专利名称：一种抗菌化合物的制备方法
技术领域：
本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种抗菌化合物的制备方法。
背景技术：
近年来，随着现代医疗水平的提高，癌症、艾滋病、器官和骨髓移植等病人的存活 率大大上升，但是这些患者由于经常使用大剂量抗生素、抗肿瘤药物、激素、免疫抑制剂等 药物，以及化疗和静脉插管、血液透析等介入性治疗，造成免疫力下降，极易被本来不显病 原性的条件致病真菌侵入造成深部真菌病(Systemic fungal infection)。近年来这种严 重威胁生命的真菌感染呈快速增长趋势，患者人数不断增加。在临床上，随着真菌感染率的上升，对抗真菌药物的使用率提高了，随之而来耐药 菌株也不断增多，给临床的治疗带来一定的困难。而抗真菌新药相对于抗细菌感染药而显 得滞后，因此寻找安全、高效、低毒、广谱的新型抗真菌物质已越来越引起人们的重视。造成深部真菌病的病原菌主要为念珠菌属和曲霉属，其中白色念珠菌(Candida albicans)是一类主要的病源真菌，可感染人体许多部位，包括内脏及中枢神经。它是造成 医院血液感染的主要原因，在伤口和体液中感染时具有很强的致死性，而且临床研究发现 其致死率并不随常规抗真菌药物的使用而下降。侵入性真菌感染现象尽管相对较为少见，但其总发病率在过去的20年内节节攀 升。据Datamonitor预测，到2010年，在900万高危疾病患者中，有120万患者将面临真菌 感染的威胁。过去，真菌感染一般只发生在特定的亚群患者中，然而随着化疗、移植、HIV/ ADIS感染或糖尿病等免疫受损患者数量的增多，尤其对接受长期治疗的患者来说，真菌感 染的高发危险使抗真菌治疗受到了越来越广泛的关注。由于侵入性真菌感染(IFIs)的预 防和治疗领域正逐渐向接受化疗、移植以及HIV/ADIS或糖尿病患者等人群扩展，这也预示 了抗真菌药物市场潜力的巨大。抗真菌药物市场是一个成熟的市场，然而从产品的类别和数量来看，抗真菌药 却远不如其他抗菌药物那样多而全面。世界上第一种抗真菌药是于20世纪50年代 问世的，然而一直到1978年，市场上可用于治疗全身性真菌感染的药品仅为两性霉素 B(amphotericins B, Am B)、制霉菌素(nystatin)和氟胞嘧啶(flucytosine)等 3 种。在 其后的几十年里，虽然也有数十种抗真菌药上市，但是真正占市场主导地位的广谱抗真菌 药却只有为数不多的几种。近10年来(1996 2005)，各国报道的新抗真菌抗生素约有174 种，化学结构多达30余个类型，其中有一部分抗生素专抗植物真菌，而大多数抗动物真菌 的抗生素或因抗真菌谱过窄，体内活性微弱，或因细胞毒性较强等，天然物本身与经过结构 修饰的产物，具有发展前景者不多。目前临床上常用的抗真菌药物按其作用机理可分为三大类1)干扰真菌核酸合 成药物，如灰黄霉素和氟胞嘧啶等，这类药物由于毒性大，抗菌谱窄、复发率高等问题，目 前已很少使用。2)干扰真菌细胞膜麦角固醇合成的药物，如多烯类抗生素(两性霉素B、 制霉菌素等)、唑类化学合成药(如伊曲康唑、氟康唑等)和丙稀胺类抗生素(特比萘芬(Terbinafine)和萘替芬(Naftifine)等)。然而，两性霉素B抗菌效果好，抗菌谱广，是最 常用的抗真菌药物，但由于具有肾毒性而大大限制其应用；唑类药物也是有效的抗真菌药 物，该类药物的开发从第一代的克霉唑已经到了第三代的氟康唑和伊曲康唑等，毒性较小， 有较宽的抗菌谱，但其抗菌活性明显低于两性霉素且易产生耐药性；特比萘芬对深部真菌 感染无效。3)抑制0-(l，3)-D葡聚糖合成酶的药物，如Meek公司2001年上市的新药卡泊 芬净(Caspofimgin)以及藤泽药品2002年上市的米卡芬净(Micafimgin)等，这类药物能 抑制真菌细胞壁合成必需的0-(l，3)-D葡聚糖合成酶，有很好的应用前景。此外，外用疗 法已能治愈大多数浅部真菌病患者，但是能治疗深部真菌病的药物还很少，有些病仍然没 有有效的治疗方法。枯草芽孢杆菌(Bacillus sp.)是自然界中广泛存在的一种非致病性细菌，能产生 多种抗真菌和细菌的代谢物，其中脂肽类、肽类、磷脂类为主要类型，它们对致病菌和内源 性感染的条件致病菌都具有明显的抑制作用。
发明内容
本发明提供了一种抗菌化合物的制备方法，该工艺简单，易于实现，化合物易分
离、纯化。一种枯草芽孢杆菌菌株，命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ZJU007，保藏 于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所的中国普通微生物菌种保藏 管理中心(CGMCC)，保藏号为CGMCCNo. 4140，保藏时间2010年9月3日。上述菌株主要生物学特征为菌落颜色是灰色边缘为白色，菌落形态较圆整，表面 有褶皱突起，直径大小为中型(约2mm左右)，菌株产芽孢的时间在培养3天达到高峰，4天 完全成熟。一种生产如式(1)所示化合物的方法，包括将枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)GMCC No. 4140接种至发酵培养基中，培养12 60小时，分离，纯化。
权利要求
一种生产如式(1)所示化合物的方法，包括将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GMCC No.4140接种至发酵培养基中，培养12～60小时，分离，纯化。FDA0000029634860000011.tif
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的培养温度为26 36°C。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的发酵培养基pH为5 9。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtil is) GMCC No. 4140制成种子液后接种到发酵培养基中。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述种子液的接种量为2% 12%。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的培养为摇床振荡培养，培养条件 为培养温度28°C、发酵培养基pH值6. 5、摇床转速200r/min、培养时间36h。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的发酵培养基重量百分比组成为黄 豆粉0. 1 1%，可溶性淀粉1 5%，酵母粉0. 5 2%，K2HP04 0 . 05 0. 2%，NaCl 0. 1 0. 3%, MgS04 0 . 001 0. 01%, FeS040. 001 0. 005%，余量为水。
全文摘要
本发明公开了一种抗菌化合物的制备方法，包括将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GMCC No.4140接种至发酵培养基中，培养12～60小时，分离，纯化。该抗菌化合物对白色念珠菌的抑制作用十分强烈，比目前常用的制霉菌素有更好的抑菌效果。该抗菌化合物不仅对白色念珠菌等酵母类真菌有强烈的抑菌效果，而且对黑曲霉等丝状真菌也有很好的效果，同时对大肠杆菌等细菌也有较好的抑菌效果。本发明方法生产的抗菌化合物效价高，工艺流程简单，抗菌物质易分离纯化。
文档编号C12N1/20GK101979629SQ201010521200
公开日2011年2月23日 申请日期2010年10月27日 优先权日2010年10月27日
发明者吴绵斌, 张书衍, 贺娟, 陈正杰 申请人:浙江大学