大肠杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测引物、试剂盒和检测方法与流程

文档序号:11126299阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种大肠杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测引物,其特征在于,所述的多重PCR检测引物如下所示:针对大肠杆菌phoA基因:phoA-F:5'-GTTTCTACCGCAGAGTTG-3',phoA-R:5'-GACTATGACCAGCGTGTT-3';针对铜绿假单胞菌oprL基因:oprL-F:5'-GGCGTGCTGATGCTCGTA-3',oprL-R:5'-CGCTGACCGCTGCCTTTC-3';针对金黄色葡萄球菌nuc基因:nuc-F:5'-ACATAAAGAACCTGCGAC-3',nuc-R:5'-CATTTTTCCATCAGCATA-3'。

2.一种大肠杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测试剂盒,其特征在于,所述的多重PCR检测试剂盒包含权利要求1所述的多重PCR检测引物。

3.根据权利要求2所述的多重PCR检测试剂盒,其特征在于,所述的多重PCR检测试剂盒还包括含Mg2+的PCR反应缓冲液、dNTP和Taq DNA聚合酶。

4.权利要求1所述的多重PCR检测引物或权利要求2或3所述的多重PCR检测试剂盒在检测大肠杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌中的应用。

5.一种化妆品中大肠杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR检测方法,其特征在于,包括以下步骤:a)对待测的化妆品样品进行增菌培养,然后提取细菌的基因组DNA作为模板;b)利用权利要求1所述的多重PCR检测引物进行多重PCR扩增;c)检测多重PCR扩增产物,判断化妆品样品中是否存在大肠杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。

6.根据权利要求5所述的多重PCR检测方法,其特征在于,步骤a)所述的对待测的化妆品样品进行增菌培养具体为将待测的化妆品样品接种到SCDLP增菌液中进行增菌培养,所述的SCDLP增菌液为:每升含有蛋白胨20g、牛肉膏3g、NaCl 5g、K2HPO4 2.5g、葡萄糖3g、组氨酸4g、硫乙醇酸钠1g、卵磷脂2g和吐温-80 10g,余量为蒸馏水,pH7.2~7.3。

7.根据权利要求5或6所述的多重PCR检测方法,其特征在于,所述的多重PCR扩增的反应体系为:DNA模板1pg~100ng、含Mg2+的10×缓冲溶液10mM、dNTP 0.2mM、Taq DNA聚合酶1.0U、权利要求1所述的多重PCR检测引物phoA-F、phoA-R、oprL-F、oprL-R、nuc-F和nuc-R各0.5μM,加ddH2O至总体积为25μL;所述的多重PCR扩增的反应条件为:95℃预变性5min;94℃变性50s、54℃退火40s、72℃延伸1min20s,进行30个循环;72℃延伸10min。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1