核酸包含与本文中描述的任意核酸的核苷酸序列互补的核苷酸序列或在严格条件下与本文中描述的任意核酸的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。[0057]在严格条件下杂交的核苷酸序列优选在高度严格条件下杂交。"高度严格条件"意为核苷酸序列以可检测地强于非特异杂交的量特异杂交于靶序列（本文中描述的任意核酸的核苷酸序列）。高度严格条件包括将具有精确互补序列的多核苷酸，或仅含有少数分散的错配的多核苷酸与偶尔具有少数小的匹配所述核苷酸序列的区域（例如，3-10个碱基）的随机序列相区分。此种小的互补区域比14-17或更多碱基的全长互补更容易解链，并且高度严格杂交使它们易于区分。相对高度严格条件将包括，例如，低盐和/或高温条件，诸如由约0.02-0.lMNaCl或等效的，在约50-70°C的温度提供的低盐和/或高温条件。此种高度严格条件容许核苷酸序列和模板或靶链之间很少的（如果有）错配，并尤其适于检测本发明的任意TCR的表达。一般理解，可以通过加入增加量的甲酰胺使条件更严格。[0058]本发明的核酸可以被并入重组表达载体。在这个意义上，本发明提供重组表达载体，所述重组表达载体包含本发明的任意核酸。为了本文中的目的，术语"重组表达载体"意为遗传修饰的寡核苷酸或多核苷酸构建体，当构建体包含编码mRNA，蛋白，多肽，或肽的核苷酸序列，并且在足以使mRNA，蛋白，多肽，或肽在细胞内表达的条件下将载体与细胞接触时，所述构建体允许通过宿主细胞表达mRNA，蛋白，多肽，或肽。本发明的载体作为整体不是天然存在的。然而，载体的部分可以是天然存在的。本发明的重组表达载体可以包含任意类型的核苷酸，包括，但不限于DNA和RNA，所述核苷酸可以是单链或双链的，合成的或部分获自天然来源，并且其可以含有天然，非天然或改变的核苷酸。所述重组表达载体可以包含天然存在的，非天然存在的核苷酸间连接，或两种类型的连接。优选地，所述非天然存在的或改变的核苷酸或核苷酸间连接不妨碍载体的转录或复制。[0059]本发明的重组表达载体可以是任意合适的重组表达载体，并且可以用于转化或转染任意合适的宿主细胞。合适的载体包括设计用于繁殖和扩大或用于表达或用于二者的那些载体，诸如质粒和病毒。所述载体可以选自由以下各项组成的组：puc系列（FermentasLifeSciences)，pBluescript系列（Stratagene，Lajolla，CA)，pET系列（Novagen，Madison，WI)，pGEX系列（PharmaciaBiotech，Uppsala，Sweden)，和pEX系列（Clontech，PaloAlto，CA)。菌体载体，诸如XGT10，XGT11，XZapII(Stratagene)，XEMBL4,和入NM1149,也可以被使用。植物表达载体的实例包括pBI01，pBI101.2，pBI101.3，pBI121和pBIN19(Clontech)。动物表达载体的实例包括pEUK-Cl，pMAM和pMAMneo(Clontech)。优选地，所述重组表达载体是病毒载体，例如，逆转录病毒载体或慢病毒载体。[0060]可以使用描述于例如，Sambrook等人，在前，和Ausubel等人，在前中的标准重组DNA技术制备本发明的重组表达载体。可以制备环形或线性的表达载体构建体以含有在原核或真核宿主细胞中行使功能的复制体系。复制体系可以源自，例如ColEl，2y质粒，入，SV40,牛乳头瘤病毒，等。[0061]理想的是，所述重组表达载体包含调节序列，诸如转录和翻译起始和终止密码子，所述密码子特异于载体被引入的宿主细胞类型（例如，细菌，真菌，植物，或动物），酌情并考虑载体是否是基于DNA或基于RNA的。[0062]所述重组表达载体可以包括一个以上标志物基因，所述标志物基因允许选择转化的或转染的宿主细胞。标志物基因包括生物杀灭剂抗性，例如，对抗生素、重金属等的抗性，补充于营养缺陷型宿主以提供原养型等。用于本发明的表达载体的合适的标志物基因包括，例如，新霉素/G418抗性基因，潮霉素抗性基因，组氨醇抗性基因，四环素抗性基因，和氨苄青霉素抗性基因。[0063]所述重组表达载体可以包含可操作连接于编码所述TCR，多肽，或蛋白（包括其功能部分和功能变体）的核苷酸序列，或连接于与编码所述TCR，多肽，或蛋白的核苷酸序列互补或杂交的核苷酸序列的天然或非天然启动子。启动子的选择（例如强、弱、可诱导、组织特异和发育特异）在技术人员的普通技术内。类似地，将核苷酸序列与启动子结合也在技术人员的普通技术内。所述启动子可以是非病毒启动子或病毒启动子，例如，巨细胞病毒(CMV)启动子，SV40启动子，RSV启动子，和在鼠干细胞病毒的长末端重复中发现的启动子。[0064]本发明的重组表达载体可以被设计为瞬时表达，稳定表达，或设计为二者都有。另夕卜，所述重组表达载体可以被制备为组成型表达或诱导型表达。此外，所述重组表达载体可以被制备为包括自杀基因。[0065]本文中使用的，术语"自杀基因"指引起细胞表达自杀基因而死亡的基因。自杀基因可以是赋予细胞（基因在其中表达）对化学剂例如药物灵敏度，并当细胞与化学剂接触或暴露于化学剂时引起细胞死亡的基因。自杀基因是本领域中已知的（见，例如，SuicideGeneTherapy：MethodsandReviews,Springer,CarolineJ.(CancerResearchUKCentreforCancerTherapeuticsattheInstituteofCancerResearch，Sutton，Surrey，UK)，HumanaPress，2004)，并且包括，例如，单纯疱疼病毒（HerpesSimplexVirus)(HSV)胸苷激酶（TK)基因，胞嘧啶脱氨酶（daminase)，嘌呤核苷酸磷酸化酶，和硝基还原酶。[0066]本发明的重组表达载体可以包含编码位于编码0链的全部或部分的核苷酸序列5'侧的a链的全部或部分的核苷酸序列。在这个意义上，本发明的实施方案提供一种重组表达载体，所述重组表达载体包含编码⑶R1a，⑶R2a，⑶R3a，⑶R10，⑶R20，和⑶R30的核苷酸序列，并且编码⑶R1a，⑶R2a，和⑶R3a的核苷酸序列在编码⑶R10，CDR20，和CDR30的核苷酸序列的5'侧。同样，编码CDR10，CDR20，和CDR30的核苷酸序列可以在编码⑶R1a，⑶R2a，和⑶R3a的核苷酸序列的3'侧。在本发明的另一个实施方案中，所述重组表达载体包含编码a链的可变区和0链的可变区的核苷酸序列，并且编码a链可变区的核苷酸序列在编码0链可变区的核苷酸序列的5'侧。同样，编码0链可变区的核苷酸序列可以在编码a链可变区的核苷酸序列的3'侧。在本发明的另一个实施方案中，所述重组表达载体包含编码a链和0链的核苷酸序列，并且编码a链的核苷酸序列在编码0链的核苷酸序列的5'侧。同样，编码0链的核苷酸序列可以在编码a链的核苷酸序列的3'侧。包含编码位于编码0链的全部或部分的核苷酸序列的5'侧的a链的全部或部分的核苷酸序列的重组表达载体可以包含SEQIDNO:17。[0067]本发明的重组表达载体可以包含编码位于编码0链的全部或部分的核苷酸序列的3'侧的a链的全部或部分的核苷酸序列。不受特定理论或机制限制，人们相信，与由重组表达载体（其中编码a链的全部或部分的核苷酸序列位于编码0链的全部或部分的核苷酸序列的5'侧）编码的TCR，多肽，或蛋白（或其功能部分或功能变体）相比，由重组表达载体（其中编码a链的全部或部分的核苷酸序列位于编码0链的全部或部分的核苷酸序列的3'侧）编码的TCR，多肽，或蛋白（或其功能部分或变体）提供改善的功能性和抗原识别。在这个意义上，本发明的实施方案提供一种重组表达载体，所述重组表达载体包含编码⑶R1a，⑶R2a，⑶R3a，⑶R10，⑶R20，和⑶R30的核苷酸序列，并且编码⑶R1a，⑶R2a，和⑶R3a的核苷酸序列在编码⑶R10，⑶R20，和⑶R30的核苷酸序列的3'侧。同样，编码CDR10，CDR20，和CDR30的核苷酸序列可以在编码CDR1a，CDR2a，和CDR3a的核苷酸序列的5'侧。在本发明的另一个实施方案中，所述重组表达载体包含编码a链可变区和0链可变区的核苷酸序列，并且编码a链可变区的核苷酸序列在编码0链可变区的核苷酸序列的3'侧。同样，编码0链可变区的核苷酸序列可以在编码a链可变区的核苷酸序列的5'侧。在本发明的另一个实施方案中，所述重组表达载体包含编码a链和0链的核苷酸序列，并且编码a链的核苷酸序列在编码0链的核苷酸序列的3'侧。同样，编码0链的核苷酸序列可以在编码a链的核苷酸序列的5'侧。所述重组表达载体包含编码位于编码0链的全部或部分的核苷酸序列的3'侧的a链的全部或部分的核苷酸序列可以包含SEQIDN0:18。[0068]在本发明的实施方案中，所述重组表达载体可以包含DNA标签。所述DNA标签可以将重组表达载体区别于另一种编码相同蛋白序列的载体。所述DNA标签可以不包括在编码本发明的TCR(包括其功能部分和功能变体），多肽，或蛋白的核苷酸序列内，并且因此可以不影响其表达。包括所述DNA标签的重组表达载体使得可能将相同的核苷酸序列置于一些不同的细胞群体中，并随后基于它们含有哪种载体区分这些群体。[0069]本发明还提供一种宿主细胞，所述宿主细胞包含本文中描述的任意重组表达载体。本文中使用的术语"宿主细胞"指可以含有本发明的重组表达载体的任意类型的细胞。所述宿主细胞可以是真核细胞，例如植物、动物、真菌或藻类，或可以是原核细胞，例如细菌或原生动物。所述宿主细胞可以是培养的细胞或原代细胞（即，直接分离自生物例如人）。所述宿主细胞可以是贴壁细胞或悬浮细胞（即，在悬浮液中生长的细胞）。合适宿主细胞是本领域中已知的并且包括，例如，DH5a大肠杆菌细胞，中国仓鼠卵巢细胞，猴VER0细胞，COS细胞，HEK293细胞，等。为了扩增或复制所述重组表达载体的目的，所述宿主细胞优选为原核细胞，例如，DH5a细胞。为了生产重组TCR，多肽，或蛋白，所述宿主细胞优选为哺乳动物细胞。最优选地，所述宿主细胞是人细胞。同时所述宿主细胞可以是任意细胞类型，可以源自任意类型组织，并且可以是任意发育阶段的，所述宿主细胞可以是外周血淋巴细胞(PBL)或外周血单核细胞（PBMC)。优选地，所述宿主细胞可以是T细胞。[0070]为了本文中的目的，所述T细胞可以是任意T细胞，诸如培养的T细胞，例如，原代T细胞，或来自培养的T细胞系，例如，Jurkat，SupTl等的T细胞，或获自哺乳动物的T细胞。如果获自哺乳动物，所述T细胞可以获自很多来源，包括但不限于血液、骨髓、淋巴结、胸腺、或其他组织或体液。T细胞还可以是富集的或纯化的。所述T细胞可以是人T细胞。所述T细胞可以是分离自人的T细胞。所述T细胞可以是任意类型的T细胞并且可以是任意发育阶段的，包括但不限于，⑶47⑶8+双阳性T细胞，⑶4+辅助T细胞，例如，Th:和Th2细胞，CD8+T细胞，细胞毒性T细胞，肿瘤浸润淋巴细胞，记忆T细胞，幼稚(naive)1T细胞，等.优选地，所述T细胞可以是⑶8+T细胞或⑶4+T细胞。[0071]本发明还提供的是包含本文中描述的至少一种宿主细胞的细胞群。所述细胞群可以是除了至少一种其它细胞，例如不包含任何重组表达载体的宿主细胞（例如，T细胞），或不同于T细胞的细胞（例如，B细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、红细胞、肝细胞、内皮细胞、上皮细胞、肌肉细胞、脑细胞等）之外的，包含含有描述的任意重组表达载体的宿主细胞的异质群体。备选地，所述细胞群可以基本上是同质群体，其中所述群体主要包含（例如，基本上由包含重组表达载体的宿主细胞组成）包含重组表达载体的宿主细胞。所述群体还可以是克隆细胞群，其中所述群体的所有细胞是包含重组表达载体的单个宿主细胞克隆，从而所述群体的所有细胞包含所述重组表达载体。在本发明的一个实施方案中，所述细胞群是包含含有本文中描述的重组表达载体的宿主细胞的克隆群体。[0072]本发明还提供一种抗体，或其抗原结合部分，所述抗体，或其抗原结合部分特异结合本文中描述的任意TCR的功能部分。优选地，所述功能部分特异结合NY-ESO-1，例如，所述功能部分包含氨基酸序列SEQIDNO:3(a链的⑶Rl)，4(a链的⑶R2)，5(a链的CDR3)，6(0链的CDR1)，7(0链的CDR2)，8(0链的CDR3)，SEQIDNO:9,SEQIDN0:10，或其组合，例如，3-5,6-8,3-8,或9-10。更优选地，所述功能部分包含SEQIDNOs:3-8的氨基酸序列。在优选的实施方案中，所述抗体，或其抗原结合部分结合由所有6个CDRs(a链的⑶R1-3和0链的⑶R1-3)形成的表位。所述抗体可以是本领域中已知的任意类型的免疫球蛋白。例如，所述抗体可以是任意同种型，例如，18八，]^0，]^￡，]^6，]^|/[，等。所述抗体可以是单克隆或多克隆的。所述抗体可以是天然存在的抗体，例如，分离和/或纯化自哺乳动物，例如，小鼠、兔、山羊、马、鸡、仓鼠、人等的抗体。备选地，所述抗体可以是遗传改造的抗体，例如，人源化抗体或嵌合抗体。所述抗体可以是单体或多聚形式。同样，所述抗体可以具有对本发明TCR的功能部分的任意水平的亲和力（affinity)或亲合力（avidity)。理想的是，所述抗体对本发明TCR的功能部分特异，从而存在与其它肽或蛋白最小的交叉反应。[0073]测试抗体结合本发明TCR的任意功能部分的能力的方法是本领域中已知的并且包括任意抗体-抗原结合测定，诸如，例如，放射性免疫测定（RIA)，ELISA，蛋白质印迹，免疫沉淀，和竞争性抑制测定（参见，例如，Janeway等人，在下）。[0074]制备抗体的合适方法是本领域中已知的。例如，标准杂交瘤方法描述于，例如，Kdhler和Milstein，Eur.J.Immunol.，5,511-519(1976)，Harlow和Lane(编辑），Antibodies:ALaboratoryManual，CSHPress(1988)，和C.A.Janeway等人（编辑），Immunobiology，第5版，GarlandPublishing，NewYork，NY(2001))中。备选地，其它方法，诸如H5V-杂交瘤方法（Haskard和Archer，J.Immunol.Methods，74(2)，361-67(1984)，和Roder等人，MethodsEnzymol.，121，140-67(1986))，和菌体载体表达系统（参见，例如，Huse等人，Science，246,1275-81(1989))是本领域中已知的。此外，在非人动物中生产抗体的方法描述于，例如，美国专利5,545,806,5,569,825,和5,714,352中）。[0075]此外噬菌体展示可以用于产生本发明的抗体。关于这一点，可以使用标准分子生物学和重组DNA技术产生编码抗体的抗原结合可变（V)区的噬菌体文库（参见，例如，Sambrook等人（编辑），MolecularCloning，ALaboratoryManual，第3版，ColdSpringHarborLaboratoryPress，NewYork(2001))。针对对所需抗原的特异结合，选择编码具有所需特异性的可变区的噬菌体，并且重建完全或部分抗体，其包含选择的可变结构域。将编码所述重建的抗体的核酸序列引入合适的细胞系，诸如用于杂交瘤产生的骨髓瘤细胞，从而由所述细胞分泌具有单克隆抗体特性的抗体（参见，例如，Janeway等人，在前，Huse等人，在前，和美国专利6,265,150)。[0076]抗体可以由对特定重链和轻链免疫球蛋白基因转基因的转基因小鼠生产。此种方法是本领域中已知的并且描述于，例如美国专利5,545,806和5,569,825,以及Janeway等人，在前中。[0077]用于产生人源化抗体的方法是本领域中公知的并且详细描述于，例如，Janeway等人，在前，美国专利5,225,539,5,585,089和5,693,761，欧洲专利号0239400B1，和英国专利号2188638中。还可以使用描述于美国专利5,639,641和Pedersen等人，J.Mol.Biol.，235,959-973(1994)中的抗体表面重建（resurfacing)技术产生人源化抗体。[0078]本发明还提供本文中描述的任意抗体的抗原结合部分。所述抗原结合部分可以是具有至少一个抗原结合位点的任意部分，诸如Fab，F(ab'）2，dsFv，sFv，双抗体(diabodies)，和三抗体（triabodies)。[0079]可以使用常规重组DNA技术产生单链可变区片段（sFv)抗体片段（其由包含通过合成的肽连接于轻抗体链V结构域的抗体重链可变（V)结构域的截短的Fab片段组成）(参见，例如，Janeway等人，在前）。类似地，二硫化物稳定的可变区片段（dsFv)可以通过重组DNA技术制备（参见，例如，Reiter等人，ProteinEngineering，7,697-704(1994))。然而，本发明的抗体片段不限于这些示例性类型的抗体片段。[0080]同样，所述抗体，或其抗原结合部分，可以被修饰以包含可检测标记，诸如，例如，放射性同位素，荧光团（例如，异硫氰酸荧光素（FITC)，藻红蛋白（PE))，酶（例如，碱性磷酸酶，辣根过氧化物酶），和元素颗粒（例如，金颗粒）。[0081]本发明的TCR，多肽，蛋白，（包括其功能部分和功能变体），核酸，重组表达载体，宿主细胞（包括其群体），和抗体（包括其抗原结合部分），可以是分离的和/或纯化的。本文中使用的术语"分离的"意为已经从其天然环境移出。本文中使用的术语"纯化的"意为纯度已经被增加，其中"纯度"是相对术语，并且不必须被理解为绝对纯度。例如，所述纯度可以是至少约50%，可以大于60%，70%或80%，或可以是100%。[0082]本发明的TCR，多肽，蛋白（包括其功能部分和变体），核酸，重组表达载体，宿主细胞（包括其群体），和抗体（包括其抗原结合部分）（其所有在下文共同被称为"发明的TCR物质"），可以配制为组合物，诸如药物组合物。在这点上，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含TCR，多肽，蛋白，功能部分，功能变体，核酸，表达载体，宿主细胞（包括其群体），和抗体（包括其抗原结合部分），以及药用载体的任一种。本发明的含有任意本发明的TCR物质的药物组合物可以包含多于一种本发明的TCR物质，例如，多肽和核酸，或两种或多种不同TCR。备选地，所述药物组合物可以包含与另一种药学活性剂或药物联合的发明的TCR物质，所述另一种药学活性剂或药物诸如化疗剂，例如，天冬酰胺酶（asparaginase)，白消安（busulfan)，卡钼（carboplatin)，顺钼（cisplatin)，正定霉素（daunorubicin)，阿霉素（doxorubicin)，氟尿喃啶，吉西他滨（gemcitabine)，轻基脲（hydroxyurea)，甲氨蝶呤（methotrexate)，紫杉醇（paclitaxel)，利妥昔单抗(rituximab)，长春喊（vinblastine)，长春新喊（vincristine)等。[0083]优选地，所述载体是药用载体。就药物组合物而言，所述载体可以是常规使用的那些中的任一个并且仅受化学物理考量（诸如溶解性和缺乏与活性化合物的反应性）和受施用途径限制。本文中描述的药用载体，例如，载体（vehicles)，佐剂，赋形剂，和稀释剂，是本领域技术人员公知的并且公众容易获得。优选所述药用载体是对于活性剂是化学惰性的药用载体和在使用条件下不具有有害副作用或毒性的药用载体。[0084]载体的选择将部分由特定的发明的TCR物质，以及由用于施用本发明的TCR物质的特定方法确定。因此，存在多种本发明药物组合物的适当制剂。以下用于肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内和腹膜内施用的制剂是示例性的并不以任何方式限制。多于一种途径可以用于施用本发明的TCR物质，并且在某些情况下，特定途径可以比另一种途径提供更直接和更有效的应答。[0085]适于肠胃外施用的制剂包括水性的和非水性的，等渗无菌注射液（所述注射液可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使所述制剂与意在的接受者的血液等渗的溶质），和水性的和非水性无菌悬浮液（所述悬浮液可以包括悬浮剂、稳定剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂）。本发明的TCR物质可以以药学载体中的生理学可接受的稀释剂施用，诸如无菌液体或液体混合物，包括水，盐水，含水葡萄糖和相关糖溶液，醇诸如乙醇或十六醇，二醇诸如丙二醇或聚乙二醇，二甲基亚砜，甘油，羧酮诸如2,2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲醇，醚，聚(乙二醇）400,油，脂肪酸，脂肪酸酯或甘油酯，或加或不加药用表面活性剂（诸如皂或去污剂）的乙酰化的脂肪酸甘油酯，悬浮剂，诸如果胶，卡波姆，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，或羧甲基纤维素，或乳化剂和其它药学佐剂。[0086]可以用于肠胃外制剂的油包括石油，动物、植物或合成的油。油的特定实例包括花生，大豆，芝麻，棉籽，玉米，橄榄，凡士林，和矿物油。用于肠胃外制剂的合适的脂肪酸包括油酸、硬脂酸和异硬脂酸。油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯是合适的脂肪酸酯的实例。[0087]用于肠胃外制剂的合适的皂包括脂肪碱金属，铵，和三乙醇胺盐，并且合适的去污剂包括（a)阳离子去污剂诸如，例如，二甲基二烷基卤化铵，和卤化烷基吡啶，（b)阴离子去污剂诸如，例如，烷基、芳基、和烯烃磺酸醋，烷基、烯烃、醚、和单酸甘油脂硫酸醋，和磺基琥珀酸酯，（c)非离子去污剂诸如，例如，脂肪胺氧化物，脂肪酸烷醇酰胺，和聚氧乙烯聚丙烯共聚物，（d)两性去污剂诸如，例如，烷基-0-氨基丙酸酯，和2-烷基-咪唑啉季铵盐，和(e)其混合物。[0088]所述肠胃外制剂将典型地在溶液中含有以重量计约0.5%至约25%的本发明的TCR物质。可以使用防腐剂和缓冲剂。为了最小化或排除在注射位点的刺激作用，此种组合物可以含有一种以上具有从约12至约17的亲水亲油平衡（HLB)的非离子型表面活性剂。此种制剂中表面活性剂的量将典型地范围以重量计从约5%至约15%。合适表面活性剂包括聚乙二醇山梨聚糖脂肪酸酯，诸如山梨聚糖单油酸酯和通过环氧丙烷与丙二醇的缩合形成的环氧乙烷与疏水性基质的高分子量加成物。所述肠胃外制剂可以以单位剂量或多剂量密封的容器，诸如安瓿瓶或小瓶提供，并且可以储存在冷冻干燥的（冻干的）条件，在使用前仅需要直接加入用于注射的无菌液体赋形剂，例如水。可以从之前描述的类型的无菌粉末、颗粒、和片剂制备临时的注射溶液和悬浮液。[0089]可注射制剂依照本发明。对用于可注射组合物的有效药学载体的需求是本领域普通技术人员公知的（参见，例如，PharmaceuticsandPharmacyPractice，J.B.LippincottCompany，Philadelphia，PA，Banker和Chalmers，编辑，第238-250页（1982)，和ASHPHandbookonInjectableDrugs，Toissel，第4版，第622-630页（1986))。优选地，当施用细胞，例如，树突细胞时，所述细胞通过注射施用。[0090]本领域技术人员将理解，除了上文描述的药物组合物之外，本发明的TCR物质可以被配制为包涵复合体，诸如环糊精包涵复合体，或脂质体。[0091]为了本发明，施用的本发明的TCR物质的量或剂量应该足以在受试者或动物内在合理的时间范围内实现，例如，治疗或预防应答。例如，本发明的TCR物质的剂量应该从施用时间开始约2小时或更长，例如，12至24或更多小时的时期内足以结合NY-ES0-1，或检测、治疗或预防癌症。在某些实施方案中，所述时期甚至可以更长。所述剂量将由特定的发明的TCR物质的效力和动物（例如人）的状况，以及要治疗的动物（例如人）的体重决定。[0092]很多用于确定施用剂量的测定是本领域中已知的。为了本发明，包括在给一组各自给予不同剂量的所述T细胞的哺乳动物中的哺乳动物施用给定剂量的此种T细胞时，比较靶细胞被溶解或IFN-Y由表达本发明的TCR，多肽，或蛋白的T细胞分泌的程度的测定可以用于确定要施用于哺乳动物的起始剂量。在施用某剂量时靶细胞被溶解或IFN-y分泌的程度可以通过本领域中已知的方法（包括例如本文中实施例3所描述的方法）测定。[0093]本发明的TCR物质的剂量也将由可能伴随特定的发明的TCR物质的施用的任何不良副作用的存在、性质和程度确定。典型地，主治医师将考虑多种因素，诸如年龄、体重、一般健康状况、饮食、性别、要施用的发明的TCR物质、施用途径，以及治疗的疾病的严重度，从而决定用以治疗各个个体患者的本发明的TCR物质剂量。通过实例的方式但不意在限制本发明，本发明的TCR物质的剂量可以为约0.001至约1000mg/kg治疗的受试者的体重/天，从约〇?01至约l〇mg/kg体重/天，约0?Olmg至约lmg/kg体重/天。[0094]本领域普通技术人员将容易理解，本发明的TCR物质可以以很多方式修饰，从而本发明的TCR物质治疗或预防效力通过所述修饰被增加。例如，本发明的TCR物质可以通过桥直接或间接缀合于靶向部分。将化合物（例如，发明的TCR物质）缀合于靶向部分的实践是本领域中已知的。参见，例如，Wadwa等人，J.DrugTargeting3:111(1995)和美国专利5,087,616。本文中使用的术语"靶向部分"，指特异识别和结合细胞表面受体，从而所述靶向部分指导本发明的TCR物质递送至细胞群（受体在其表面表达）的任意分子或化学剂。靶向部分包括，但不限于，抗体，或其片段，肽，激素，生长因子，细胞因子，和任何其它天然或非天然配体，其结合细胞表面受体（例如，上皮生长因子受体（EGFR)，T-细胞受体（TCR)，B-细胞受体（BCR)，CD28,血小板源性生长因子受体（PDGF)，烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)，等）。本文中使用的术语"桥"，指将本发明的TCR物质桥接于靶向部分的任意化学剂或分子。本领域普通技术人员认可，如果桥和/或靶向部分在连接于本发明的TCR物质时，不干扰本发明的TCR物质的功能（即结合NY-ES0-1，或检测，治疗，或预防癌症的能力），本发明的TCR物质上对于本发明的TCR物质的功能不必需的位点，是用于连接桥和/或靶向部分的理想位点。[0095]备选地，本发明的TCR物质可以被修饰为储存形式，从而本发明的TCR物质释放于其所施用的体内的方式随在体内的时间和位置而受控制（参见，例如，美国专利4,450,150)。发明的TCR物质的储存形式可以是，例如，包含本发明的TCR物质和多孔或无孔材料（诸如聚合物）的可植入组合物，其中本发明的TCR物质由所述材料和/或无孔材料的降解包裹或通过所述材料和/或无孔材料的降解扩散。随后将储存物植入体内所需位置并且本发明的TCR物质以预定速率从植入物释放。[0096]考虑的是，本发明的药物组合物，TCR(包括其功能部分或变体），多肽，蛋白，核酸，重组表达载体，宿主细胞，或细胞群可以用于治疗或预防癌症的方法。不受限于特定理论或机制，相信本发明的TCR特异结合NY-ESO-1，从而TCR(或相关的发明的多肽或蛋白，或其功能部分或变体）当由细胞表达时，能够介导针对表达NY-ESO-1的细胞的免疫应答。在这点上，本发明提供治疗或预防哺乳动物中癌症的方法，所述方法包括以有效治疗或预防哺乳动物中癌症的量向哺乳动物施用本文中描述的任意TCR，多肽，或蛋白，包含编码本文中描述的任意TCR，多肽，蛋白的核苷酸序列的任意核酸或重组表达载体，或包含编码本文中描述的任意TCR，多肽，或蛋白的重组载体的任意宿主细胞或细胞群。[0097]本文中使用的术语"治疗"和"预防"以及源于其的词，不必需表示100%或完全治疗或预防。而是，存在不同程度的治疗或预防，其中本领域技术人员认可为具有潜在的益处或疗效。在这方面，本发明的方法可以提供对哺乳动物中癌症任意量的任意水平的治疗或预防。此外，本发明的方法提供的治疗或预防可以包括治疗或预防正在治疗或预防的疾病例如癌症中的一种以上病状或症状。同样，为了本文中的目的，"预防"可以包括延迟疾病、或其症状或病状的发作。[0098]还提供的是检测哺乳动物中癌症存在的方法。所述方法包括（i)包含癌细胞的样品与本文中描述的任意本发明的TCR，多肽，蛋白，核酸，重组表达载体，宿主细胞，细胞群，或抗体、或其抗原结合部分接触，从而形成复合体，并且检测所述复合体，其中复合体的检出表示哺乳动物存在癌症。[0099]就本发明检测哺乳动物中癌症的方法而言，癌细胞样品可以是包含全细胞，其溶解产物，或全细胞溶解产物的级分，例如，核或胞质级分，全蛋白级分，或核酸级分的样品。[0100]为了本发明的检测方法，就哺乳动物而言，接触可以在体外或在体内发生。优选地，所述接触是在体外的。[0101]同样，复合体的检出可以通过很多本领域中已知的方式发生。例如，本文中描述的本发明的TCR，多肽，蛋白，核酸，重组表达载体，宿主细胞，细胞群，或抗体、或其抗原结合部分，可以标记以可检测标记诸如，例如，放射性同位素，荧光团（例如，异硫氰酸荧光素(FITC)，藻红蛋白（PE))，酶（例如，碱性磷酸酶，辣根过氧化物酶），和元素颗粒（例如，金颗粒）。[0102]为了本发明的方法（其中施用宿主细胞或细胞群），所述细胞可以是与哺乳动物同种异体的或自体同源的细胞。优选地，所述细胞是与哺乳动物自体同源的。[0103]就本发明的方法而言，所述癌症可以是任意癌症，包括下述的任何一种：急性淋巴细胞癌，急性骨髓性白血病，腺泡状横纹肌肉瘤（alveolarrhabdomyosarcoma)，骨癌，脑癌，乳腺癌，肛门、肛管、或肛门直肠部癌症，眼癌，肝内胆管癌，关节癌，颈部、胆囊、或胸膜癌症，鼻、鼻腔、或中耳癌症，口腔癌，外阴癌，慢性淋巴细胞白血病，慢性骨髓癌，结肠癌，食管癌，宫颈癌，胃肠道类癌瘤（gastrointestinalcarcinoidtumor)，霍奇金淋巴瘤（Hodgkinlymphoma)，下咽癌，肾癌，喉癌，肝癌，肺癌，恶性间皮瘤（malignantmesothelioma)，黑素瘤，多发性骨髓瘤（multiplemyeloma)，鼻咽癌，非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma)，卵巢癌，胰腺癌，腹膜、网膜和肠系膜癌，咽癌，前列腺癌，直肠癌，肾癌（例如，肾细胞癌（RCC))，小肠癌，软组织癌，胃癌，滑膜细胞肉瘤，睾丸癌，甲状腺癌，输尿管癌，和膀胱癌。优选地，所述癌症是黑素瘤，乳腺癌，肺癌，前列腺癌，甲状腺癌，卵巢癌，或滑膜细胞肉瘤。[0104]本发明的方法中涉及的哺乳动物可以是任意哺乳动物。本文中使用的，术语"哺乳动物"指任意哺乳动物，包括，但不限于，啮齿目的哺乳动物诸如小鼠和仓鼠，和兔形目的哺乳动物诸如兔。优选所述哺乳动物来自食肉目，包括猫科动物（猫）和犬科动物（狗）。更优选所述哺乳动物来自偶蹄目，包括牛科动物（牛）和猪科动物（猪）或奇蹄目，包括马科动物（马）。最优选所述哺乳动物为灵长目，新世界猴（Ceboids)，或Simoids(猴）或类人目的（人和猿）。特别优选的哺乳动物是人。实施例[0105]以下实施例进一步说明本发明，但当然应该不被认为以任何方式限制其范围。[0106]细胞系[0107]黑素瘤系1300mel(NY-ES0-l+，HLA-A2+)，624.38mel(NY-ES0-l+，HLA-A2+)，A375mel(NY-ES0-1+，HLA-A2+)，938mel(NY-ES0-1+，HLA-A2_)，888mel(NY-ES0-1_，HLA-A2_)，SK23mel(NY-ESO-1-，HLA-A2+)，1359mel(NY-ES0-1+，HLA-A2-)，1359-A2mel(NY-ES0-1+，HLA-A2+)，624mel(NY-ES0-1+，HLA-A2+)，和1390mel(NY-ES0-1+，HLA-A2+)，从切除的肿瘤病变产生并培养于由补充以10%胎牛血清的1?^11640,2臟〇1/11-谷氨酰胺，50单位/1^青霉素，和50yg/mL(Invitrogen)和25mmol/LHEPES(GIBCO，Invitrogen)组成的R10培养基。使用的其它细胞系包括：宫颈癌细胞系0&81^(附450-1+，111^42+)，的(1：〇^-1550)骨肉瘤细胞系Saos2(NY-ES0-l+，HLA-A2+)，（ATCCHTB-85)，和成神经细胞瘤细胞系SKNAS-A2(NY-ES0-1+，HLA-A2+)，（ATCCCRL-2137)，非小细胞肺癌细胞系H1299A2(NY-ES0-1+，HLA-A2+)，乳腺癌细胞系MDA-MB-435S-A2(NY-ES0-1+，HLA-A2+)，（ATCC:KHTB-129)，其所有三种都转导有逆转录病毒构建体以表达HLA-A*0201(Navuaux等人，J.Virol.，70:5701-05(1996)，Parkhurst等人，Clin.CancerRes.，15:169-180(2009)，Robbins等人，J.Immunol.，180:6116-31(2008)，Wargo等人，CancerImmunol.Immunother.，58:394(2009))，C0S-A2-ES0(其用表达NY-ESO-1基因的逆转录病毒载体转导），和C0S-A2-CEA(其用表达CEA基因的逆转录病毒载体转导）。[0108]实施例1[0109]该实施例说明鼠抗-NY-ES0-1T细胞克隆的鉴定。[0110]将HLA-A2转基因小鼠用100y1不完全弗氏佐剂（IFA)中的100yg的肽(NY-ES0-1157_165)和120yg的辅助肽（乙型肝炎病毒核心肽（HBVc):128-140)在尾根部皮下（s.c)免疫（在尾的两侧各50yg附-￡5〇-1157_165肽），接着在一周后以相同的免疫加强。[0111]第〇天：第二次免疫后一周，收获脾细胞并且在体外以以下之一刺激：（i)用1yg/ml引发（priming)肽和10yg/ml人|32-微球蛋白（microgobulin)脉冲的LPS-活化的HLA-A2+脾细胞（3,OOOrads)("LPS冲击（blast)"）或（ii)用1，0.1或0?01yg/ml肽脉冲的T2细胞（17,OOOrads)。[0112]第7天：通过在与表1中列出的肿瘤细胞系之一共培养时的IFNy分泌评价主体(bulk)培养物的特定反应性。结果显示于表1(1次主体（bulk)刺激后的IFN-y(pg/ml);"nt"=未测试）。因为响应加载以HBV肽的T2细胞的细胞因子释放有时非常高，对于肿瘤靶标的下划线值表示以单独培养基和阴性肿瘤获得的背景值的两倍，并且对于肽的下划线值表示以T2和HBV肽获得的背景值的两倍。[0113]表1【权利要求】1.一种分离的或纯化的T-细胞受体（TCR)，所述T-细胞受体具有对NY-ESO-1(SEQIDNO:1)的抗原特异性并且包含鼠可变区。2.根据权利要求1所述的分离的或纯化的TCR，其中所述TCR具有对NY-ES0-1157_165(SEQIDN0:2)的抗原特异性。3.根据权利要求1或2所述的分离的或纯化的TCR，所述TCR包含SEQIDNOs:3-8的氨基酸序列。4.根据权利要求1-3任一项所述的分离的或纯化的TCR，所述TCR包含SEQIDNOs:9和10的氨基酸序列。5.根据权利要求1-4任一项所述的分离的或纯化的TCR，所述TCR包含SEQIDNOs:11和12的氨基酸序列。6.-种分离的或纯化的多肽，所述多肽包含权利要求1-5任一项所述的TCR的功能部分，其中所述功能部分包含SEQIDNOs:3-8的氨基酸序列。7.-种分离的或纯化的多肽，所述多肽包含权利要求1-5任一项所述的TCR的功能部分，其中所述部分包含SEQIDNO:9或10的氨基酸序列，或SEQIDNOs:9和10二者。8.-种分离的或纯化的多肽，所述多肽包含权利要求1-5任一项所述的TCR的功能部分，其中所述部分包含SEQIDNO:11或12的氨基酸序列，或SEQIDNOs:11和12二者。9.一种分离的或纯化的蛋白，所述蛋白包含至少一种权利要求6-8任一项所述的多肽。10.根据权利要求9所述的分离的或纯化的蛋白，所述蛋白包含含有氨基酸序列SEQIDNOs:3-5的第一多肽链和包含有氨基酸序列SEQIDNOs:6-8的第二多肽链。11.根据权利要求9或10所述的分离的或纯化的蛋白，所述蛋白包含含有氨基酸序列SEQIDNO:9的第一多肽链和含有氨基酸序列SEQIDNO:10的第二多肽链。12.根据权利要求9-11任一项所述的分离的或纯化的蛋白，所述蛋白包含含有氨基酸序列SEQIDNO:11的第一多肽链和含有氨基酸序列SEQIDNO:12的第二多肽链。13.权利要求9-12任一项所述的分离的或纯化的蛋白，其中所述蛋白是融合蛋白。14.权利要求9-13任一项所述的分离的或纯化的蛋白，其中所述蛋白是重组抗体。15.-种分离的或纯化的核酸，所述核酸包含编码根据权利要求1-5任一项所述的TCR，根据权利要求6-8任一项所述的多肽，或根据权利要求9-14任一项所述的蛋白的核苷酸序列。16.根据权利要求15所述的分离的或纯化的核酸，其中所述核苷酸序列是密码子优化的。17.根据权利要求15或16所述的分离的或纯化的核酸，其中所述核苷酸序列包含SEQIDN0:15，SEQIDN0:16，SEQIDN0:19，SEQIDN0:20，SEQIDN0s:15和16二者，或SEQIDNOs:19和20二者。18.-种重组表达载体，所述重组表达载体包含根据权利要求15-17任一项所述的核酸。19.根据权利要求18所述的重组表达载体，其中所述核苷酸序列包含编码互补决定区(⑶R)1a，⑶R2a，⑶R3a，⑶R10，⑶R20，和⑶R30的核苷酸序列，并且编码⑶R1a，⑶R2a，和⑶R3a的核苷酸序列在编码⑶R10，⑶R20，和⑶R30的核苷酸序列的5'侧。20.根据权利要求18所述的重组表达载体，其中所述核苷酸序列包含编码⑶R1a，CDR2a，CDR3a，CDR10，CDR20，和CDR30的核苷酸序列，并且编码CDR1a，CDR2a，和⑶R3a的核苷酸序列在编码⑶R10，⑶R20，和⑶R30的核苷酸序列的3M则。21.根据权利要求19所述的重组表达载体，所述重组表达载体包含SEQIDNO:17。22.根据权利要求20所述的重组表达载体，所述重组表达载体包含SEQIDNO:18。23.-种分离的宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求18-22任一项所述的重组表达载体。24.根据权利要求23所述的宿主细胞，其中所述细胞是人的。25.-种细胞群，所述细胞群包含至少一种权利要求23或24所述的宿主细胞。26.-种抗体，或其抗原结合部分，所述抗体，或其抗原结合部分特异结合根据权利要求1-5任一项所述的TCR的功能部分，其中所述功能部分包含SEQIDN0s:3-8的氨基酸序列。27.-种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-5任一项所述的TCR，根据权利要求6-8任一项所述的多肽，根据权利要求9-14任一项所述的蛋白，权利要求15-17所述的核酸，权利要求18-22任一项所述的重组表达载体，权利要求23或24所述的宿主细胞，权利要求25所述的细胞群，或权利要求26所述的抗体，或其抗原结合部分，和药用载体。28.-种检测哺乳动物中癌症存在的方法，所述方法包括：(a)将包含来自哺乳动物的一种或多种细胞的样品与根据权利要求1-5任一项所述的TCR，根据权利要求6-8任一项所述的多肽，根据权利要求9-14任一项所述的蛋白，权利要求15-17所述的核酸，权利要求18-22任一项所述的重组表达载体，权利要求23或24所述的宿主细胞，权利要求25所述的细胞群，权利要求26所述的抗体，或其抗原结合部分，或权利要求27所述的药物组合物接触，从而形成复合体，和(b)检测所述复合体，其中复合体的检出表明哺乳动物中癌症的存在。29.权利要求28所述的方法，其中所述癌症是黑素瘤，乳腺癌，肺癌，前列腺癌，甲状腺癌，卵巢癌，或滑膜细胞肉瘤。30.根据权利要求1-5任一项所述的TCR，根据权利要求6-8任一项所述的多肽，根据权利要求9-14任一项所述的蛋白，权利要求15-17所述的核酸，权利要求18-22任一项所述的重组表达载体，权利要求23或24所述的宿主细胞，权利要求25所述的细胞群，权利要求26所述的抗体，或其抗原结合部分，或权利要求27所述的药物组合物，其用于治疗或预防哺乳动物中的癌症。31.权利要求30所述的TCR，多肽，蛋白，核酸，重组表达载体，宿主细胞，细胞群，抗体，或其抗原结合部分，或药物组合物，其中所述癌症是黑素瘤，乳腺癌，肺癌，前列腺癌，甲状腺癌，卵巢癌，或滑膜细胞肉瘤。32.根据权利要求1-5任一项所述的TCR，根据权利要求6-8任一项所述的多肽，根据权利要求9-14任一项所述的蛋白，权利要求15-17所述的核酸，权利要求18-22任一项所述的重组表达载体，权利要求23或24所述的宿主细胞，权利要求25所述的细胞群，权利要求26所述的抗体，或其抗原结合部分，或权利要求27所述的药物组合物在制造用于治疗或预防哺乳动物癌症的药物中的用途。33.根据权利要求32所述的用途，其中所述癌症是黑素瘤，乳腺癌，肺癌，前列腺癌，甲状腺癌，卵巢癌，或滑膜细胞肉瘤。【文档编号】C07K14/705GK104507963SQ201380038884【公开日】2015年4月8日申请日期:2013年5月22日优先权日:2012年5月22日【发明者】玛丽亚·R·帕克赫斯特,理查德·A·摩根,史蒂文·A·罗森堡,香农·费丝·罗萨蒂申请人:美国卫生和人力服务部