>[0061] 在一些实施方案中，用溶剂和/或去污剂处理的时间为大约10分钟。在一些实施 方案中，用溶剂和/或去污剂处理的时间为大约20分钟，大约30分钟，大约1小时，大约2 小时，大约3小时，大约4小时，大约5小时，大约10小时，大约15小时，大约20小时，大约 21小时，大约22小时，大约23小时，大约24小时，和其间的所有范围/亚范围。
[0062] 在一些实施方案中，细胞裂解物或培养物上清液/滤出液使用重组方法产生，如 早前所讨论的。在一些实施方案中，VLP在如下的一种或多种中产生：细菌细胞、昆虫细胞、 酵母细胞、植物或哺乳动物细胞。在一些实施方案中，VLP是诺如病毒基因群I VLP，诺如病 毒基因群II VLP，和/或诺如病毒基因群IV VLP。
[0063] 在一些实施方案中，纯化VLP包括使用多步色谱处理纯化VLP。每个色谱处理被独 立地选择，如早前所列举的。在一些实施方案中，多步色谱处理的第一色谱处理是阳离子交 换色谱，并且也可以采用一种或多种后续色谱处理。
[0064] 在一些实施方案中，至少一个色谱处理涉及使裂解物、上清液或滤出液与色谱材 料接触，其中VLP与所述色谱材料结合。所用的色谱材料取决于所采用的特殊色谱处理，可 以包括，但不仅限于，阳离子交换柱、羟基磷灰石柱、疏水相互作用柱、尺寸排阻柱、阴离子 交换柱、混合模式柱，或亲和柱等。当至少一个色谱处理是阳离子交换色谱时，色谱材料是 阳离子交换柱或膜。
[0065] 在一些实施方案中，至少一种色谱处理还包括在柱上处理之后将VLP从色谱材料 洗脱。洗脱机制可能取决于实验因素，例如但不仅限于，色谱处理的选择，所用的溶剂和/ 或去污剂，VLP/色谱基质和洗脱液的相互作用等。洗脱可以通过用本领域已知的任何合适 的并且通用的生物学缓冲液（乙酸、柠檬酸、组氨酸、磷酸、Tris)和盐（氯化钠、氯化钾、氯 化镁）调节色谱系统的PH和/或离子强度加以执行。在一些实施方案中，至少一种色谱处 理是阳离子交换色谱，并且洗脱通过用乙酸清洗阳离子交换柱加以执行。在另一个实施方 案中，至少一种色谱处理是羟基磷灰石色谱，并且洗脱通过用磷酸钠清洗羟基磷灰石柱加 以执行。
[0066] 在一些实施方案中，在涉及溶剂和/或去污剂处理的至少一种色谱处理之后，VLP 与残余污染蛋白的比值与裂解物、上清液或滤出液相比被增加大约2倍。术语"残余污染蛋 白"可以包括，但不仅限于，宿主细胞蛋白，来自宿主细胞病毒、生产病毒核酸、病毒核酸、细 菌核酸、真菌核酸、来自其他可能与生产系统有关或无关的生物体的核酸的蛋白组分，和/ 或类似物。在一些实施方案中，VLP与残余污染蛋白的比值被增加至少3倍，至少大约4倍， 至少大约5倍，至少大约10倍，至少大约15倍，至少大约20倍，至少大约50倍，至少大约 75倍，至少大约80倍，至少大约85倍，至少大约90倍，至少大约95倍，至少大约100倍，和 其间的所有数值。在一些实施方案中，在多步色谱处理之后，VLP与残余污染蛋白的比值被 增加至少2倍。在一些实施方案中，VLP与残余污染蛋白的比值被增加至少3倍，至少大约 4倍，至少大约5倍，至少大约10倍，至少大约15倍，至少大约20倍，至少大约50倍，至少 大约75倍，至少大约80倍，至少大约85倍，至少大约90倍，至少大约95倍，至少大约100 倍，和其间的所有数值。
[0067] 在一些实施方案中，在至少一种涉及溶剂和/或去污剂处理的色谱处理之后，至 少大约30%的残余污染蛋白被从裂解物、上清液或滤出液中除去。在一些实施方案中，至少 大约35 %，至少大约40 %，至少大约45 %，至少大约46 %，至少大约47 %，至少大约48 %， 至少大约49 %，至少大约50 %，至少大约51 %，至少大约52 %，至少大约53 %，至少大约 54%，至少大约55%，至少大约60%，至少大约65%，至少大约70%，至少大约75%，至少 大约80%，至少大约85%，至少大约90%，至少大约91%，至少大约92%，至少大约93%， 至少大约94%，至少大约95%，至少大约96%，至少大约97%，至少大约98%，至少大约 99%，至少大约100%，和其间的全部数值的残余污染蛋白被从裂解物、上清液或滤出液中 除去。
[0068] 在一些实施方案中，在至少一种涉及溶剂和/或去污剂处理的色谱处理之后，裂 解物、上清液或滤出液中的VLP没有损失。在一些实施方案中，在至少一种涉及溶剂和/ 或去污剂处理的色谱处理之后，裂解物、上清液或滤出液中的VLP有不超过大约1 %，不超 过大约2 %，不超过大约3 %，不超过大约4 %，不超过大约5 %，不超过大约6 %，不超过大 约7 %，不超过大约8 %，不超过大约9 %，不超过大约10 %，不超过大约15 %，不超过大约 20 %，不超过大约25 %，不超过大约30 %，不超过大约35 %，不超过大约40 %，不超过大约 45%，不超过大约50%，不超过大约55%，不超过大约60%，和其间的所有数值被损失。 [0069] 在一些实施方案中，在至少一种涉及溶剂和/或去污剂处理的色谱处理之后，大 约100%的VLP被从裂解物、上清液或滤出液中回收。在一些实施方案中，在至少一种涉及 溶剂和/或去污剂处理的色谱处理之后，至少大约99%，至少大约98%，至少大约97%， 至少大约96%，至少大约95%，至少大约94%，至少大约93%，至少大约92%，至少大约 91 %，至少大约90 %，至少大约85 %，至少大约80 %，至少大约75 %，至少大约70 %，至少大 约65 %，至少大约60 %，至少大约55 %，至少大约50 %，至少大约45 %，至少大约40 %，和 其间所有数值的VLP被从裂解物、上清液或滤出液中回收。
[0070] 在一些实施方案中，本文所述的发明方法还提供了将含有活病毒并进一步含有由 活病毒产生的VLP的溶液中的活病毒清除和/或失活，其中该方法包括将含有活病毒的溶 液的PH调节到小于大约5的pH值，从而产生pH被调节的溶液。活病毒可以是，但不仅限 于，活宿主细胞病毒、生产病毒（例如杆状病毒）、与生产系统有关或无关的污染病毒，和/ 或类似物。VLP可以是，但不仅限于，基因群I VLP和/或基因群II VLP。
[0071] 在一些实施方案中，pH被调节的溶液中活病毒的水平比含有活病毒的溶液中低至 少大约10倍。在一些实施方案中，pH被调节的溶液中活病毒的水平比含有活病毒的溶液 中低至少大约100倍,至少大约IO 3倍,至少大约10 4倍,至少大约10 5倍,至少大约10 6倍， 至少大约IO7倍，至少大约10 8倍，至少大约10 9倍，至少大约10 1(1倍，和其间的所有数值。
[0072] 在一些实施方案中，非VLP微粒/聚集物可以从pH被调节的溶液中除去，从而产 生纯化溶液，其能够通过至少一种色谱处理进行处理。该至少一种色谱处理可以包括使纯 化溶液与色谱材料接触，其中VLP与色谱材料结合，和用溶剂和/或去污剂处理色谱材料。 至少一种色谱处理还可以包括在处理之后，将VLP从色谱材料洗脱，从而产生洗脱液。在一 些实施方案中，洗脱液中活病毒的水平与含有活病毒的溶液相比被减少至少大约IO 2倍。在 一些实施方案中，洗脱液中活病毒的水平与含有活病毒的溶液相比被减少至少大约IO3倍， 至少大约IO 4倍，至少大约10 5倍，至少大约10 6倍，至少大约10 7倍，至少大约10 8倍，至少 大约IO9倍，至少大约10 1(1倍，至少大约10 11倍，至少大约10 12倍，至少大约10 13倍，至少大 约IO14倍，至少大约10 15倍，至少大约10 16倍，和其间的所有数值。
[0073] 在一些实施方案中，本文所述发明方法还提供了将含有活病毒并进一步含有由活 病毒产生的VLP的溶液中的活病毒清除和/或失活，其中该方法包括使用至少一种色谱处 理纯化含有活病毒的溶液。该至少一种色谱处理可以包括使溶液与色谱材料接触，其中VLP 与色谱材料结合，和用溶剂和/或去污剂处理色谱材料。至少一种色谱处理还可以包括在 处理之后，将VLP从色谱材料洗脱，从而产生洗脱液。在一些实施方案中，洗脱液中活病毒 的水平与含有活病毒的溶液相比被减少至少大约10倍。在一些实施方案中，洗脱液中活病 毒的水平与含有活病毒的溶液相比被减少至少大约IO2倍，至少大约10 3倍，至少大约IO4 倍，至少大约IO5倍，至少大约10 6倍，至少大约10 7倍，至少大约10 8倍，至少大约109倍，至 少大约IOltl倍，和其间的所有数值。
[0074] 在一些实施方案中，本发明进一步可操作用于使用低pH处理步骤和过滤处理/步 骤从含有VLP的裂解物、上清液或滤出液中纯化病毒样颗粒（VLP)，从而除去处理污染物和 /或VLP的第二亚群，以及至少一种涉及柱上溶剂和/或去污剂处理的色谱处理，以便使活 病毒传染剂失活。在一些实施方案中，第一亚群包括具有全长VPl亚单位的诺如病毒VLP， 而第二亚群包括具有截短的VPl亚单位的诺如病毒VLP。裂解物、上清液或滤出液通过任何 合适的方法产生，如早前所述。
[0075] 调节裂解物、上清液或滤出液的pH的执行方式与已描述的相似，包括pH值的条件 (例如小于大约5)、处理的时间（例如大约30分钟）等。pH处理导致形成含有VLP第二亚 群的微粒和/或聚集物，而VLP的第一亚群仍保留在pH被调节的溶液体积中。
[0076] 过滤处理的执行方式与已描述的相似，并且可以是深层过滤处理。过滤步骤导致 除去含有VLP第二亚群的微粒/聚集物，以及处理污染物如残余污染核酸，从而产生过滤的 纯化溶液，其中VLP的第一亚群保留在该过滤的纯化溶液体积中。
[0077] 在本实施方案中，pH处理和过滤步骤在多步色谱处理之前执行，并且纯化VLP包 括使用多步色谱处理将VLP第一亚群与过滤的纯化溶液分离，其中多步色谱处理的每个色 谱处理如前所述地独立选出。VLP的第一亚群与色谱材料/柱结合，所述色谱材料/柱用溶 剂和/或去污剂处理。可以采用任何合适的溶剂和/或去污剂，如前所述。然后，将VLP的 第一亚群从色谱材料上洗脱。
[0078] 在一些实施方案中，VLP与残余污染蛋白的比值在低pH处理和至少一种色谱处理 之后被增加大约2倍。在一些实施方案中，VLP与残余污染蛋白的比值被增加大约3倍，大 约4倍，至少5倍，至少10倍，至少15倍，至少20倍，至少50倍，至少75倍，至少100倍， 和其间的所有数值。在一些实施方案中，VLP与残余污染蛋白的比值在低pH处理和多步色 谱处理之后被增加大约2倍。在一些实施方案中，VLP与残余污染蛋白的比值被增加大约3 倍，大约4倍，至少5倍，至少10倍，至少15倍，至少20倍，和其间的所有数值。
[0079] 在一些实施方案中，本发明进一步可操作用于使用低pH处理步骤和深层过滤处 理/步骤纯化VLP，从而除去处理污染物和/或非期望的VLP亚群，例如VLP的第二亚群。 pH处理步骤的执行可以如前所述。
[0080] 深层过滤处理能够包括将pH被调节的溶液与一个或多个深层过滤器接触，从而 产生过滤的纯化溶液。可以根据任何生产因素为纯化系统选择一个或多个深层过滤器，例 如处理体积，颗粒装载或负载，产物回收率，最终浊度，过滤器容量，和/或类似因素。在一 些实施方案中，至少一个深层过滤器是硅藻土深层过滤器。在一些实施方案中，数个深层过 滤器是硅藻土深层过滤器，其每一个具有从下组独立选出的过滤器容量：大约50升/m 2,大 约100升/m2,大约200升/m2,大约300升/m 2,大约400升/m2,大约500升/m2,大约600升 /m 2,大约700升/m2,大约800升/m2,大约900升/m2,大约1000升/m 2,和其间的所有数值。 在一些实施方案中，使用具有选自下组的过滤器容量的单深层过滤器：大约150升/m2,大 约200升/m 2,大约250升/m2,大约300升/m2,大约350升/m2,大约400升/m 2,和其间的所 有数值。可以使用的一个示例性深层过滤器是Millistak+HC pod过滤器。
[0081] 在一些实施方案中，与细胞裂解物或培养物上清液/滤出液相比，通过深层过滤 处理可以将至少大约50%的残余污染核酸从pH被调节的溶液中除去。在一些实施方案 中，与细胞裂解物或培养物上清液/滤出液相比，通过深层过滤处理可以将至少大约55%， 至少大约60 %，至少大约65 %，至少大约70 %，至少大约75 %，至少大约80 %，至少大约 85 %，至少大约90 %，至少大约91 %，至少大约92 %，至少大约93 %，至少大约94%，至少大 约95 %，至少大约96 %，至少大约97 %，至少大约98 %，至少大约99 %，至少大约100 %，和 其间所有数值的残余污染核酸从PH被调节的溶液中除去。
[0082] 在一些实施方案中，与细胞裂解物或培养物上清液/滤出液相比，通过深层过滤 处理，大约100%的VLP被从pH被调节的溶液中回收。在一些实施方案中，与细胞裂解物或 培养物上清液/滤出液相比，通过深层过滤处理，至少大约99 %，至少大约98 %，至少大约 97%，至少大约96%，至少大约95%，至少大约94%，至少大约93%，至少大约92%，至少 大约91 %，至少大约90 %，至少大约85 %，至少大约80 %，至少大约75 %，至少大约70 %， 至少大约65 %，至少大约60 %，至少大约55 %，至少大约50 %，至少大约45 %，至少大约 40%，和其间所有数值的VLP被从pH被调节的溶液中回收。
[0083] 在一些实施方案中，所回收的VLP是VLP的第一亚群。在一些实施方案中，一种或 多种色谱处理可用于将VLP的第一亚群从深层过滤的纯化溶液中分离，如前所述。
[0084] 在一些实施方案中，本发明的方面进一步可操作用于提供根据尺寸排阻色谱和 ELISA测量，含有与VLP相比不超过80 %残余污染蛋白的诺如病毒VLP纯化群体的溶液。诺 如病毒VLP纯化群体的溶液可以从先前所述的细胞裂解物、培养物上清液或滤出液产生， 或者从先前所述的任何其他溶液产生，如pH被调节的溶液、深层过滤的溶液等。在一些实 施方案中，诺如病毒VLP纯化群体的溶液通过纯化含有诺如病毒VLP的裂解物、上清液或滤 出液获得。在一些实施方案中，诺如病毒VLP纯化群体的溶液通过一种或多种如下的处理 产生：pH处理、离心、沉淀、絮凝、沉降、过滤和色谱。在一些实施方案中，诺如病毒VLP纯化 群体的溶液从任何经过处理的/未处理的溶液产生，例如通过PH处理和过滤