专利名称：一种Viviparous1基因及其启动子表达载体的构建方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于转基因技术培育小麦品种技术领域，更具体涉及一种Viviparous 1 (Vp 1,以下简称Vpl)基因及其启动子的表达载体构建方法，同时还涉及一种Viviparous 1基因及其启动子在小麦穗发芽抗性育种中的应用，包括转Vpl基因获得抗穗发芽小麦新材料，Vpl基因启动子在小麦种子中特异表达的应用，Vpl基因抗穗发芽的功能验证，及以转基因抗穗发芽为亲本的小麦品种培育。
背景技术：
小麦穗发芽(preharvest sprouting, PHS)是指在收割前籽粒就在麦穗上萌发的现象。穗发芽消耗了贮藏营养，籽粒重量减轻，导致减产。更严重的是穗发芽造成小麦品质下降，穗发芽种子生产的面粉，由于淀粉降解，制作的面条容易断裂，面包体积小，失去商用价值。同时，穗发芽引起种子活力下降，导致幼苗生长不良，影响来年的产量，因此穗发芽的小麦也失去了留种的价值(Groos C.，Gay G.，Perretant M. R. et al. Study of the relationship between pre—harvest sprouting and grain color by quantitative trait loci analysis in a whiteXred grainbread—wheat cross. TheorAppl Genet, 2002，104 :39-47)。这些都会给小麦生产者带来严重损失。穗发芽是一个世界性的灾害，在美国、加拿大、澳大利亚、新西兰、南非、日本、法国等主要小麦生产国都曾发生。在我国，83%的小麦生产区都有不同程度的发生。在小麦收获前，遇到冷湿天气，一些敏感的品种就易发生穗发芽。长江流域在小麦收获前常遇阴雨天气，穗发芽现象时常发生，是我国穗发芽危害最严重的地区之一(Xiao S. H., Zhang Χ. Y. &Yan C. S. et al. Germplasm improvement for preharvest sprouting resistance in Chinese white-grained wheat :An overview of the current strategy. Euphytica， 2002，126 :35-38)。受全球气候变化影响，我国北方近年也多次遭受穗发芽的危害，仅1992 年陕西关中地区小麦穗发芽减产4亿公斤，直接经济损失达2. 6亿元。在我国现有栽培品种中，具有较高穗发芽抗性的不到5% (黄涛，李和平，张兆顺等.小麦穗发芽抗性与选择效应研究.华中农业大学学报，2007二6(1) :11-14)。可见穗发芽严重威胁着我国的小麦生产安全，寻找抗穗发芽的种质资源，培育抗性小麦品种，是解决这一问题的根本途径。穗发芽抗性与种子休眠相关，受多基因调控，并受潮湿和低温环境的诱导。在分子水平上，标记了与种子休眠和穗发芽抗性相关的QTL位点达数十个。几乎每条同源染色体上都有与穗发芽抗性相关的QTL位点。通过对小麦基因组间的比较，以及不同谷物的遗传图谱的比较，发现种子休眠和穗发芽抗性QTL位点所处的染色体区段具有很高的同源性， 其中 Vpl (Viviparous 1)基因与穗发芽有密切关系(Li，C.，Ni，P.，Francki，M.，Hunter, A. , Zhang, Y. , Schibeci, D. , Li, H. , Tarr, Α. , Wang, J. , Cakir, Μ. , Yu, J. , Bellgard, Μ. , Lance, R. , Appels, R. ,2004. Genes controlling seed dormancy and pre—harvest sprouting in a rice-wheat-barley comparison. Funct Integr Genomics 4,84—93;Gale, Μ. D. , Flintham, J. Ε., Devos, K. Μ. ,2002. Cereal comparative genetics and preharvest sprouting. Euphytica 126，21—25)。Vpl基因是玉米中发现的控制穗萌(穗发芽)的重要调节基因，现已在多种禾本科植物中分离出 Vpl 同源序列(McCarty，D. R.，Hattori, T.，Carson, C. B.，Vasil, V.，Lazar, M. ,Vasil,I. K. ,1991.The viviparous-1 developmental gene of maize encodes a novel transcriptional activator. Cell66，895-905)。该基因的缺陷型表现为对 ABA 不敏感， 玉米种子在穗轴上就可萌发，类似于拟南芥abi3(ABA-insensitive 3)突变体(Giraudat， J. , Hauge, B. Μ. , Valon, C. , SmalIe, J. , Parcy, F. , Goodman, H. Μ. , 1992. Isolation of the Arabidopsis ABI3gene by positional cloning. Plant Cell4,1251-1261)。Vpl有 5个内含子，编码691个氨基酸蛋白(VPl)。VPl有4个保守结构域Al，Bi，B2和B3。Al 是VPl N端的一个酸性激活域。Bl与bZIP转录因子直接相互作用。B2含有核定位信号， 与核定位有关，同时有反式激活功能。B3与特异DNA序列(Sph元件)结合。VPl是一个转录因子，与特异DNA序列结合，具有两方面的功能一方面作为转录激活因子，在种子成熟过程中，促进Em、Cl等多种种子发育后期与胚成熟相关基因的表达，使种子获得干化耐个生(McCarty, D. R. ，Hattori, Τ. ， Carson, C. B. ，Vasil, V. ， Lazar, M. ，Vasil, I. K. ，1991. The viviparous-1 developmental gene of maize encodes a novel transcriptional activator. Cell66,895-905)；另一方面作为抑制因子，抑制与种子萌发相关基因特别是 a-淀粉酶基因的表达，从而使种子获得一定的休眠性(Hoecker，U.，Vasil, I. K.，McCarty, D. R.，1995. Integrated control of seed maturation and germination programs by activator and repressor functions ofViviparous-Iof maize. Genes&Development 9, 2459-2469) 0 Yang等在分析小麦Vpl (TaVpl)基因时发现，该基因内含子3具有多态性， 并与种子休眠和穗发芽抗性相关，在该位点存在插入或切除序列的品种多具穗发芽抗性， 可用作穗发芽抗性的 STS 标记(Yang Y. , Zhao X. L. , Xia L. Q. et al. Development and validation of a Viviparous-ISTS marker for pre—harvest sprouting tolerance in Chinese wheats. Theor Appl Genet，2007，115 :971-980)。在种子发育过程中，VPl对大量基因的表达具有强大的调控作用。Vpl与abi3是直向同源基因，将Vpl基因转到拟南芥abi3突变体中，结果表明能够在拟南芥背景下表达， 恢复abi3突变体的部分休眠性。通过基因芯片分析，鉴定出了 353个受ABA/VP1调节的基因，占被检测基因的4. 8%，其中73%的基因受ABA/VP1共同调节，表明VPl在ABA的调控中处于中心位置，鉴定的27个种子贮藏蛋白，均受Vpl基因正调节，因此Vpl基因在对种子发育的调节中，可能还对种子品质产生影响。ABA/VP1对Em和Cl基因表达调控研究表明， VPl和ABA作用于启动子的不同元件，单独的ABA或VPl的作用，可使表达提高十余倍，而两者同时存在，可使表达提高一百多倍，呈现乘积关系(McCarty，D. R.，Hattori, Τ.，Carson, C. B. , Vasil, V. , Lazar, Μ. , Vasil, I. K. , 1991. The viviparous-1 developmental gene of maize encodes a novel transcriptional activator.Cell 66,895-905)。小麦Vpl基因转录后不能正确拼接，是导致小麦容易发生穗发芽的重要因素。对小麦Vpl基因转录水平上的分析表明，由于不能正确拼接，每一基因组转录出一套mRNA，包括内含子的插入和外显子的切除，导致大部分成熟mRNA不能合成全长VPl蛋白，从而失去调节功能。Western blot杂交也表明，在小麦胚细胞核中存在大小不同的VPl蛋白。进一步研究发现小麦近缘种和祖先种同样存在Vpl基因的错拼，并与小麦有相似的拼接模式。 因此，小麦的错拼不是人为选择的结果，在小麦品种中可能没有能够正确拼接的Vpl基因 (Wilkinson,M. ,Lenton,J. ,Holdsworth,M. ,2005. Transcripts of Vp-Ihomoeologues are alternatively spliced within the Triticeae tribe. Euphytica 143，243-246)。因此将有功能的外源Vpl基因转入小麦中，可能提高小麦的穗发芽抗性。
发明内容
本发明在于克服小麦穗发芽抗性资源缺乏，将外源Vpl基因导入小麦遗传背景下，补偿小麦自身TaVpl的缺陷，从而达到培育高抗穗发芽小麦品种的目的。本发明的目的 Μ共了—禾中 Viviparous 1 (Accession no. M60214. 1 ；McCarty, D. ， Hattori, Τ. , Carson, C. , Vasi1, V. , Lazar, Μ. , Vasil, I.,1991.The Viviparous-Idevelopmental gene of maize encodes a novel transcriptional activator. Cell 66,895-905)及其启动子(Accession no. DQ886030. 1 ；Cao, X. Y. , Costa, L. Μ. , Biderre-Petit, C. , Kbhaya, B., Dey, N. , Perez, P. ,McCarty,D. R. , Gutierrez-Marcos,J. F. ,Becraft,P. W. ,2007. Abscisic acid and stress signals induce viviparous 1 expression in seed and vegetative tissues of maize. Plant Physiology 143，720-731)的表达载体构建方法，利用 Vp 1 基因自身的启动子，可使Vpl基因特异地在种子中表达。本发明的另一个目的是在于提供了一种Vpl基因及其启动子在小麦穗发芽抗性育种中的应用。Vpl基因在小麦中的表达产物可以补偿小麦Vpl (TaVpl)基因由于错误拼接而丧失的功能，提高ABA信号传递的敏感性，提高小麦种子休眠性和穗发芽抗性；Vpl基因的启动子主要在种子中特异表达，可克服组成型启动子组成型表达的缺陷。为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施利用农杆菌介导，将Vpl基因及其启动子转到小麦中获得抗穗发芽抗性小麦材料，利用这些抗穗发芽新材料培育小麦品种。一种Viviparous 1基因及其启动子的表达载体构建方法，包括以下步骤A、目的基因及其启动子的克隆合成引物VpromoterF (ACAGAATTCGGCGCGCCGTCGACACCATATTTAAGAAC)，Vpromoter R(GCTCCCGGGCAGAGAGGCACGACGACAAA)，以玉米 851213-1 XHE124B 基因组 DNA 为模板，扩增出目的基因Vpl的启动子序列Vpromoter.剥离玉米胚，在含10 μ m ABAMS (Murashige T and Skoog F(1962),A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol Plant 15(3) :473-497)培养基中，200rpm 摇床培养 22_26h，提取 mRNA，反转录合成 cDNA，使用引物 VgCF (CTGGATATCTCTCCTCCCTTTGTCGTCGT)和 VgCR (TTCG AGCTCTGCTCTTTCAGATGCTCACCG)，扩增出 Vpl 基因的编码序列 Vplcds。PCR 产物 Vpromoter 经EcoRI和SmaI酶切后，Vplcds经EcoRV和SacI酶切后连接到pBluescript SK+/-(购自大连宝生物工程有限公司(TaKaRa))，测序。B、载体构建以pBML-PMI载体(张倩，廖玉才，陈方方，董璇，李和平，大肠杆菌6 —磷酸甘露糖异构酶基因的克隆与表达.华中农业大学学报，2006,25(5) =461-464)为基础， Vpromoter和Vplcds经酶切后，与pBML-PMI质粒连接，构建成pBML_PMI_Vpl表达载体。
C、转化根瘤农杆菌pBML-PMI-Vpl表达载体通过电击转化根瘤农杆菌C58C1或GV3101 (购自 invitrogen 公司)(Sambrook 等，分子克隆实验室手册(New York :Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)，用于小麦的遗传转化。一种Viviparous 1基因及其启动子在小麦穗发芽抗性中的应用，其步骤是第一步小麦愈伤组织的诱导取开花后14-16天的小麦幼胚，盾片向上置于诱导培养基(含ang/L 2，4_D的MS) 上诱导愈伤，15-20天继代一次，直到进行遗传转化。第二步愈伤组织与农杆菌共培养根瘤农杆菌C58C1 或 GV3101 在 YEB 培养基(Vervliet,G. ,Holsters,Μ. ,Teuchy, H.，Montagu, Μ. van, Schell, J.，1975.Characterization of different plaque forming and defectivetemperate phages in Agrobacterium strains. J. gen. Virol.26,33-48)中 200rpm, 摇床培养至OD6tltl = 0. 6-0. 8，收集菌体，以浸染培养基(1/10大量元素的MS培养基+ZymAS)重悬，调整OD6tltl = 0.6-0. 8。浸染小麦愈伤，超声波处理20s，摇床摇30min， 铺于滤纸上，当愈伤失水50-70%后，于滤纸上23°C共培2-3d ；第三步抗性愈伤的恢复培养然后转于诱导培养基中恢复培养7d ；第四步抗性愈伤的分化转入分化筛选培养基(MS+0. 5 μ m IAA+1 μ m ΒΑ)中，每14-20天继代一次，第一轮分化筛选培养基加IOg甘露糖，第二轮分化筛选加5g甘露糖。第五步再生植株的生根筛选分化的幼苗转入生根筛选培养基(1/2MS+0. 5 μ m NAA, 15g甘露糖)中。第六步再生植株的春化移栽形成的健壮幼苗春化处理后，种于生长室中。第七步再生植株的鉴定通过对比玉米Vpl 和小麦 TaVpl 基因(Accession no. AJ400712, AJ400713, AJ400714)的 DNA 序列，设计了 Vpl 基因特异的引物 VgF(CAGGACGACATTCACCACCG)， VgR(AACCACTGCCTTGCTCTTGC)经 PCR 鉴定 Vplcds 序列。利用 Ubiquitin 启动子和Riii基因(张倩，廖玉才，陈方方，董璇，李和平，大肠杆菌6—磷酸甘露糖异构酶基因的克隆与表达.华中农业大学学报，2006,25(5) =461-464)序列，设计引物 UbiF (GTTTCTTTTGTCGATGCTCACCC)，PmiF (TCCGGCTTGTGGTTAGGATC)鉴定 Ubiquitin 与 Pmi 连接处的序列。提取开花后8-40天小麦幼胚m RNA,去DNA后反转录成cDNA，VgF, VgR扩增 Vpl特异序列。第八步阳性株系的穗发芽抗性鉴定小麦转基因后代种于生长室中。生理成熟期取各转化株系麦穗进行种子发芽和穗发芽试验。第九步阳性株系种子发育中Vpl基因的表达及受控基因检测提取开花后8-40小麦种子mRNA，通过qRT-PCR分析受Vpl调控基因的表达情况。第十步Vpl基因对成熟小麦种子α _淀粉酶性的调节
提取成熟小麦种子的α -淀粉酶，检测α -淀粉酶活性，比较转基因阳性株系与非转化植株间的差异。第十一步抗穗发芽转基因株系与普通小麦的杂交及后代穗发芽的抗性的鉴定以抗穗发芽转基因株系为父本，普通小麦为母体，进行杂交实验，并对杂交后代进行穗发芽抗性鉴定，评价抗穗发芽转基因株系在杂交育种中的可行性。本发明的优点在于本发明首次通过转基因技术将玉米Vpl基因及其启动子转移到小麦中。本发明获得的阳性株系中，Vpl基因在小麦幼胚中的表达，提高了 ABA信号传递的敏感性，增强了小麦种子的休眠性，从而使获得的转基因阳性材料穗发芽抗性显著提高。因此本发明将玉米 Vpl基因及其启动子转化小麦的方法用于小麦抗穗发芽品种培育中，将减少小麦穗发芽造成的损失。
图1为一种pBML-PMI-Vpl表达载体示意图。Vplcds =Vpl 基因编码序列；Vpl-P =Vpl 基因启动子；Ubi-P =Ubiquitin 启动子· Pmi :phosphate isomerase 基因；SAR :scaffold attachment region.图2为一种PCR鉴定WDiquitin启动子和Riii筛选基因连接序列示意图。M:分子量标记，1 空白对照，2 野生型对照，3-19 不同转基因株系。转基因株系可扩增出特异的目的带，而对照中没有。图3为一种PCR鉴定目的基因Vp Icds序列示意图。M:分子量标记，1 空白对照，2 野生型对照，3-19 不同转基因株系。转基因株系可扩增出特异的目的带，而对照中没有。图4为一种RT-PCR检测Vpl基因在转基因株系开花后20d幼胚中的表达示意图。M 为分子量标记，1 为野生型对照，2-7 为转基因小麦。在转基因小麦幼胚中， Vpl基因能正常表达。图5为一种小麦遗传转化E39阳性株系种子发芽和穗发芽抗性鉴定示意图。Α. E39T2代种子发芽(7d)B.对照种子发芽(7d)C. E39T5代穗发芽(4d)，D.对照穗发芽Gd)。E39的发芽率显著降低，穗发芽抗性显著提高。图6小麦遗传转化E39阳性株系T5代种子发育过程中4个受Vp 1调控基因表达的qRT-PCR分析示意图。A :Wabi5-l ；B :Malate oxidoreductase ；C :Peroxiredoxin ；D :Em_Bl。4^^因的表达水平均显著高于对照，表现出E39株系Vpl调控作用增强。图7为一种小麦转基因阳性株系α -淀粉酶活性测定示意图。与对照相比，转基因各株系α -淀粉酶活性均显著降低。
具体实施例方式实施例1 :目的基因及启动子的克隆和载体构建目的序列克隆与测序依据文献和NCBI公布的序列、合成引物Vpr0m0terF(AC AGAATTCGGCGCGCCGTCGACACCATATTTAAGAAC)， VpromoterR(GCTCCCGGGCAGAGAGGCACGACGACAAA)，以玉米851213-1XHE124B基因组DNA为模板，扩增出目的基因Vpl的启动子序列 Vpromoter.剥离玉米胚，在含IOymABA的MS培养基中，200rpm摇床培养Mh，提取mRNA， 反转录合成 cDNA，引物 VplCF (CTGGATATCTCTCCTCCCTTTGTCGTCGT)和 VplCR(TTCGAGCTCTGC TCTTTCAGATGCTCACCG)，扩增出 Vpl 基因的编码序列 Vplcds。PCR 产物 Vpromoter 经 EcoRI 和SmaI酶切后，Vplcds经EcoRV和&icl酶切后连接到pBluescript SK+/-，测序。测序表明VPl启动子与NCBI公布的序列为97%的同源性，编码序列与NCBl序列完全一致。载体构建以pBML-PMI载体(张倩，廖玉才，陈方方，董璇，李和平，大肠杆菌6 — 磷酸甘露糖异构酶基因的克隆与表达.华中农业大学学报，2006，25 (5) =461-464)为基础， Vpromoter序列经SmaI酶切和AscI部分酶切，Vplcds经EcoRV和SacI酶切后，与经AscI 和Mel酶切的pBML-PMI质粒连接，构建成pBML-PMI-Vpl表达载体。测序分析表明载体 pBML-PMI-Vpl 构建正确(图 1)。转化根瘤农杆菌pBML-PMI-Vpl表达载体通过电击转化根瘤农杆菌C58C1或 GV3101(购自invitrogen公司)(Sambrook等，分子克隆实验室手册(New York CoId Spring Harbor Laboratory Press, 1989),用于小麦的遗传转化。实施例2 农杆菌介导的Vpl基因在小麦中的遗传转化郑9023 (河南省农科院小麦所选育)和鄂麦13 (湖北省农科院选育)种植于实验田中，取开花后14-16天的小麦幼胚，盾片向上置于诱导培养基(含ang/L 2，4-D的MS)上诱导愈伤，15-20天继代一次，直到进行遗传转化。根瘤农杆菌C58C1或GV3101，在YEB培养基中200rpm，摇床培养至0D_ = 0. 6-0. 8，收集菌体，以浸染培养基(1/10大量元素的MS培养基+2 μ mAS)重悬，调整OD6tltl = 0. 6-0. 8。浸染小麦愈伤，超声波处理20s，摇床摇30min，铺于滤纸上，当愈伤失水50-70%后，于滤纸上23°C共培2_3d，然后转于诱导培养基中恢复培养7d后，转入分化筛选培养基(MS+0. 5 μ mIAA+1 μ mBA)中，每14-20天继代一次，第一轮分化筛选培养基加IOg甘露糖，第二轮分化筛选加5g甘露糖。分化的幼苗转入生根筛选培养基(1/21^+0.5口!11織4，158甘露糖)中。形成的健壮幼苗春化处理后，种于生长室中。实施例3 抗性植株的鉴定利用Ubiquitin启动子和Pmi基因序列，设计引物 UbiF (GTTTCTTTTGTCGATGCTCACCC)，PmiR(TCCGGCTTGTGGTTAGGATC)，扩增 ubiquitin 启动子和Riii之间连接处的序列(图2)，通过对比玉米Vpl和小麦TaVpl基因的DNA序列，设计了引物 VgF (CAGGACGACATTCACCACCG)，VgR(AACCACTGCCTTGCTCTTGC)，PCR 特异扩增 Vplcds 序列(图3)。PCR结果表明平均转化效率为5.4%。实施例4 转基因株系的穗发芽抗性鉴定和筛选小麦转基因后代种于生长室中，IMi光照，18-20°C。生理成熟期取各转化株系麦穗进行种子发芽和穗发芽试验。种子发芽鉴定，手工脱粒，种子置于9cm培养皿，两层滤纸，种子腹沟向下，加5ml蒸馏水，20°C萌发，逐日记录萌发种子数，然后计算发芽势，发芽势为萌
发GI = (7ηι+6η2+......+1η7) /7N. H1......n7分别为第1天到第7天的发芽种子数，N为种
子总数。穗发芽鉴定，生理成熟期每株系取5-6个麦穗直立于花泥中，每4小时自动喷雾1 次，4天后天统计穗发芽率和平均发芽度，发芽度依据1984年标准(Hagemarm，Μ. G.，Ciha, A. J. , 1984. Evaluation of methods msed in testing winter wheat susceptibility topreharvest sprouting. Crop Science 24,249-254).小麦转化后代中，郑麦9023 78%株系，鄂麦13 90%以上的株系种子发芽势和穗发芽低于对照小麦，其中郑麦9023中有5个株系表现出明显穗发芽抗性。对这些株系的 T2-T5代种子发芽实验表明，这些株系抗性稳定，每一世代均显著低于对照，达到高抗水平 (表1，图5A，B)。对这5个株系T5代穗发芽鉴定表明，穗发芽度显著下降(表1，图5C，D)。 这些结果证明，转Vpl基因提高了小麦穗发芽抗性，可作为穗发芽抗性的遗传资源。表1.转基因株系T2-T5代种子发芽势和T5代穗发芽度分析
权利要求
1.一种Viviparous 1基因及其启动子的表达载体构建方法，其步骤是A、目的基因的克隆合成引物VpromoterF、VpromoterR以玉米851213-1 XHE124B基因组DNA为模板，扩增出目的基因Vpl的启动子序列Vpromoter.剥离玉米胚，在含IOym ABA MS培养基中， 200rpm摇床培养22_2他，提取mRNA，反转录合成cDNA，使用引物VgCF和VgCR，扩增出Vpl 基因的编码序列Vplcds，PCR产物Vpromoter经EcoRI和SmaI酶切后，Vplcds经EcoRV和 SacI酶切后连接到pBluescript SK+/-，测序；B、载体构建以pBML-PMI载体为基础，Vpromoter和Vplcds经酶切后，与pBML-PMI质粒连接，构建成pBML-PMI-Vp 1表达载体；所述的引物 VpromoterF :ACAGAATTCGGCGCGCCGTCGACACCATATTTAAGAAC ； 所述的引物 VpromoterR GCTCCCGGGCAGAGAGGCACGACGACAAA ； 所述的引物 VgCF CTGGATATCTCTCCTCCCTTTGTCGTCGT ； 所述的引物 VgCR TTCGAGCTCTGCTCTTTCAGATGCTCACCG
2.权利要求1所述的一种Viviparous1基因及其启动子在小麦穗发芽抗性育种中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种Viviparous1基因及其启动子表达载体的构建方法和应用，其步骤A、目的基因及其启动子的克隆合成引物VpromoterF、VpromoterR以玉米851213-1×HE124B基因组DNA为模板，扩增出目的基因Vp1的启动子序列Vpromoter.剥离玉米胚，在含10μmABA MS培养基中，摇床培养，提取mRNA，反转录合成cDNA，引物VgCF和VgCR，扩增出Vp1基因的编码序列Vp1cds，PCR产物经酶切后连接到pBluescript SK+/-，测序；B、载体构建以pBML-PMI载体为基础，Vpromoter和Vp1cds经酶切后，与pBML-PMI质粒连接，构建成pBML-PMI-Vp1表达载体。C、Viviparous 1基因及其启动子在小麦穗发芽抗性育种中的应用。利用农杆菌介导，转化小麦愈伤，获得转基因小麦。提高了ABA信号传递的敏感性，增强了小麦种子的休眠性，获得的转基因阳性材料穗发芽抗性显著提高。
文档编号A01H5/00GK102321657SQ20111026778
公开日2012年1月18日 申请日期2011年9月9日 优先权日2011年9月9日
发明者廖玉才, 李和平, 瞿波, 黄涛 申请人:华中农业大学