专利名称：激酶抑制剂及其使用方法
激酶抑制剂及其使用方法
0001本申请要求2006年1月31日申请的美国临时专利申请号 60/763,712的权益，该临时专利申请通过引用全部结合到本文中。
背景技术：
1. 发明领域 p38 (亦称CSBP或RK)是一种已被/〖正明是调节促炎细胞因 子的丝氨酸/苏氨酸促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)。 p38 MAPK最初 被鉴定为在脂多糖(LPS)处理后小鼠单核细胞中使酪氨酸磷酸化的激酶。Saklatvala等人(Ce〃， 1994， 78:1039-1049)最早证实p38 MAPK与 细胞响应细胞因子之间的关系，他们指出IL-1可能通过促分裂原活化 蛋白激活蛋白激酶2 (MAPKAP激酶-2),从而激活导致小分子热休克 蛋白Hsp27磷酸化的蛋白激酶级联。对得自纯的激酶的肽序列进行分 析后表明，在小鼠单核细胞中它与由LPS激活的p38 MAPK有关(Han, 丄等，5We"ce， 1994, 265:808-811)。同时，还表明在响应多种细胞应激(包 括暴露于UV辐射和渗压震扰)时，p38 MAPK通过上游激酶而自我激 活，而且直接使Hsp27磷酸化的激酶根据结构被证实是MAPKAP激 酶-2 (Rouse, J.等，Ce〃， 1994, 78:1027-1037)。随后，有研究显示p38 MAPK是一系列吡啶基咪唑化合物的分子乾标，这些化合物抑制由 LPS攻击的人单核细胞产生TNF (Lee, J.等，A/<^w", 372:739-746)。这 是一个关键性的发现，导致了对p38 MAPK的各种选择性抑制剂的开 发，以及对其在细胞因子信号转导中的作用进行阐述。其中pz表示氢或羟基保护基。给予哺乳动物的本发明化合物的量将根据例如具体化合 物、疾病病况及其严重程度、需要治疗的哺乳动物的特征(例如体重) 等因素而改变，但是尽管如此仍可由本领域技术人员按常规方法确 定。可通过适于待治疗疾病的任何途径给予本发明的化合物。 合适的途径包括口服、胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、真 皮内、鞘内和硬膜外)、经皮、直肠、经鼻、局部(包括口腔和舌下)、 阴道、腹膜内、肺内和鼻内。应当理解的是，所用的给药途径可随例 如接受治疗者的疾病而改变。如果口服给予本发明的化合物，则它可 与药学上可接受的载体或赋形剂一起配制成丸剂、胶嚢剂、片剂等。 如果经胃肠外给予本发明的化合物，则它可与药学上可接受的胃肠外 溶媒一起，以单位剂量可注射形式配制，有关详情见下文。
药物制剂为了使用本发明的化合物以治疗性治疗(包括预防性治疗) 包括人在内的哺乳动物，通常依照标准制药规程制成药物组合物。本 发明这一方面提供包含本发明化合物以及药学上可接受的稀释剂或 载体的药物组合物。通过吹入法给药的组合物可以是微细粉的形式，含有平 均直径为例如30|im以下的颗粒，粉末本身包含单独的活性成分，或 者用一种或多种生理上可接受的载体(例如乳糖)稀释。然后可方便地 将用于吹入法的粉末保留在含有例如l-50mg活性成分的胶嚢中用于 涡轮式吸入装置(turbo-inhaler device),例如用于已知药物色甘酸钠的 吹入法给药。可根据给药所采用的方法以多种方式对将使用的药物组 合物(或剂型)进行包装。例如用于配送的产品可包括在其中以适当的形式存放药物制剂的容器。合适的容器是本领域技术人员熟知的，包 括例如瓶子(塑料和玻璃)、小袋、安瓿、塑料袋、金属瓶等容器。容 器还可包括防拆封的装置以防止不慎接触到包装内容物。另外，容器 上还可张贴描述容器的内容物的标签。标签还可包括适当警示。制剂 也可以单位剂量容器或多剂量容器(例如密封安瓿和小瓶)包装，并可 在冷冻干燥(冷干)条件下保存，临用前只需加入无菌液体载体(例如水) 便可用于注射。由上述各种无菌粉剂、颗粒剂和片剂来配制现配现用 的注射溶液剂和混悬剂。优选的单位剂量剂型是含有上述日剂量或单 位日分剂量的或其适当部分的活性成分的剂型。用100 iil反应物在室温下进行了 p38活性测定，反应物 含有5 nM活化的p38ot酶和25 mM HEPES (pH 7.4)、 100 pM钒酸盐、 1 mM DTT、 10 mM MgCl2和10 jiM [y-33P]-ATP (~0.1 pCi P"/反应物) 中的l pMATF-2(转录激活因子2融合蛋白)作为底物。30-40分钟后， 加入25% TCA终止反应，使之静置5分钟后，直接转移到GF-B膜滤 板上。采用Tomtec Mach III自动收获器，滤板用0.5°/。磷酸洗涤两次 达30秒钟。洗涤后，继续保持真空30秒钟使滤板干燥。向滤板各孔 中加入大约30 |il闪烁液，然后用液体闪烁计数器(Packard TopCount HTS)读数。
实施例B PBMC测定法巧l哚啉-2-酮)处理60分钟，然后用20 ng/ml VEGF刺激5分钟。 制备出不同处理的裂解物，用对在Tyrl175上磷酸化的VEGFR2特异 性的抗体进行了免疫印迹。然后用LI-COR Aeriustm成像仪，对所得 化合物72和对照抑制剂VEGFRl的印迹成像，并进行了定量。将磷 酸-VEGFR2信号归一化至GAPDH作为加样对照。然后运用4参数曲 线拟合方案，用这些数值计算出化合物72和对照VEGFR2抑制剂 VEGFRl的IC5o值。 —般在氮气或氩气的正压下或者用干燥管(除非另有说明) 在无水溶剂中进行下列反应，反应瓶通常配有橡胶塞以便通过注射器 注入底物和试剂。玻璃器皿经烤箱烘干和/或加热烤干。步骤A: 2-(千氧基)-5-氟千腈62的制备在氮气氛、冰 浴中，在装有机械搅拌器和测温探头的12 L四颈圆底烧瓶中，于30 分钟内通过滴液漏斗将氬化钠(74 g， 1.82 mol)的DMF (1.95 L)悬浮液 慢慢加到苯曱醇(142g， 1.3mol)中。在冰浴(0。C)中将混合物搅拌120 分钟，通过滴液漏斗在35分钟内加入2,5-二氟苄腈(180 g, 1.3 mol) 的DMF (650 ml)溶液。使所得混合物升温至室温。2小时后，将混合 物在冰浴(4。C)中冷却，用饱和NH4C1 (130 ml)猝灭后加入水(2.6 L x 3)。将浆状物在室温下搅拌过夜，沉淀物经过滤后用水(650 mlx3)洗 涤。将固体真空干燥2天，得到292g(99.3。/。)所需化合物。'HNMR(400 MHz， DMSO-d6) 5 7.78 (dd, 1H， 《/= 3.2 Hz， 8.2 Hz), 7.5-7.76 (m, 1H),7.35-7.48 (m, 6H), 5,28 (s, 2H)。步骤D: 2-(3-氨基-4-曱基苯氧基)-5-千腈65的制备在 装有机械搅拌器、冷凝器和J-Kem测温探头的四颈12000 ml圓底烧瓶 中，加入2-(3-氨基-4-曱基苯氧基)-5-苄腈(247 g， 907 mmol)和锌粉(297 g， 4.5 mol)并悬浮于1:1 MeOH/THF (2.2 L)中。通过加料漏斗在40分 钟内慢慢加入NH4C1饱和水溶液(l.6 L)(保持内部温度在60°C以下)。 使反应混合物冷却至室温，并在室温下搅拌1小时。经过滤除去锌粉， 滤饼用EtOAc (450 ml x 3)洗涤。加入NH4OAc饱和水溶液(1500 ml，由2 kg NH4OAc与4 L H20制备)和H20 (1500 ml x 2)。滤液通过旋转 蒸发浓缩直到余留的大多为水。黄褐色固体经过滤后用H2O(1500 ml x 4)洗涤，经真空干燥，得到211.5 g (96%)所需化合物。测得MS (APCI +) w/z 243 (M+l)。 'H醒R (400 MHz, CDC13) 3 7.38 (m， 1H), 7.18 (m， IH)， 6.65-6.85 (m， 5H), 3.60 (br, 2H), 2.17 (s, 3H)。步骤L:磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对曱苯基-1//-吡唑-5-基)脲基)曱基)-4-氟苯氧基)-1//-吲唑-1-基)乙酯74的制备将 磷酸二千酯 2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-l-对曱苯基-lH-吡唑-5-基)脲基)曱 基)-4-氟苯氧基)-lH-吲唑-l-基)乙酯(1.920 g， 2.35 mmol)悬浮于EtOH (0.05M， 50 ml)和环己匿1,4-二烯(3.56 ml， 82.14 mmol)中，加入10% Pd/C (20% (重量)，0.384 g)。将反应混合物回流过夜。将反应混合物通过 GF纸过滤后用MeOH洗涤。使有机层减压浓缩，得到粗产物，使之溶于MeOH，并通过Gellman acrodisk (0.45 um)过滤器以除去痕量4巴 污染物。溶剂蒸发后，将所得胶状物在CH3CN中研磨，经过滤收集 所形成的固体，高真空下干燥3小时，得到1.21 g(89。/。)所需化合物。 测得MS (APCI +) m/z 637 (M+l)。 &画R (400 MHz, CDC13) 5 8.30 (s, 1H)， 8.00 (s, 1H)，7.71 (d， lH，《/ = 9Hz)， 6.88-7.37 (m, IOH)， 6.24 (s, 1H): 4.61 (br, 1H), 4.28 (d， 2H， J = 5.7 Hz), 4.19 (dd， 2H， / = 5.2 Hz)， 2.35 (s， 3H), 1.25 (s, 9H)。
实施例3
l-f3-叔丁基-l-对曱苯基-lH-吡唑-5-基)-3-((5-氟-2-(l-(2-羟乙基)-lH-吲唑-5-基氧基)苯基)曱基)脲(72)的制备方法2步骤H:磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对曱苯基-1//-吡唑-5-基)脲基)曱基)-4-氟苯氧基)-1//-吲唑-1-基)乙酯74的制备在 室温下，磷酸二叔丁酯 2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-l-对曱苯基-lH-吡唑-5-基)脲基)曱基)-4-氟苯氧基)-lH-吲唑-l-基)乙酯(3.66 g, 4.89 mmol)的 EtOH (0.2M, 24 ml)溶液用5N HCl/iPrOH (2.93 ml， 14.7 mmol)处理。 在室温下连续搅拌过夜。将溶剂真空蒸发，残余物从曱苯和乙醚(2x) 共蒸发出来。将浅褐色泡沫状物溶于MeOH后，慢慢倒入装有水的烧 杯中。经过滤收集析出的固体，得到2.83g(91。/。)所需产物。测得MS (APCI +) w/z 637 (M+l)。 'H画R (400 MHz, DMSO-d6) 5 8,30 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.71 (d， 1H， 《/ = 9 Hz)， 6.88-7.37 (m, 10H), 6.24 (s, 1H)， 4.61 (br， 1H), 4.28 (d， 2H， 《/ = 5.7 Hz), 4.19 (dd， 2H， 《/ = 5.2 Hz), 2.35 (s, 3H)， 1.25 (s， 9H)。
实施例5<formula>formula see original document page 62</formula>5-氟-2-(l-(2-羟乙基)-lH-吲唑-5-基氣基)苄腈(78A)
在90分钟内，分五个批次按每次约5克向2-(5-(2-氰基-4-氟苯氧基)-lH-P引唑-l-基)乙酸曱酯77 (按实施例3制备)(60.0 g， 18《4 mmol)的MeOH (370 ml)溶液中加入NaBH4 (24.42 g)。最后一次加入 NaBH4时，将温度由25t:升至44.7。C。将混合物真空浓缩。向浓缩物 中加入饱和丽4C1 (600 ml)和EtOAc (600 ml),将混合物剧烈搅拌1 小时。分离各层，水层用EtOAc(2X 100ml)萃取。合并的有机物用饱 和NH4C1(2X 100ml)、水(200 ml)、盐水(500 ml)洗涤，经MgS04干 燥，通过GF/F纸过滤后浓缩成戌橙色固体。将粗制固体溶于CH2C12 (1 L)，搅拌下加入己烷(2.25 L)。得到浅褐色固体，搅拌30分钟后收集 固体，高真空下干燥，得到45.5g产物。将滤液减压浓缩后，将产物 重新溶于CH2C12 (100 ml)，加入己烷(200 ml)。经过滤收集所得固体(6.2 g)。合并两次产物，得到51.7 g (94.3%) 78A。 ！H NMR (400 MHz, CDC13) 5 7.99 (s, IH)， 7.49 (d, 1H), 7.39-7.36 (m, 2H), 7.21-7.16 (m， 2H)， 6.90 (dd, IH)， 4,49 (t, 2H)， 4.17-4.13 (m， 2H), 2.81 (t， IH)。
[00196向250 ml帕尔(Parr)摇瓶中加入5-氟-2-(l-(2-羟乙 基)-lH-P引唑-5-基氧基)千腈78A (按实施例5制备)(80.0 g， 269.1 mmol)、 Pd(OH)2 (32 g， 40%装载)、EtOH (5 L)和浓HC1 (224 ml， 2691 mmol)。将容器密封，用氢气吹洗，排气后充入氢气至180PSI。将内
实施例6<formula>formula see original document page 63</formula>2-(5-(2-(氨甲基)-4-氟苯氧基VlH-吲唑-l-基)乙醇(79A)
(方法A)部温度降至18。C，搅拌23小时后，用HPLC确定反应完全情况。取 出上述反应混合物，依次用80g原料和53.2g原料各重复整个顺序两 次。合并的反应混合物(4次反应)通过GF/F过滤，将滤液减压浓缩。 将残余物溶于1NHC1(3.0L)，用EtOAc(3X2L)洗涤。向水层中加入 EtOAc (2 L),将各相剧烈搅拌IO分钟后，除去有机层。将这一步骤 重复多两次后，将水相转移到冷却的烧瓶(冰浴)中。向酸性含水混合 物中加入NaOH颗粒(40 g x 11),按不使温度升至35°C以上的方式加 入。 一旦pH达 14时，将混合物转移到分液漏斗，用CH2C12(4X 1L) 萃取。合并的萃取物用水(2 X 1 L)和盐水(2 X 1 L)洗涤。萃取物经 MgS04 (~250 g)干燥，通过GF/F过滤后减压浓缩。将浓缩物溶于 CH2C12(3.5L)，加入己烷(4L)。先加入2L己烷时，得到褐色固体。 搅拌l小时后，经过滤收集固体，滤饼用1:2 CH2Cl2/己烷(500 ml)洗 涤。将滤饼真空干燥，得到165.1 g (55.6%) 79A。 'HN匿(400MHz， CDC13) S 7.90 (s， 1H), 7.42 (d, 1H)， 7.17-7.12 (m, 3H)， 6.87 (td, 1H)， 6.80 (dd, 1H), 4,46 (t， 2H), 4.12 (t, 2H), 3.86 s (2H), 1.87 (brs， 1H)。
[00197向(5-氟-2-(1-(2-羟乙基)-旧-吲唑-5-基氧基)千腈(1.0 g， 3.36 mmol)和NiCl26H20 (148 mg， 0.336 mmol)与MeOH (30 ml)的溶 液中分批(2-3次)加入NaBH4 (636 mg， 16.8 mmol)，将反应物搅拌3 小时。慢慢加入饱和Na2C03溶液(15ml)，将混合物搅拌75分钟，期
实施例7
2-(5-(2-(氨甲基V4-氟苯氣基)-lH-吲唑-l-基)乙醇(79A)
f方法B)间形成微细固体。使反应混合物通过GF/F过滤，滤饼用MeOH(20ml) 洗涤。使滤液真空浓缩至约15 ml，加入乙酸异丙酯(20 ml)，使混合 物浓缩。向浓缩物中加入乙酸异丙酯(20ml)，将混合物搅拌5分钟。 分离各相，有机层用10。/。盐水(20ml)洗涤。加入柠檬酸(0.1M， 20 ml) 后，使两相充分混匀。除去有机层，水溶液用乙酸异丙酯(20 ml)和 EtOAc (20 ml)洗涤。向水层中加入乙酸异丙酯(20 ml)和50°/。NaOH(l ml)。使各相充分混匀后除去水溶液。有机物用10。/。盐水(20ml)洗涤， 经Na2S04干燥后浓缩至850 mg (85%)。
3-叔丁基-l-对曱苯基-lH-吡唑-5-基M曱酸苯酯 [00198在10.9。C下，向3-叔丁基-l-对曱苯基-lH-吡唑-5-胺(102,9 g， 448.9 mmol)的EtOAc (1 L)溶液中加入NaOH溶液(2.5 M, 269 ml)， 将两相反应混合物加热至15.9。C后保持稳定。 一次性加入氯曱酸苯酯 (98.4 g， 156.5 mmol),将温度升至25.5。C后保持稳定。移开冰浴，反 应物用HPLC监测。l小时后，另加入25 ml 2.5 MNaOH。将反应混 合物搅拌过夜后，用EtOAc (200 ml)稀释。有机层用盐水(l L)洗涤， 经Na2S04 (200 g)干燥后浓缩至约400-500 ml EtOAc。将浓缩溶液加热 至60。C。固体溶解后，慢慢加入庚烷(2 L)，期间形成固体。搅拌30 分钟后，经过滤收集固体，滤饼用400-500 ml庚烷洗涤。将滤饼在环
境温度下于真空炉中干燥，得到156.9 g(95.0。/。)标题化合物。'HNMR (400 MHz, CDC13) 5 7,39-7.31 (m， 6H), 7.26-7.225 (m， 2H), 7.13 (br s， 2H), 6.96 (br s, 1H)， 6.47 (br s, 1H), 2.42 (s, 3H), 1.34 (s, 9H)。
实施例8实施例9
<formula>formula see original document page 66</formula>
l画f3-叔丁基-l-对甲苯基-lH-吡唑-5-基)-3-(5-氟-2-(l-(2-羟乙基)-lH-P引
唑-5-基氣基)苄基)脲(72) [00199向2-(5-(2-(氨曱基)-4-氟苯氧基)-lH-吲唑-l-基)乙醇 (71.55 g， 237 mmol)的DMA (350 ml)溶液(4.1。C)中加入3画叔丁基-l-对曱苯基-lH-吡唑-5-基氨基曱酸苯酯(80.5 g， 230 mmol)的DMA (350 ml)溶液。将温度升至18.4'C后保持稳定。移开冰冷，将反应物搅拌2 小时。加入另一份2-(5-(2-(氨甲基)-4-氟苯氧基)-lH-吲唑-l-基)乙醇后 将反应物搅拌2小时。使反应混合物在乙酸异丙酯(1.6 L)与水(2.4 L) 之间分配。除去水层，有机层依次用0.5 NNaOH (2X2.4 L)和饱和盐 水(l X2.4L)洗涤。有机层经Na2SO4 (300 g)干燥后浓缩，得到110.8 g (86.6%)产物。
[00200以上描述仅被视作本发明原理的示例性描述。此外，由 于许多修改和变动对本领域技术人员是极为显而易见的，因此不得将 本发明局限于如上所示的精确解释和方法。因此，所有适当的修改和 等同内容均可归于落入本文所附权利要求书中所限定的本发明的范 围之内。
术语"包含"、"含有"和"包括"当用于本说明书及所附权利 要求书中时，是指存在具体记载的特征、整体、组分或步骤，但是并 不排除其它未指出的一种或多种其它特征、整体、组分、步骤或组别。
权利要求
1. 具有下式I的化合物或其药学上可接受的盐
2. —种用于制备权利要求l中所限定的化合物的方法，该方法包(a)使下式II的化合物或其盐<formula>formula see original document page 2</formula>II与下式III的化合物偶合:<formula>formula see original document page 2</formula>III式ii中，p'表示氢原子或羟基保护基，式in中，z表示离去基团或 相应的异氰酸酯基；或者(b)使下式iv的化合物还原<formula>formula see original document page 3</formula>其中Re表示醇残基的氢原子；然后脱去任何保护基，且如有需要，则制成药学上可接受的盐。
3. —种药物组合物，其包含权利要求1的化合物和药学上可接受 的载体或稀释剂。
4. 用作药物的权利要求1的化合物。
5. 权利要求1的化合物在制备用于治疗哺乳动物的激酶介导的 疾病的药物中的用途。
6. 权利要求5的用途，其中所述激酶介导的疾病是炎性疾病、自 身免疫性疾病、破坏性骨病、增殖性疾病、感染性疾病、病毒性疾病 或神经变性性疾病。
7. —种治疗哺乳动物的激酶介导的疾病的方法，该方法包括按有 效治疗所述激酶介导的疾病的量给予哺乳动物权利要求1的化合物。
8. 权利要求7的方法，其中所述激酶介导的疾病是炎性疾病、自 身免疫性疾病、^皮坏性骨病、增殖性疾病、感染性疾病、病毒性疾病 或神经变性性疾病。
9. 一种下式ii的化合物或其盐<formula>formula see original document page 4</formula>II其中P'表示氢原子或羟基保护基'
10. —种下式IV的化合物<formula>formula see original document page 4</formula>IV其中Re表示氢原子或醇残基。
11. 权利要求1的化合物的前药在制备用权利要求1的化合物治 疗哺乳动物的激酶介导的疾病的药物中的用途。
12. 权利要求11的用途，其中所述前药是磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对曱苯基-1//-吡唑-5-基)脲基)曱基)-4-氟苯氧基)-1//-吲唑-1-基)乙酯或其药学上可接受的盐。
13. 权利要求11或12的用途，其中所述激酶介导的疾病是炎性 疾病、自身免疫性疾病、 -坡坏性骨病、增殖性疾病、感染性疾病、病 毒性疾病或神经变性性疾病。
14. 一种用权利要求1的化合物治疗哺乳动物的激酶介导的疾病的方法，该方法包括按有效治疗所述激酶介导的疾病的量给予哺乳动 物权利要求1的化合物的前药。
15. 权利要求14的方法，其中所述激酶介导的疾病是炎性疾病、 自身免疫性疾病、破坏性骨病、增殖性疾病、感染性疾病、病毒性疾 病或神经变性性疾病。
16. 权利要求14或15的方法，其中所述前药是磷酸二氢 2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对曱苯基-1//-吡唑-5-基)脲基)曱基)-4-氟苯氧 基)-1/7-p引唑-1 -基)乙酯或其药学上可接受的盐。
17. 磷酸二氢2-(5-(2-((3-(3-叔丁基-1-对曱苯基-1//-吡唑-5-基)脲 基)曱基M-氟苯氧基)-l/Z-吲唑-l-基)乙酯或其药学上可接受的盐。
18. —种用于制备权利要求17中所限定的化合物的方法，该方法 包括使权利要求1中所限定的化合物磷酸化。
19. 一种药物组合物，其包含权利要求17的化合物和药学上可接 受的载体或稀释剂。
20. 权利要求2的方法，其中Z为任选净皮一个或多个选自F、 Cl、 Br和N02的基团取代的芳氧基。
21. 权利要求2的方法，其中所述式(II)化合物通过以下方法制备(i)在催化氩化条件下或在硼化镍存在下，使下式(V)的化合物还原<formula>formula see original document page 5</formula>其中pz表示氢或羟基保护基。
22.下式III的化合物<formula>formula see original document page 6</formula>III其中z表示未取代或取代的芳氧基。
全文摘要
式(I)化合物及其药学上可接受的盐和前药可用于治疗和预防由激酶介导的各种疾病。
文档编号A61P29/00GK101415685SQ200780012019
公开日2009年4月22日 申请日期2007年1月26日 优先权日2006年1月31日
发明者C·T·厄利, D·哈维, D·沃森, E·莱尔德, J·里齐, L·E·伯吉斯, M·罗德里古兹, M·芒森, R·格罗尼贝格 申请人:阿雷生物药品公司