_二氧六环（4mL)和氏0(1!^)，搅拌至均匀分散于体系中，然后升温至80°C，在氮气保护 下反应2h。反应完毕后，加乙酸乙酯3〇!1^和H 2O(IOmL),萃取分液。有机相用硫酸钠干燥， 旋干，柱层析（石油醚：乙酸乙酯=3 :1-1:1)得白色固体132mg，产率55%。
[0080] 1H NMR (CDCl 3, 4 0 0ΜΗζ) δ ppm9. 00 (s, 1H) ,8.10 (d, 2H, J = 7. 2Hz), 8. 08 (s, 1H) 7. 78 (d, 1H, J = 4. 0Hz), 7. 32 (d, 2H, 7. 2Hz), 4. 14 (td, 1H, J = 0. 2Hz, 4. 0Hz), 3. 10 (dd, 1H, J = 8. 4Hz, 17. 2Hz), 2. 90 (dd, J = 8. 4Hz, 17. 2Hz), 2. 60 (m, 1H) ,2. 59 (s, 3H), 2. 40 (s, 3H), I. 90 (m, 1H), I. 45-1. 76 (m, 4H), I. 20-1. 32 (m, 3H).
[0082] 将化合物 13 (132mg，0· 28mmol)和碳酸钟（77mg, 0· 56mmol)置于 50mL 的单口瓶 中,加入甲醇6mL和水I. 5mL,搅拌均匀,加热至60°C反应1小时。反应完毕后,反应完毕后， 加乙酸乙酯20mL和H2O (IOmL)，萃取分液。有机相用硫酸钠干燥，旋干，柱层析（石油醚：乙 酸乙酯=1:1)得白色固体7211^，产率81%。
[0083] 1HNMR (CDCl3, 400mHz)，δ ppmO. 92 (br，1H)，8. 90 (s，1H)，8. 17 (m，1H)，7. 39 (m，1H)， 6. 69 (m, 1H), 4. 20 (td, 1H, J = 10. 2Hz, 4. 0Hz), 3. 13 (dd, 1H, J = 8. 4Hz, 17. 2Hz), 2. 93 (dd, J =8. 4Hz, 17. 2Hz), 2. 63 (m, 1H), 2. 62 (s, 3H), I. 90 (m, 1H), I. 45-1. 76 (m, 4H), I. 20-1. 32 (m, 3H).
[0085] 将500mg化合物14溶解于流动相，分离条件：仪器：Gils〇n281，柱子：CHIRALPAK IC 30*250mm, 5um(Daicel),流动相：正己烧（0· 1 % 二乙胺）：乙醇（0· 1 % 二乙胺）= 70:30,波长：214nm&254nm，流速：1.0ml/min温度：40°C。一个循环时间为：19分钟。分别 收集化合物15(174mg)和化合物16(210mg)。
[0086] 实施例2 :
[0088] 将化合物 17(190mg，0. 7mmol)和化合物 2(169mg, I. 4mmol)置于 50mL 单口瓶中， 氮气保护下，室温下滴加 DBU(425mg，2.8mmol)，搅拌均匀。然后加热到80°C，反应8h。反应 完毕后，旋干溶剂，柱层析（乙酸乙酯：石油醚=5 :1)得无色油状物60mg，产率17%。
[0089] 1Hnmr(Cdci3JOOMHz) δ ppm7· 56 (s，1H)，4.21 (td，1H，J= 10.2Hz，4. OHz), 3.05 (m ,1H), 2. 85 (m, 1H), 2. 53 (m, 1H), I. 93 (m, 1H), I. 45-1. 80 (m, 4H), I. 20-1. 32 (m, 15H).
[0090]
[0091] 将化合物 18 (60mg, 0· 16mmol)，化合物 12 (48mg，0· 16mmol),四三苯基勝把(9mg, 0. 008mmol)和碳酸钾（207mg, 1.5mmol)，置于50mL单口反应瓶中，氮气保护下，室温下加入 1，4_二氧六环（4mL)和凡0(1!^)，搅拌至均匀分散于体系中，然后升温至80°C，在氮气保护 下反应2h。反应完毕后，加乙酸乙酯3〇!1^和H 2O(IOmL),萃取分液。有机相用硫酸钠干燥， 旋干，柱层析（石油醚：乙酸乙酯=3 :1-1 :1)得白色固体24mg，产率30%。
[0092] 4匪1?(〇0(：13,4001泡）3??1119.04(8，1!〇,8.12((1，2!1，了 = 7.2泡），8.06(8， 1H) 7. 81 (d, 1H, J = 4. OHz), 7. 36 (d, 2H, j = 7. 2Hz), 4. 30 (m, 1H,), 3. 10 (m, 1H), 2. 94 (m, JlH ),2. 64 (m, 1H), 2. 40 (s, 3H), I. 99 (m, 1H), I. 45-1. 77 (m, 4H), I. 20-1. 32 (m, 3H).
[0094] 将化合物 19 (24mg，0· 045mmol)和碳酸钟（12mg，0· 09mmol)置于 50mL 的单口瓶 中，加入甲醇3mL和水0. 75mL，搅拌均匀，加热至80°C反应1小时。反应完毕后，反应完毕 后，加乙酸乙酯20mL和H2O (IOmL)，萃取分液。有机相用硫酸钠干燥，旋干，柱层析（石油醚： 乙酸乙酯=1 :1)得白色固体12mg，产率70%。
[0095] 1HNMR (CDCl3, 400MHz) δ ppmlO. 40 (br，1H)，8. 99 (s，1H)，8. 17 (m，1H)，7. 45 (m，1H)， 6. 68 (m, 1H), 4. 34 (m, 1H), 3. 13 (dd, 1H, J = 8. 0Hz, 16. 8Hz), 2. 93 (dd, J = 8. 0Hz, 16. 8Hz), 2 .66 (m, 1H), 2. 0 (m, 1H), I. 45-1. 76 (m, 4H), I. 20-1. 32 (m, 3H).
[0096] 以下化合物可按照上述实例用类似的方法合成
[0097]
[0098] 实施例3 :化合物在分子水平对JAK酶活性的影响
[0099] 本酶活反应实验基于荧光共振能量转移（FRET)原理，两端分别带有一个供体荧 光基团和一个受体荧光基团的酶反应底物，在ATP和激酶的共同作用下可以被磷酸化修 饰，保护底物不被底物酶A切割，从而实现荧光共振能量转移，加入抑制剂后，则该现象减 少。该实验用到的试剂如下：
[0100] 酶反应底物：初始浓度为ImM，该多肽上的酪氨酸残基在激酶、ATP共同作用下可 被磷酸化；购自Invitrogen ;
[0101] 100%磷酸化底物：初始浓度为ImM，该多肽上的酪氨酸残基已被完全磷酸化修 饰；购自 Invitrogen ;
[0102] ATP :初始浓度为 IOmM,购自 Invitrogen ;
[0103] 反应缓冲液：含 250mM 的 HEPES (PH 为 7. 5)、50mM 的 MgCl2, 5mM 的 EGTA, 0. 05% 的 Bri j_35 ;贝勾自 Invitrogen ;
[0104] 底物酶A :可对未被磷酸化的酶反应底物进行酶切；购自Invitrogen ;
[0105] 终止液：购自 Invitrogen。
[0106] 实验具体步骤概述如下：分别将酶反应底物、100 %磷酸化底物、反应缓冲 液、ATP、底物酶A、终止液平衡至室温。选择JAK激酶域重组蛋白JAK1、JAK2JH1JH2、 JAK2JH1JH2V617F、JAK3(购自Invitrogen)，用反应缓冲液稀释使终浓度分别为0.1 ng/ μ L、Ing/μ L、0. 2ng/μ L、0. 08ng/μ L，置于冰上准备加样。
[0107] 选用黑色384孔微量加样板（PerkinElmer)，每孔加入用反应缓冲液稀释的酶反 应底物2. 5 μ L，终浓度为2 μ Μ。待测化合物（本发明实施例制备的化合物）用4% DMSO 稀释成合适的浓度（起始浓度一般设为3 μ M，按1/3的比例稀释成9个浓度梯度），每 孔加入2. 5 μ L。每孔加入反应缓冲液稀释的ATP溶液，终浓度对应JAK1、JAK2JH1JH2、 JAK2JH1JH2V617F、JAK3 分别为 7