其中溶剂和/或去污剂包括如下的一种或多种：TnBP、 辛基酚、环氧乙烧冷凝物（ethyleneoxide condensate)、聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯 (polyoxyethylene sorbitan monooleate)、和胆酸钠、Triton X-100、和憐酸三丁酯。
19. 权利要求17的方法，其中VLP是如下的一种或多种：诺如病毒基因群I VLP、诺如 病毒基因群II VLP、诺如病毒基因群IV VLP、嵌合诺如病毒VLP，和沙波病毒（sapovirus) VLP。
20. 权利要求17的方法，其中VLP与残余污染蛋白的比值与裂解物、上清液或滤出液相 比被增加至少大约10倍。
21. 权利要求17的方法，其中VLP与残余污染蛋白的比值与裂解物、上清液或滤出液相 比被增加至少大约90倍。
22. 权利要求17的方法，其中所述纯化的结果使至少大约50%的残余污染蛋白被从裂 解物、上清液或滤出液中除去。
23. 权利要求17的方法，其中所述纯化的结果使至少大约99%的残余污染蛋白被从裂 解物、上清液或滤出液中除去。
24. 权利要求17的方法，其中在所述纯化期间有不超过大约50%的VLP被损失。
25. 权利要求17的方法，其中在所述纯化的结果使至少大约65%的VLP被回收。
26. 权利要求17的方法，其中每一个色谱处理独立地从下组中选出：羟基磷灰石色谱、 疏水相互作用色谱、尺寸排阻色谱、离子交换色谱、混合模式色谱、基于膜的色谱和亲和色 谱。
27. 权利要求26的方法，其中多步色谱处理的第一色谱处理是离子交换色谱，其中该 离子交换色谱从阴离子交换色谱和阳离子交换色谱中选出。
28. 权利要求27的方法，其中所述处理步骤在离子交换色谱处理的离子交换柱上执 行。
29. 权利要求27的方法，进一步包括一个或多个额外的色谱处理。
30. 权利要求17的方法，其中多步色谱处理的第一色谱处理选自下组：离子交换色谱、 羟基磷灰石色谱和疏水相互作用色谱。
31. 权利要求17的方法，其中裂解物、上清液或滤出液使用重组方法产生。
32. 权利要求31的方法，其中VLP在细菌细胞、昆虫细胞、酵母细胞、植物或哺乳动物细 胞中产生。
33. -种纯化病毒样颗粒（VLP)的方法，包括： 产生或获得含有VLP的细胞裂解物、培养物上清液或滤出液，所述VLP至少包含VLP的 第一亚群和第二亚群； 将裂解物、上清液或滤出液的pH调节到小于大约5的pH值，从而产生pH被调节的溶 液； 使用过滤处理从pH被调节的溶液中除去VLP的第二亚群，从而产生过滤的纯化溶液， 其中该过滤的纯化溶液基本上保留VLP的第一亚群；和 使用多步色谱处理将VLP的第一亚群从过滤的纯化溶液中分离。
34. 权利要求33的方法，其中该多步色谱处理的至少一个色谱处理包括： 使过滤的纯化溶液与色谱材料接触，其中VLP的第一亚群与所述色谱材料结合； 用溶剂和/或去污剂处理色谱材料；和 将VLP的第一亚群从色谱材料洗脱。
35. 权利要求34的方法，其中VLP第一亚群与残余污染蛋白的比值与裂解物、上清液或 滤出液相比被增加至少大约2倍。
36. 权利要求33的方法，其中每一个色谱处理独立地从下组中选出：羟基磷灰石色谱、 疏水相互作用色谱、尺寸排阻色谱、离子交换色谱、混合模式色谱、和亲和色谱。
37. 权利要求33的方法，其中VLP是如下的一种或多种：诺如病毒基因群I VLP、诺如 病毒基因群II VLP、诺如病毒基因群IV VLP、嵌合诺如病毒VLP，和沙波病毒VLP。
38. 权利要求37的方法，其中VLP是诺如病毒基因群I VLP，其中第一亚群包括具有全 长VP1亚单位的诺如病毒VLP，并且其中第二亚群包括具有截短的VP1亚单位的诺如病毒 VLP。
39. 权利要求33的方法，其中裂解物、上清液或滤出液使用重组方法产生。
40. 权利要求33的方法，其中VLP在细菌细胞、昆虫细胞、酵母细胞、植物或哺乳动物细 胞中产生。
41. 权利要求33的方法，其中裂解物、上清液或滤出液的被调节pH小于大约3。
42. 权利要求33的方法，其中裂解物、上清液或滤出液的被调节pH小于大约4。
43. 权利要求33的方法，其中所述pH调节被执行大约30分钟至大约48小时的时间。
44. 权利要求33的方法，其中过滤处理包括深层过滤处理。
45. 权利要求33的方法，在过滤之后进一步包括一个或多个如下的处理：离心、沉淀、 絮凝、沉降和额外过滤。
46. -种疫苗，其包含通过权利要求33的方法制备的VLP的第一亚群。
47. -种用于纯化病毒样颗粒（VLP)的方法，包括： 产生或获得含有所述VLP的细胞裂解物、培养物上清液或滤出液； 将裂解物、上清液或滤出液的pH调节到小于大约5的pH值，从而产生pH被调节的溶 液；和 从pH被调节的溶液中除去非VLP微粒/聚集物，所述除去包括通过深层过滤处理使pH 被调节的溶液澄清，从而产生纯化的深层过滤溶液。
48. 权利要求47的方法，其中深层过滤处理包括使pH被调节的溶液与一个或多个深层 过滤器（depth filter)接触。
49. 权利要求47的方法，其中至少一个深层过滤器是硅藻土深层过滤器。
50. 权利要求48的方法，其中一个或多个深层过滤器是多个硅藻土深层过滤器，其每 一个具有从下述范围中独立选出的过滤容量：大约50升/m 2至大约1000升/m2。
51. 权利要求47的方法，其中一个或多个深层过滤器是单深层过滤器（single cbpth filter)，其每一个具有从下述范围中选出的过滤容量：大约150升/m2至大约400升/m 2。
52. 权利要求47的方法，其中与裂解物、上清液或滤出液相比，至少大约99%的残余污 染核酸被从pH被调节的溶液中除去。
53. 权利要求47的方法，其中与裂解物、上清液或滤出液相比，至少大约95%的残余污 染核酸被从pH被调节的溶液中除去。
54. 权利要求47的方法，其中与裂解物、上清液或滤出液相比，至少大约75%的VLP被 从pH被调节的溶液中回收。
55. 权利要求47的方法，其中与裂解物、上清液或滤出液相比，至少大约100%的VLP 被从pH被调节的溶液中回收。
56. 权利要求47的方法，其中VLP至少包含VLP的第一亚群和第二亚群，并且其中所述 澄清将VLP的第二亚群从pH被调节的溶液中分离，从而产生深层过滤的纯化溶液，并且其 中该深层过滤的纯化溶液基本上保留VLP的第一亚群。
57. 权利要求56的方法，所述分离进一步包括使用一个或多个色谱处理将VLP的第一 亚群从深层过滤的纯化溶液中分离，每一个色谱处理独立地从下组中选出：羟基磷灰石色 谱、疏水相互作用色谱、尺寸排阻色谱、阴离子交换色谱、阳离子交换色谱、混合模式色谱、 和亲和色谱。
58. 权利要求55的方法，其中VLP是如下的一种或多种：诺如病毒基因群I VLP、诺如 病毒基因群II VLP、诺如病毒基因群IV VLP、嵌合诺如病毒VLP，和沙波病毒VLP。
59. 权利要求58的方法，其中VLP是诺如病毒基因群I VLP，其中第一亚群包括具有全 长VP1亚单位的诺如病毒VLP，并且其中第二亚群包括具有截短的VP1亚单位的诺如病毒 VLP。
60. 权利要求47的方法，其中细胞裂解物或培养物上清/滤出液使用重组方法产生。
61. 权利要求47的方法，其中VLP在细菌细胞、昆虫细胞、酵母细胞、植物或哺乳动物细 胞中产生。
62. -种包含诺如病毒VLP的纯化群体的溶液，其中通过尺寸排阻色谱和ELISA测量， 所述溶液含有与VLP相比不超过大约80 %的残余污染蛋白。
63. -种疫苗，包括从权利要求62的溶液制备的诺如病毒VLP。
64. 权利要求62的溶液，从含有诺如病毒VLP的细胞裂解物、培养物上清液或滤出液中 纯化出来。
65. 权利要求64的溶液，与裂解物、上清液或滤出液相比，含有不超过大约35%的残余 污染核酸。
66. 权利要求64的溶液，其中至少大约50%的诺如病毒VLP被从裂解物、上清液或滤 出液中回收。
67. 权利要求64的溶液，其中与裂解物、上清液或滤出液相比，诺如病毒VLP与残余污 染蛋白的比值被增加至少大约10倍。
68. 权利要求62的溶液，其中该溶液适合用在商业处理中，所述商业处理具有至少20 升的处理体积。
69. 权利要求62的溶液，通过一个或多个如下的处理产生：pH处理、离心、沉淀、絮凝、 沉降、过滤和色谱。
70. 权利要求69的溶液，通过如下产生： 产生或获得含有诺如病毒VLP的细胞裂解物、培养物上清或滤出液，所述诺如病毒VLP 至少包含诺如病毒VLP的第一亚群和第二亚群； 将裂解物、上清液或滤出液的pH调节到小于大约5的pH，从而产生pH被调节的溶液； 使用过滤处理将诺如病毒VLP的第二亚群从pH被调节的溶液中除去，从而产生过滤的 纯化溶液，其中该过滤的纯化溶液基本上保留诺如病毒VLP的第一亚群；和 使用多步色谱处理将诺如病毒VLP的第一亚群从过滤的纯化溶液中分离。
71. 权利要求70的溶液，其中诺如病毒VLP是诺如病毒基因群I VLP，其中第一亚群包 括具有全长VP1亚单位的诺如病毒基因群1VLP，并且其中第二亚群包括具有截短的VP1亚 单位的诺如病毒基因群I VLP。
72. 权利要求70的溶液，其中诺如病毒VLP是诺如病毒基因群II VLP，其中第一亚群包 括具有全长VP1亚单位的诺如病毒基因群II VLP，并且其中第二亚群包括具有截短的VP1 亚单位的诺如病毒基因群II VLP。
73. -种包含VLP纯化群体的溶液，其中所述溶液含有至少50 %的具有全长VP1亚单 位的VLP。
74. 权利要求73的溶液，含有高达大约100%的具有全长VP1亚单位的VLP。
75. 权利要求73的溶液，其中该溶液基本上没有具有截短的VP1亚单位的VLP。
76. 权利要求73的溶液，从含有至少10%的具有截短的VP1亚单位的VLP的未纯化溶 液中产生。
77. 权利要求76的溶液，其中未纯化的溶液包括含有VLP的细胞裂解物、培养物上清和 滤出液。
78. 权利要求76的溶液，其中该溶液通过如下方法从未纯化的溶液中产生： 将未纯化溶液的pH调节到小于大约5的pH值，从而产生pH被调节的溶液；和 从pH被调节的溶液中除去具有截短的VP1亚单位的VLP，从而产生作为纯化溶液的溶 液，其中pH被调节的溶液基本上保留具有全长VP1亚单位的VLP。
79. 权利要求78的溶液，其中所述除去通过一个或多个如下的处理执行：离心、沉淀、 絮凝、沉降和过滤。
80. -种具有全长VP1亚单位的VLP的纯化群体，通过向权利要求73的溶液采用一种 或多种色谱处理而产生。
81. -种清除和/或失活含有活病毒并进一步含有由活病毒产生VLP的溶液中的活病 毒的方法，该方法包括将含有活病毒的溶液的pH调节到小于大约5,从而产生pH被调节的 溶液。
82. 权利要求81的方法，其中pH被调节的溶液中的活病毒水平被减少至少大约104倍。
83. 权利要求81的方法，其中pH被调节的溶液中的活病毒水平被减少至少大约105倍。
84. 权利要求81的方法，其中VLP从基因群I VLP和基因群II VLP中选出。
85. 权利要求81的方法，其中活病毒包括杆状病毒。
86. 权利要求81的方法，进一步包括： 从pH被调节的溶液中除去非VLP微粒/聚集物，从而产生纯化溶液；和 使用至少一种色谱处理对纯化溶液进行纯化，其中该至少一种色谱处理包括： 使pH被调节的溶液与色谱材料接触，其中VLP与所述色谱材料结合； 用溶剂和/或去污剂处理色谱材料；和 在所述处理后，将VLP从色谱材料洗脱，从而产生洗脱物， 其中与含有活病毒的溶液相比，洗脱物中活病毒的水平被减少至少大约1〇2倍。
87. 权利要求86的方法，其中与含有活病毒的溶液相比，洗脱物中活病毒的水平被减 少至少大约1〇3倍。
88. 权利要求86的方法，其中VLP从基因群I VLP和基因群II VLP中选出。
89. 权利要求86的方法，其中活病毒包括杆状病毒。
90. -种纯化的VLP组合物，从权利要求86的洗脱物中产生。
91. 一种从权利要求86的洗脱物中产生的疫苗。
92. -种清除和/或失活含有活病毒并进一步含有由活病毒产生VLP的溶液中的活病 毒的方法，该方法包括使用至少一种色谱处理纯化含有活病毒的溶液，其中该至少一种色 谱处理包括： 使含有活病毒的溶液与色谱材料接触，其中VLP与所述色谱材料结合； 用溶剂和/或去污剂处理色谱材料；和 在所述处理后，将VLP从色谱材料洗脱，从而产生洗脱物。
93. 权利要求92的方法，其中与含有活病毒的溶液相比，洗脱物中活病毒的水平被减 少至少大约1〇5倍。
94. 权利要求92的方法，其中与含有活病毒的溶液相比，洗脱物中活病毒的水平被减 少至少大约1〇7倍。
95. 权利要求92的方法，其中VLP从基因群I VLP和基因群II VLP中选出。
96. 权利要求92的方法，其中活病毒包括杆状病毒。
【专利摘要】纯化病毒样颗粒(VLP)的方法，其基本上没有处理污染物(process？contaminant)和传染剂(infectious？agent)。所述方法包括，例如，收获期间的低pH处理和/或VLP捕获期间通过溶剂和/或去污剂失活。
【IPC分类】C12N7-02, A61K39-125
【公开号】CN104583393
【申请号】CN201380043618
【发明人】R·泰勒
【申请人】武田疫苗股份有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年6月24日
【公告号】CA2879815A1, EP2864478A1, US20140004145, WO2013192604A1