麻疯树△9脂肪酸脱氢酶及其编码基因、重组表达载体、宿主细胞与应用的制作方法

专利名称：：麻疯树△9脂肪酸脱氢酶及其编码基因、重组表达载体、宿主细胞与应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于生物
技术领域：
和遗传工程领域，具体涉及麻疯树(Jat.rophacurcas)的A9脂肪酸脱氢酶及其编码基因、重组载体与应用。
背景技术：
：麻疯树(Jat.rophacurcas)又名小桐子，为大戟科(Euphorbiaceae)麻疯树属(Jatropha)，广泛生长在亚洲、非洲和拉丁美洲等国家和地区。麻疯树是一种多用途的含油灌木植物，除作绿篱栽植外，其有效成分可以用于土壤和水资源防护、抗艾滋、杀菌剂生产、生物柴油、肥皂和蜡烛生产等。麻疯树的最大价值在于其种子油可以作为生物柴油。研究显示麻疯树的种子含油量高达5060%，每公顷产油可达2700公斤左右。因此，麻疯树也成为当前生产生物柴油的最具开发价值和应用前景的作物之一。印度、东南亚以及我国等多个国家和地区已经将麻疯树生产生物柴油列为生物能源开发的重点领域。研究麻疯树的脂肪酸合成和调控基因，可为进一步进行基因工程改造、获得高产油的优良品种奠定基础，具有重要意义。油酸(C18:l)和亚油酸(C18:2)等不饱和脂肪酸是麻疯树种子油的主要组分，其含量分别占种子油总量的50%和30%左右。脂肪酸脱氢酶(脂肪酸去饱和酶)可以将脂肪酸链上的C-C单键转化为C=C双键，产生不饱和脂肪酸。脂肪酸去饱和酶分为三类酰基辅酶A去饱和酶(acyl-CoAdesat.urase)、酰基-酰基载体蛋白去饱和酶(acyl-ACPdesaturase)禾口酉先基月旨肪去饱禾口酶(acyl-lipliddesaturase)(Murat.aN，WadaH，BiochemJ,1995.300:卜8)。在植物和蓝绿藻中，大部分去饱和反应由酰基脂肪去饱和酶完成，其将双键引入到以酯形式存在的脂肪酸中。在植物细胞的质体中存在酰基-酰基载体蛋白去饱和酶，可以将双键引入到与酰基载体蛋白结合的脂肪酸中。在动物、酵母、霉菌中广泛存在酰基辅酶A去饱和酶可将双键引入到与CoA结合的脂肪酸中。目前只有植物的酰基酰基载体蛋白去饱和酶是唯一可知的可溶性去饱和酶家族,它包括△9-硬脂酰ACP脱氢酶、A4-软脂酰ACP脱氢酶、A6-软脂酰ACP脱氢酶等。对脂肪酸ACP脱氢酶的晶体分析表明，此类酶可形成一个双铁活性中心，两个铁原子的结合高度对称，其中1个铁原子和E105和H146的侧链作用；另一个与E105和H146的侧链作用。在晶体结构中，从酶表面到内部有一个深的空穴，该空穴为脂肪酰的结合位(GaboonEB.,JBoilChem，1994.269:27519-526)。硬脂酸(C18:0)去饱和产生油酸，一般认为该反应由A9-硬脂酰ACP脱氢酶在质体的基质中催化完成，然后以脂形式存在的油酸被转运到类囊体膜或进入细胞质中进一步去饱和。研究表明，硬脂酸A9脂肪酸脱氢酶广泛存在于油籽植物中，其表达受到生长环境中营养物和其他环境因素的影响(V.M.McDonough,J.E.Stukey,etal.JBoilChera.1992.267:5931-5936)。由于A9脂肪酸脱氢酶是第一个向脂肪酸引入双键的酶，其决定了生物体中饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸含量比，在不饱和脂肪酸的合成中起了关键作用。目前，已有多种动物、植物、微生物等不同来源的脂肪酸脱氢酶基因的同源序列被分离获得，并证明具有相应的生物学功能。研究A9脂肪酸脱氢酶的表达、生理功能和应用是当前的热点之一。
发明内容本发明所要解决的技术问题是,提供一种编码麻疯树A9脂肪酸脱氢酶及其编码基因、重组载体、宿主细胞与应用，以提高相应不饱和脂肪酸产量。为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案第一方面，本发明提供一种编码麻疯树A9脂肪酸脱氢酶的基因，所述基因具有下列任意一种核苷酸序列a)SEQIDNO.:1所示的核苷酸序列；b)由于遗传密码的简并性，不同于SEQIDNO.:1但编码的氨基酸序列与SEQIDNO.:l所编码的氨基酸序列相同的核苷酸序列；c)在严格杂交条件下与上述a)或b)中的核苷酸序列杂交，并且编码具有活性的A9脂肪酸脱氢酶的核苷酸序列。在本发明的一个实施例中，上述编码A9脂肪酸脱氢酶的基因具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。第二方面，本发明还提供一种麻疯树A9脂肪酸脱氢酶，其具有选自于下列d)、e)或f)的氨基酸序列d)权利要求1所述的核苷酸序列编码的氨基酸序列；e)SEQIDNO.:2所示的氨基酸序列；f)上述e)中缺失、替换或插入一个或多个氨基酸后的氨基酸序列，并且具有该氨基酸序列的蛋白质具有A9脂肪酸脱氢酶的活性。在本发明的一个实施例中，上述A9脂肪酸脱氢酶具有SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。第三方面，本发明还提供一种表达麻疯树A9脂肪酸脱氢酶的重组表达载体，所述重组表达载体至少包括上述第一方面或第二方面所述的基因。在本发明的一个实施例中，所述重组表达载体为pYES2/CT/Jc△9。第四方面，本发明还提供一种产生A9脂肪酸脱氢酶的基因工程宿主细胞，该宿主细胞选自如下宿主细胞之--a)上述第一方面所述的核苷酸转化或转导的宿主细胞；b)用上述第三方面所述的重组表达载体转化或转导的宿主细胞。进一步地,该宿主细胞是真核生物，例如细菌细胞、或真菌细胞、或植物细胞、或动物细胞，或这些宿主细胞的后代。在本发明的-个实施例中，该宿主细胞为酿酒酵母细胞。第五方面,本发明还提供上述任一项在生产不饱和脂肪酸中的应用。包括利用含有上述核苷酸序列、或上述核苷酸序列与异源调节序列连接的重组载体转化或转导的真核生物宿主及其后代，在提高相应不饱和脂肪酸产量方面的应用。以及将其应用于生产人类食品、动物资料、化妆品或药品用途。针对以上内容，应当指出的是,上述提到的术语"严格条件"在本申请中的含义是指在该条件下形成了所谓特异杂交而没有形成非特异的杂交。例如，该严格条件可以是，相互之间的同源性不小于70%的DNA之间可以杂交而低于上述数值的DNA之间不能杂交，优选的是同源性不少于90%的DNA之间可以杂交。所属
技术领域：
的技术人员应该知道，本发明的编码A9脂肪酸脱氢酶的DNA序列，还包括编码对SEQIDN0:1所示核苷酸序列所表达的酶分子的氨基酸序列进行--个或多个氨基酸替换、插入或缺失并仍具有该酶活性的蛋白质的核苷酸序列。另外，对本发明的A9脂肪酸脱氢酶基因所表达的酶分子的氨基酸进行一个或多个氨基酸替换、插入或缺失所得到的蛋白质也能达到本发明的目的。因而本发明还包括与SEQID冊2所示的氨基酸序列具有至少70%的同源性，优选具有至少90%的同源性，但同时具有A9脂肪酸脱氢酶活性的蛋白质。上面使用的术语"多个"可以是小于100的数目，优选为小于10的数目。本发明的有益效果如下利用本发明含有上述核苷酸序列、或上述核苷酸序列与异源调节序列连接的重组载体转化或转导的宿主细胞及其后代细胞，可以在制造不饱和脂肪酸时，可使不饱和脂肪酸产量得到显著提升。同时，本发明涉及的麻疯树A9脂肪酸脱氢酶对于进一步改良品种和在其它物种中应用都具有重要的应用价值。图1为本发明实施例中的麻疯树A9脂肪酸脱氢酶基因重组载体pYES2/CT/JcA9的构建模式图。图2为本发明实施例中的麻疯树A9脂肪酸脱氢酶在酿酒酵母中表达的免疫印迹(westernblotting)图。图3为本发明的含有麻疯树A9脂肪酸脱氢酶重组载体pYES2/CT/JcA9的宿主细胞与含有表达载体pYES2/CT的宿主细胞的不饱和脂肪酸组分的气相色谱对比图。具体实施例方式下面通过具体实施例并参照附图对本发明进行更详细的说明。应该理解的是，以下所述的实施例仅是用于说明而不是限制本发明。实施例一麻疯树A9脂肪酸脱氢酶基因序列的获得1.cDNA文库构建选取处于不同生长阶段的麻疯树组织和器官果皮、胚乳、花瓣、叶片、根等，放入液氮中冰冻，然后放入80°C超低温冰箱中保存备用。使用CTAB法提取组织总RNA，具体实施1)65。C水浴中预热15mlCTAB提取液；2)液氮中研磨2-3克麻疯树冷冻组织；3)转移样品至有CTAB提取液的离心管中，立即激烈涡旋30s，然后65t:水浴4-5min;4)加入等体积的氯仿/异戊醇，涡旋混合，10000rpm常温离心15min;5)将上清转移至一新的离心管中，重复抽提一次；6)将上清转移至一新的离心管中，加入LiCl(8mo:[/L)，终浓度为2niol/L，即加入1/3体积的LiCl，4。C沉淀过夜；7)4。C全速离心lh，弃上清，用500ii170%乙醇洗沉淀，然后用500ii1100%乙醇洗沉淀；8)用500u1SSTE溶解沉淀，转移至1.5mL离心管中，加入等体积的氯仿/异戊醇抽提一次；9)加入2倍体积的无水乙醇，在-7(TC沉淀30min或-2(TC沉淀2h;10)4"C全速离心20min，沉淀RNA;11)先用400ii170%乙醇洗沉淀，然后用400u1100%乙醇洗沉淀，吹干后用100u1的DEPC水溶解RNA;12)用DNase处理提取的RNA，-2(TC保存备用。混合等量的来自麻疯树种子和花的mRNA,采用Invitrogen公司的Cloneminerd麓libraryconstruction试剂盒(包含SuperscriptII禾口Gateway技术)，构建全长cDNA文库。通过基因组DNA饱和杂交的原理,将cDNA文库中高丰度的序列拷贝数减少10-100倍，获得均一化的全长cDNA文库。2.EST测序和目的基因序列的获得通过对构建的均一化全长cDNA文库利用引物M13F(5'-GTAAAACGACGGCCAG-3')进行5'端随机测序，共获得10，000个EST序列。生物信息学序列分析表明，在获得的麻疯树EST序列中存在可能的A9脂肪酸脱氢酶基因。对上述包含可能的A9脂肪酸脱氢酶基因的质粒利用引物M13R(5'-CAGGAAACAGCTACAC-3，)进行3，端反向测序。采用StadenPackage软件对可能的A9脂肪酸脱氢酶基因的5'端和3'端两条序列进行拼接，获得了该基因的全长序列，其核酸序列如SEQIDN0:1所示。3.序列分析表明目的基因编码蛋白具有A9脂肪酸脱氢酶功能对上述获得基因的序列分析表明，其编码397个氨基酸残基(氨基酸序列如SEQIDNO:2所示)，其中在氨基酸残基140-270的区域内，存在A9脂肪酸脱氢酶的双铁中心保守结构域。并且，GenbankBlastp(http:〃blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)蛋白数据库搜索显示，其编码的氨基酸序列同蓖麻的A9硬脂酰ACP脂肪酸脱氢酶的氨基酸序列(accessionnumber:M59857.1)相似度较高，相似性达97%，相同性为96%。这表明该基因为麻疯树A9脂肪酸脱氢酶基因。Predotar软件(http:Z/urgi.Versailles,inra.fr/predotar/predotar.html)分析显示其编码的A9脂肪酸脱氢酶可能定位于麻疯树细胞的质体内。S0SUI软件(http:〃bp.丽p.nagoya-u.ac.jp/sosui/)分析显示其编码的A9月旨肪酸脱氢酶不具有膜蛋白特征，是一个可溶性的蛋白。实施例二酉良酒'酵母重会目表汰-载体的:构建及转化1.表达载体及宿主细胞简介实验所用酿酒酵母表达载体为pYES2/CT(来自Invitrogen公司)，长度5,963bp(见图1)。pYES2/CT带有GALl启动子,该启动子为诱导型，在葡萄糖存在时转录受到抑制，除去葡萄糖加入半乳糖则可以诱导转录；该载体具有8-9个单克隆位点和2个BstX克隆位点；具有CYC1转录终止信号；具有pUC复制起始子，能够在大肠杆菌中保存和复制；具有氨苄选择抗性，用于筛选大肠杆菌转化子；具有UM3基因，用于在缺乏尿嘧啶的最小培养基(SC-U)中筛选酵母转化子。与以往的pYES2表达载体相比，pYES2/CT最大的特色在于其具有羧基末端标签，可表达多肽-V5抗原决定簇和6XHis氨基酸短肽，用于重组蛋白的检测和纯化。实验所用宿主细胞为INVScl酿酒酵母(来自Invitrogen公司)，其基因型为his3A1/his3A1，leu2/leu2，trpl-289/trpl-289,ura3-52/ura3-52;表型为::His—,Leu—，Trp—，Ura—。此外，INVScl宿主细胞可以在棉子糖作为碳源的培养基中生长，棉子糖既不诱导也不抑制克隆基因的转录，在其存在的情况下向培养基中加入半乳糖同样可以诱导转录，而且诱导的速度比开始以葡萄糖为碳源培养的细胞快。2.麻疯树A9脂肪酸脱氢酶表达载体的构建及阳性克隆筛选分析麻疯树A9脂肪酸脱氢酶基因序列的限制性酶切图谱，同时参照表达载体的多克隆酶切位点设计特异引物如下JcA9—F(Primer—up):5，CCCAAGCTTACCATGGCTCTCAAGCTCAATCCT—3'JcA9_R(Primer_down):5，-CCGGAATTCCAGCTTCACTTCTCTATCAAA-3，其中正向引物包含有Hindi11酶切位点，反向引物包含有EcoRI酶切位点。克隆步骤1)以全长cDNA文库的全部质粒作为模板进行PCR反应，并获得PCR产物；2)回收PCR产物，将其与pYES2/CT同时用Hindi]:I和EcoRI:双酶切；3)回收酶切产物，连接PCR产物和pYES2/CT载体，转化进大肠杆菌宿主细胞；4)挑选单克隆细胞，提取质粒；5)采用PCR和双酶切方法初步鉴定重组质粒；6)对初歩鉴定为阳性的质粒进行测序，获得含有正确A9脂肪酸脱氢酶基因序列的重组载体质粒，命名为pYES2/CT/JcA9，质粒构建结果见附图1;5)大量培养测序正确的克隆，提取质粒，-2(rC保存，以备I:NVScl酵母细胞转化。3.酿酒酵母感受态细胞得制备及转化1)取INVScl酵母细胞在YPD平板上划线培养，温度30°C;2)挑选直径2mm得单菌落于10ml液体YPD培养基，30。C过夜培养；3)取适量菌液接入50ml新鲜YPD培养基，3(rC,250rpni培养至()D6。。约()8-1.0;4)室温，150()xg,3min，离心去上清收集细胞，并用40ml1xTE(10mMTris，pH7.5;lmMEDTA)重悬细胞；5)室温，1500xg，3min，离心去上清收集细胞，并用2ml0.5xTE/lxLiAc(100mM，pH7.5)重悬细胞；6)室温放置10min，此细胞即为感受态细胞;7)取50ii1感受态细胞，向其中依次加入llig的pYES2/CT/JcA9重组质粒或pYES2/CT空质粒作为对照、100yg变性鲑精DNA、7(K)u1的lxLiAc/4()%PEG-3350/1x'TE、，涡旋混匀；8)30。C摇床培养30-60min;9)加入88u1DMSO，轻轻混匀，42。C水浴热激7min;10)6000rpm，15s，离心去上清，加入lmllxTE重悬细胞，再次离心沉淀细胞；11)将细胞重悬于0.5mllxTE,涂布于SC-1)(2%葡萄糖)选择性平板，3(TC静置培养48-72h，至转化子长出。实施例三酵母工禾呈菌的i秀导表汰及目的蛋白的检测1.酵母工程菌的诱导表达将含有重组质粒的阳性克隆及空质粒对照菌在SC-11(2%葡萄糖)平板上划线培养，温度3(rC,至长出菌落；挑单克隆接入5mlSC-U(2X棉子糖)液体培养基，3(rc培养48-72h，0D值至0.4-0.5;取适量菌液离心，去掉上清，加入50mlSC-U(2^半乳糖)液体培养基重悬菌体，3(TC诱导培养48-72h;离心收集菌体，放-2(TC备用。2.△9脂肪酸脱氢酶的检测取上述少量菌体，利用超声波破碎细胞,提取重组表达蛋白，进行SDS-PAGE;电泳后的蛋白经半干法转膜至PVDF膜,经过脱脂牛奶封闭后，以Anti-V5的鼠源抗体作为一抗及相应的辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鼠IgG作为二抗，作用于目的蛋白；最后采用辣根过氧化物酶HRP-ECL显色法对目的蛋白进行分析鉴定。结果如附图2所示，A9脂肪酸脱氢酶重组蛋白大小约为50.5KI)。实施例四酵母工稈菌的脂肪酸气.相色谱-质i普(GC-MS)分析1.脂肪酸提取及甲酯化取湿重0.5mg诱导培养的菌体，液氮研磨，将研磨后得干粉转入EP管，加入lml氯仿甲醇(2:1，v,Zv),再加21十七烷酸(C17:0)(10ug/'u1)做内标；将EP管在快速混合器上涡旋lmin，停lmin，重复5次，将其放入液氮中，快速冷冻5min;取出样品，在4°C冰箱中放置2h,使细胞裂解，离心，取上清转入新EP管;加300ii1浓度为1%的KCl，充分摇动，瞬时离心lmin,转氯仿相到新的EP管；用500u:1.氯仿重新洗一次原来的EP管，同样取氯仿相合并到上-次的EP管中，快速真空器中让溶剂挥发干净，除去氯仿；加200u1正己烷和500u1的1N盐酸甲醇，用密封盖盖好，摇匀，放置85。C的恒温器中温浴2h，甲酯化提取的总脂肪酸；将甲酯化后的样品在-2(TC的冰箱中放置20min;取出样品，加250ii:1.1%的KC:I.,混匀，待分层后，移除正己烷层，将样品转入新的EP管；待溶剂充分挥发，将样品保存于_20°(:冰箱。做GC-MS前，向样品中加入500"1的正己烷，充分溶解。2.脂肪酸GC-MS分析所用GC-MS仪为7890A/5975C(Agilent公司)。毛细管H:P-5MS，30mx0.25mmx0.25ym。进样条件为用氦气做载气相，气流速度为0.7ml/min,进样量为2ul，分离比例为10:l，气化室温度为250。C;柱温程序为IO(TC保温2min，然后以l(TC/min升温至180°C，再以4°C/min升温至260°C，最后冷却仪器结束测量。气相色谱分离峰经质谱检测并采用AgilentMSDChemStation分析软件比对NIST()8质谱数据库可得知对应的脂肪酸组分。GS-MS的结果如附图3所示，麻疯树A9脂肪酸脱氢酶重组蛋白可明显提高酿酒酵母的不饱和脂肪酸的相对含量。经所加内标C17:0的浓度校正后得知，含有重组载体pYES2/CT/JcA9的宿主细胞与含有空载体pYES2/CT的宿主细胞相比，其CI6:1A9不饱和脂肪酸的含量提高了3.18倍，C18:1A9不饱和脂肪酸的含量提高了0.70倍。序列表SEQUENCELISTING〈11()>中华绿油有限公司〈120〉麻疯树A9脂肪酸脱氢酶及其编码基因、重组表达载体、宿主细胞与应用〈130>1〈140〉09/999999〈141>2()()9-04-18〈160>2〈170>PatentInversion3.5〈210>1〈211)1191〈212>DNA〈213>麻疯树(Jatrophacurcas)〈400〉1atggctctcaagctcaatcctttcatttctcaatttcacaagttgcctactttcgctctc60ccaccaatggccaatctcagatctcccaagttctatatggcttctaccctcaagtccggt120tccaaggaggt.ggagaatcttaagaagccttttatgcctcct.cgggaggt.gcatgttcag180gttectcattctetgccaccccag朋gattgagatetttetmtctctegEitg肌tgggct2408<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>GinThrMetLeuAsnThrLeuAspGlyValArgAspGluThrGlyAla145150155160SerLeuThrSerTrpAlalieTrpThrArgAlaTrpThrAlaGluGlu165170175AsnArgHisGlyAspLeuLeuAsnLysTyrLeuTyrLeuSerGlyArg180185190ValAspMetArgGinlieGluLysThrlieGinTyrLeulieGlySer195200205GlyMetAspProArgThrGluAsnSerProTyrLeuGlyPhelieTyr210215220ThrSerPheGinGluArgAlaThrPhelieSerHisGlyAsnThrAla225230235240ArgLeuAlaLysGluHisGlyAsplieLysLeuAlaGinlieCysGly245250255ThrlieAlaAlaAspGluLysArgIiisGluThrAlaTyrThrLyslie260265270ValGluLysLeuPheGlulieAspProAspGlyThrValLeuAlaPhe275280285AlaAspMetMetArgLysLyslieSerMetProAlaHisLeuMetTyr290295300AspGlyArgAspAspAsnLeuPheAspHisPheSerAlaValAlaGin305310315320ArgLeuGlyValTyrThrAlaLysAspTyrAlaAsplieLeuGluPhe325330335LeuValGlyArgTrpLysValAspLysLeuThrGlyLeuSerAlaGlu340345350GlyGinLysAlaGinAspTyrValCysArgLeuProProArglieArg355360365ArgLeuGluGluArgAlaGinGlyArgAlaLysGluGlyProThrlie370375380ProPheSerTrpliePheAspArgGluValLysLeu38539039权利要求一种编码麻疯树Δ9脂肪酸脱氢酶的基因，其特征在于所述基因具有下列任意一种核苷酸序列a)SEQIDNO.1所示的核苷酸序列；b)由于遗传密码的简并性，不同于SEQIDNO.1但编码的氨基酸序列与SEQIDNO.1所编码的氨基酸序列相同的核苷酸序列；c)在严格杂交条件下与上述a)或b)中的核苷酸序列杂交，并且编码具有活性的Δ9脂肪酸脱氢酶的核苷酸序列。2.—种麻疯树A9脂肪酸脱氢酶，其特征在于所述麻疯树A9脂肪酸脱氢酶酶具有选自于下列d)、e)或f)的氨基酸序列d)权利要求1所述的核苷酸序列编码的氨基酸序列；e)SEQIDNO.:2所示的氨基酸序列；f)上述e)中缺失、替换或插入一个或多个氨基酸后的氨基酸序列，并且具有该氨基酸序列的蛋白质具有A9脂肪酸脱氢酶的活性。3.—种表达麻疯树A9脂肪酸脱氢酶的重组表达载体，其特征在于所述重组表达载体至少包括权利要求1或2所述的基因。4.如权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于所述重组表达载体为pYES2/CT/JcA9。5.—种产生A9脂肪酸脱氢酶的基因工程宿主细胞,其特征在于该宿主细胞选自如下宿主细胞之一a)用权利要求1所述的核苷酸转化或转导的宿主细胞；b)用权利要求3所述的重组表达载体转化或转导的宿主细胞。6.如权利要求5所述的宿主细胞,其特征在于该宿主细胞为真核生物。7.如权利要求卜6中任一项在生产不饱和脂肪酸中的应用。全文摘要一种麻疯树Δ9脂肪酸脱氢酶及其编码基因、重组表达载体、宿主细胞与应用。该编码基因是具有SEQIDNO1所示的核苷酸序列或由于遗传密码的简并性，不同于SEQIDNO.1但编码的氨基酸序列与SEQIDNO.1所编码的氨基酸序列相同的核苷酸序列，或在严格杂交条件下与上述任意一种核苷酸序列杂交，且编码具有活性的Δ9脂肪酸脱氢酶的核苷酸序列。该酶属于酰基-酰基载体蛋白脱氢酶，具有良好水溶性，可显著提高不饱和脂肪酸(C16:1Δ9，C18:1Δ9)产量。本发明还提供含有该基因核苷酸序列的可进行功能性表达的重组表达载体、含有该重组表达载体的真核生物宿主以及上述重组表达载体或含有该重组表达载体的真核细胞生物体及其子代在提高不饱和脂肪酸产量方面的应用。文档编号C12N9/02GK101698849SQ20091014393公开日2010年4月28日申请日期2009年6月3日优先权日2009年6月3日发明者李凝,王威申请人:中华绿油有限公司