作为激酶抑制剂的被取代的苯并咪唑类物质的制作方法

专利名称：作为激酶抑制剂的被取代的苯并咪唑类物质的制作方法
技术领域：
本申请涉及新的被取代的苯并咪唑化合物、其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物和前体药物，所述化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物和前体药物的可药用的盐，上述任何实施方案和可药用载体的组合物，以及上述任何实施方案单独或者与至少一种另外的治疗剂联合在预防或治疗癌症中的应用。

背景技术：
已知与肿瘤生成有关的激酶包括Raf丝氨酸/苏氨酸激酶和受体酪氨酸激酶(RTK)。
该Raf丝氨酸/苏氨酸激酶是控制对外部细胞刺激发生的复杂转录程序的Ras/促细胞分裂剂-活化的蛋白激酶(MAPK)信号转导模块的必需组分。Raf基因编码已知与ras致癌基因结合的高保守的丝氨酸-苏氨酸-特异性蛋白激酶。其是一种信号转导途径的一部分，据信该信号转导途径由受体酪氨酸激酶、p21 ras、Raf蛋白激酶、Mek1(ERK活化剂或MAPKK)激酶和ERK(MAPK)激酶所组成，其最终磷酸化转录因子。在这种途径中，Raf激酶被Ras活化并磷酸化和激活促细胞分裂剂-活化的蛋白激酶激酶(所谓的Mek1和Mek2)的两种亚型，其是双重特异性的苏氨酸/酪氨酸激酶。两种Mek亚型都活化促细胞分裂剂活化的激酶1和2(MAPK，也被称为细胞外配体调节的激酶1和2或Erk1和Erk2)。该MAPK磷酸化包括转录因子在内的许多底物并由此建立其转录程序。参与Ras/MAPK途径的Raf激酶影响和调节着许多细胞功能如增殖、分化、存活、致癌性转化和细胞凋亡。
已经由一些在哺乳动物细胞中使用解除管制的和显性抑制的Raf突变型的研究以及一些使用模型生物的生物化学和遗传技术的研究证明了Raf在许多信号转导途径中的重要作用和位置。在许多情况中，刺激细胞酪氨酸磷酸化的受体对Raf的活化依赖于Ras的活性，其表明Ras在Raf的上游发挥功能。在活化时，Raf-1磷酸化并活化Mek1，从而使信号传播至下游效应器，如MAPK(促细胞分裂剂-活化的蛋白激酶；Crews等人，1993，Cell 74215)。认为所述Raf丝氨酸/苏氨酸激酶是动物细胞增殖中所涉及的主要Ras效应器(Avruch等人，1994，Trends Biochem.Sci.19279)。
Raf激酶具有三种不同的亚型——Raf-1(c-Raf)、A-Raf和B-Raf，其区别在于其与Ras相互作用的能力、活化MAPK激酶途径的能力、组织分布和亚细胞定位(Marias等人，Biochem.J.351289-305，2000；Weber等人，致癌基因19169-176，2000；Pritchard等人，Mol.Cell.Biol.756430-6442，1995)。在全部肿瘤中的大约20％中可以发现一种Ras基因的活化突变并且在全部肿瘤中的大约30％中所述Ras/Raf/MEK/ERK途径被活化(Bos等人，Cancer Res.494682-4689，1989；Hoshino等人，Oncogene18813-822，1999)。最近的一些研究已经表明皮肤痣中的B-Raf突变是黑素细胞瘤形成开始的关键步骤(Pollock等人，Nature Genetics 251-2，2002)。此外，最新的一些研究已经公开了在大约66％的黑素瘤、12％的结肠癌和14％的肝癌中发生了B-Raf激酶结构域的活化突变(Davies等人，Nature417949-954，2002；Yuen等人，Cancer Research 626451-6455，2002；Brose等人，Cancer Research 626997-7000，2002)。
黑素瘤一直是一个未能很好解决的医学问题，它是一种复杂的预后差的多基因疾病，在晚期转移状态中尤其如此。最近已经在许多恶性肿瘤中发现了B-Raf原致癌基因中的活性体细胞突变，并且在黑素瘤中最常见。大约70％的黑素瘤表达B-Raf(V600E)的变异和活化的形式，这使其成为了一种出色的药物开发的靶点。此外，另外10-15％的黑素瘤表达突变型N-Ras，其进一步证明了MAPK途径在黑素瘤细胞的生长和存活中的重要性。
在Raf激酶水平下，Ras/Raf/MEK/ERK途径的抑制剂可能是对抗具有过表达或变异的受体酪氨酸激酶、活化的细胞内酪氨酸激酶的肿瘤、具有异常表达的Grb2(一种使得可以通过Sos交换因子刺激Ras的衔接蛋白)的肿瘤以及藏匿Raf本身的活性突变的肿瘤的治疗剂。在早期临床试验中，已经表明也抑制B-Raf的Raf-1激酶的抑制剂在癌症的治疗中是有前途的治疗剂(Crump，Current Pharmaceutical Design 82243-2248，2002；Sebastien等人，Current Pharmaceutical Design 82249-2253，2002)。
已经表明通过应用RNA反义技术破坏细胞系中的Raf表达抑制了Ras和Raf-介导的致肿瘤性(Kolch等人，Nature 349416-428，1991；Monia等人，Nature Medicine 2(6)668-675，1996)。还已经表明给予对抗Raf激酶或者负显性Raf激酶或负显性MEK的共表达的减活抗体——Raf激酶的底物——可使转化的细胞复员成正常的生长表型(见Daum等人，TrendsBiochem.Sci 1994，19474-80；Fridman等人J Biol.Chem.1994，26930105-8)。
一些Raf激酶抑制剂已经被描述为可在体外和/或体内试验中有效抑制肿瘤细胞增殖(参见例如US专利6,391,636、6,358,932、6,037,136、5,717,100、6,458,813、6,204,467和6,268,391)。另一些专利和专利申请表明Raf激酶抑制剂可用于治疗白血病(参见例如US专利6,268,391和6,204,467、以及公开的US专利申请20020137774；20020082192；20010016194；和20010006975)或用于治疗乳癌(参见例如US专利6,358,932、5,717,100、6,458,813、6,268,391和6,204,467、和公开的US专利申请20010014679)。
血管发生也在癌细胞生长中起着重要的作用。已知一旦癌细胞的匿藏处达到一定的大小，大约直径为1至2mm时，因为扩散不足以为癌细胞提供充足的氧和营养物，所以癌细胞必需建立血流供应以使肿瘤生长得更大。因此，预期抑制血管发生可抑制癌细胞的生长。
受体酪氨酸激酶(RTK)是调节发育中的细胞生长和分化、成熟组织的重构和再生的跨膜多肽(Mustonen，T.等人，J Cell Biology 129895-898，1995；van der Geer，P.等人，Ann Rev.Cell Biol.10251-337，1994)。已知被称为生长因子或细胞因子的一些多肽配体可活化RTK。RTK信号转导涉及配体结合和导致其二聚作用的受体外部结构域构象的转移(Lymboussaki，A.“胚胎、成人和肿瘤中的血管内皮生长因子以及其受体(VascularEndothelial Growth Faxtors and their Receptors in Embryos，Adults，andin Tumors)”，Academic Dissertation，University of Helsinki，Molecular/Cancer Biology Laboratory and Department of Pathology.Haartman Institute，1999；Ullrich，A.等人，Cell 61203-212，1990)。该配体与RTK的结合在特异性酪氨酸残基上导致了受体转磷酸作用并且随后导致了胞质底物(Id)磷酸化作用所需的催化结构域的活化。
RTK的两个亚族对血管内皮有特异性。这些亚族包括血管内皮生长因子(VEGF)亚族和Tie受体亚族。V类RTK包括VEGFR1(FLT-I)、VEGFR2(KDR(人)、FIk-1(小鼠))和VEGFR3(FLT-4)(Shibuya，M.等人，Oncogene5519-525，1990；Terman，B.等人，Oncogene 61677-1683，1991；Aprelikova，O.等人，Cancer Res.52746-748，1992)。VEGF亚族的成员被描述为能诱导血管渗透性和内皮细胞增殖并且进一步被鉴定为血管发生和血管生成的主要诱导剂(Ferrara，N.等人，Endocrinol.Rev.184-25，1997)。
已知VEGF与包括FLT-1和FIk-1在内的RTK特异性结合(DeVries，C.等人，Science 255989-991，1992；Quinn，T.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.907533-7537，1993)。VEGF在体内和体外都刺激内皮细胞的迁移和增殖并诱导血管发生(Connolly，D.等人，J.Biol.Chem.26420017-20024，1989；Connolly，D.等人，J.Clin.Invest.841470-1478，1989；Ferrara，N.等人，Endocrinol.Rev.184-25，1997；Leung，D.等人，Science 2461306-1309，1989；Plouet，J.等人，EMBO J 53801-3806，1989)。
在各种培养的内皮细胞系统中进行的研究已经确定了VEGFR2介导了VEGF在血管发生中的大部分的下游作用(Wey S.等人，ClinicalAdvances in Hematology and Oncology，237-45，2004)。认为在Ras/Raf/Mek/Erk途径的活化中涉及VEGFR2介导的内皮细胞增殖(Veikkola T.等人，Cancer Res 60203-212，2000)。在黑素瘤、乳癌、膀胱癌、肺癌、甲状腺癌、前列腺癌和卵巢癌中均已经观察到了VEGFR2的表达(见Wey等人，同上)。已经表明VEGFR2的中和单克隆抗体(KDR)可有效阻断肿瘤血管发生(见Kim等人，Nature 362841，1993；Rockwell等人，Mol.Cell Differ.3315，1995)。因为已知血管发生对于癌症的生长而言是很关键的并且由VEGF和VEGF-RTK控制，已经进行了许多努力来研制可抑制或阻碍血管发生和抑制VEGF-RTK的化合物。
血小板衍生生长因子受体激酶(PDGFR)是RTK的另一种类型。已经表明在许多不同的实体瘤(从成胶质细胞瘤和骨肉瘤至前列腺癌)中都有PDGF表达。在这些各种类型的肿瘤中，PDGF信号的生物学作用可以从癌细胞生长的自分泌刺激至涉及相邻基质和血管发生的更微妙的旁分泌相互作用。PDGF与酪氨酸激酶受体PDGFRα和PDGFRβ相互作用。因此，预期用小分子抑制PDGFR激酶活性可干扰肿瘤生长和血管发生。
成纤维细胞生长因子受体激酶(FGFR)代表了RTK的另一种类型。该成纤维细胞生长因子是参与各种活动的多肽生长因子家族，所述活动包括致有丝分裂、血管发生和伤口愈合。其包括一族相关但是各自不同的酪氨酸激酶受体，所述受体包含一个具有2或3个免疫球蛋白(Ig)-样结构域、跨膜结构域和胞质酪氨酸激酶结构域的胞外结构域。已经确定的成纤维细胞生长因子受体包括FGFR1(Ruta，M等人，Oncogene 39-15，1988)；FGFR2(Dionne，C等人，Cytogenet.Cell Genet.6034-36，1992)；FGFR3(Keegan，K等人，Proc.Nat.Acad.Sci.881095-1099，1991)；和FGFR4(Partanen，J等人，EMBO J.101347-1354，1991)。
已经说明了成纤维细胞生长因子受体，特别是FGFR3在癌症中的作用。通过向14q32上的免疫球蛋白重链(IgH)部位易位而进行的致癌基因的失调是B-细胞瘤的发病机理中的基础事件。在多发性骨髓瘤中，在20至60％的病例中发生了向IgH部位的易位。对于大部分易位而言，其配对染色体是未知的；对于其它一些情况而言，已经确定了具有11q13(唯一常常被涉及的染色体)的不同的染色体对排列。Bergsagel等人将不合理的转换重组片段(被定义为包含得自仅1个转换区域的序列)鉴定为21个骨髓瘤细胞系的15个中的IgH转换区域的易位事件的可能标记物，包括具有无法检测的14q32易位的8个核型(karyotyped)系中的7个。这些易位断点涉及6个染色体部位4pl6.3；6；8q24.13；11q13.3；16q23.1；和21q22.1(Bergsagel等人，Proc.Nat.Acad.Sci.9313931-13936，1996)。Chesi等人(Nature Genet.16260-264 1997)发现在5种骨髓瘤细胞系中和在10种伴有多发性骨髓瘤的原发性肿瘤的至少3种中的核型沉默易位t(4；14)(p16.3；q32.3)表现出FGFR3突变的表达和活化增加。所述染色体-4断点聚集在着丝粒至FGFR3的70-kb区域中，认为其是调节不良的(dysregulated)致癌基因。具有这种易位的两种细胞系和1种原发性肿瘤选择性表达包含之前在致死性侏儒症中确定的活化突变(tyr373至cys、lys650至glu和lys650至met)的FGFR3等位基因。对于K650E而言，已经用转染实验证明了在不存在配体情况下FGFR3的组成活化。Chesi等人(1997)提出在所述t(4；14)易位后，肿瘤发展期间的体细胞突变常常产生在不存在配体情况下有活性的FGFR3蛋白。
Rasmussen，T等人提出在多发性骨髓瘤中t(4；14)易位的频率为3至24％(Rasmussen，T等人，Br.J.Haematol.117626-628，2002)。在患有意义未明的单克隆丙种球蛋白血症(MGUS)的患者中观察到该易位的频率显著较低，这表明了其在从MGUS向多发性骨髓瘤的转变中的作用。所述t(4；14)易位影响2个潜在的致癌基因FGFR3和多发性骨髓瘤SET结构域(MMSET)。Rasmussen等人(2002)对多发性骨髓瘤中FGFR3失调的频率以及其预后值进行了研究。其在110个多发性骨髓瘤骨髓样品的16个(14.5％)中都发现了失调的FGFR3表达。
此外，已经有另外一些迹象表明了FGFR3在癌症中的致癌作用(Cappellen，D.等人，(Letter)Nature Genet.2318-20，1999)。Cappellen等人在很大比例的2种常见上皮癌——膀胱和宫颈癌中发现了组成活化的FGFR3的表达。FGFR3似乎是膀胱癌中最频繁变异的致癌基因，其在30％以上的病例中发生变异。FGFR3似乎介导了相反的信号，在骨生长中发挥负性调节剂作用并在一些类型的肿瘤中作为致癌基因。在这些癌症中确定的所有的FGFR3错义体细胞突变等同于造成致死性骨发育不全的胚性活化突变(作者注意到在2种突变中，其均等地发生，这是因为在上皮细胞中表达的FGFR3b亚型比在骨中表达的FGFR3c亚型多2个氨基酸)。在上皮肿瘤的FGFR3改变中，最常见的是S249C突变，其影响着9例膀胱癌中的5例和3例宫颈癌中的3例。
还有迹象表明活化的FGFR3是通过c-Cbl-介导的遍在蛋白化作用进行的溶酶体降解的靶点，并且表明在患有软骨发育不全和相关软骨发育异常的患者体内发现的活化突变扰乱了这种过程，导致了活化受体的再循环和FGFR3信号的放大(Cho等人，Proc.Nat.Acad.Sci.101609-614，2004)。Cho等人提出这种机理有助于软骨发育不全的分子发病机理并且代表了治疗干预的潜在靶点。该溶酶体靶向缺陷与所提出的其它机理一起解释了软骨发育不全的发病机理。
其它一些结果表明FGFR2和FGFR3在肿瘤生成中是重要的因素(Jang JH等人，“与人胃癌和结肠直肠癌有关的成纤维细胞生长因子受体2和成纤维细胞生长因子受体3基因中的突变(Mutations in fibroblastgrowth factor 2 and fibroblast growth factor 3 genes associated withhuman gastric and colorectal cancers)”，Cancer Res.61(9)3541-3，2001)。由于其在多发性骨髓瘤、膀胱癌和肿瘤生成中的作用，开发成纤维细胞生长因子受体激酶的抑制剂，特别是FGFR2和FGFR3的抑制剂将在癌症的治疗中起重要的作用。
c-Kit是另一种属于PDGF受体家族的受体酪氨酸激酶并且在造血祖细胞、肥大细胞和生殖细胞中正常表达。在许多癌症中都涉及C-kit表达，这些癌症包括肥大细胞白血病、生殖细胞肿瘤、小细胞肺癌、胃肠道间质瘤、急性骨髓性白血病(AML)、红白血病、成神经细胞瘤、黑素瘤、卵巢癌、乳癌(Heinrieh，M.C.等人；J.Clin.Onc.20，61692-1703，2002(综述文章)；Smolich，B.D.等人，Blood，97，5；1413-1421)。
在许多人类癌症中涉及CSF-1R(集落刺激因子-1(CSF-1)的受体)的过表达，所述癌症包括乳癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肺癌、肾癌、胰腺癌和前列腺癌(Sapi，E.，Exp.Biol.Med 2291-11，2004)。CSF-1R是酪氨酸激酶受体，当被其配体CSF-1活化时，其触发了控制细胞增殖和分化的信号转导途径。在怀孕和哺乳期间，CSF-1R在乳腺中表达。已经表明，异常的CSF-1R表达与所有乳癌中的58％有关，并且与浸润性乳癌中的85％有关(见Sapi，同上)。
一直需要可抑制毛细血管增生、抑制肿瘤生长、可治疗癌症、调控细胞周期停滞和/或抑制分子如Ras、Raf、突变型B-Raf、VEGFR2(KDR，Flk-1)、FGFR2/3、c-Kit、PDGFRβ、CSF-1R中的一种或多种的化合物以及包含该类化合物的药物制剂和药品。还需要一些将该类化合物、药物制剂和药品给药于需要其的患者或个体的方法。
本发明的概述 本发明提供了式(I)的新型被取代的苯并咪唑化合物或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐
其中， 各R1独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷基)磺酰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基； R2是C1-6烷基或卤代(C1-6烷基)； 各R3独立地选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基； 各R4独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、杂环烷基羰基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基羰基、C1-6烷基氨基羰基、氰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基； 其中R1、R2、R3和R4可任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)、C1-6烷氧基和卤代(C1-6烷氧基)的取代基所取代； a是1、2、3、4或5； b是0、1、2或3；且 c是1或2。
在其它一些实施方案中，提供了式(II)的新型被取代的苯并咪唑化合物或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐
其中， 各R1独立地选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷基)磺酰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基； 各R3独立地选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基； 各R4独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基羰基、氰基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、苯基和杂芳基； 其中R1、R2、R3和R4可任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代； a是1、2、3、4或5； b是0、1、2或3；且 c是1或2。
在其它一些实施方案中，提供了式(III)的新型被取代的苯并咪唑化合物或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐
其中， 各R1独立地选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷基)磺酰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基； 各R4独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基羰基、氰基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、苯基和杂芳基； 其中R1和R4可任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代； a是1、2、3、4或5；且 c是1或2。
还公开了下面式(IV)的化合物或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐
其中， 各R1独立地选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷基)磺酰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基； R2是C1-6烷基或卤代(C1-6烷基)； 各R3独立地选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基； 各R4独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基羰基、C1-6烷基氨基羰基、氰基、氰基(C1-6烷基)、环烷基、杂环烷基、杂环烷基(C1-6烷基)、杂环烷基羰基、苯基和杂芳基； 其中R1、R2、R3和R4可任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代； a是1、2、3、4或5；且 b是0、1、2或3。
在其它一些实施方案中，提供了式(I)-(IV)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中各R1独立地选自羟基、氯、氟、溴、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、三氟甲硫基、哌啶基、C1-6烷基哌啶基、哌嗪基、C1-6烷基哌嗪基、四氢呋喃基、吡啶基和嘧啶基。在其它一些实施方案中，提供了式(I)-(IV)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中a是1或2，并且至少一个R1是卤代(C1-6烷基)，如三氟甲基。在其它一些实施方案中，提供了式(I)和(IV)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中R2是C1-6烷基，如，例如，甲基或乙基。在另一些实施方案中，提供了式(I)、(II)和(IV)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中b是0，并且因此R3不存在。在另一些实施方案中，提供了式(I)-(IV)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中b是1，并且R3是C1-6烷氧基，如，例如，甲氧基。在另一些实施方案中，提供了式(I)-(III)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中c是1或2，并且至少一个R4是卤代(C1-6烷基)，如，例如，三氟甲基。
本发明另一方面提供了治疗需要该类治疗的人或动物个体的与Raf有关的病症的方法，其包括给所述个体施用可有效降低或预防该个体体内肿瘤生长数量的任何一种实施方案的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其可药用的盐。
本发明另一方面还提供了治疗需要该类治疗的人或动物个体的与Raf有关的病症的方法，其包括给所述个体施用可有效降低或预防该个体体内肿瘤生长数量的任何一种实施方案的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其可药用的盐并联合使用至少一种用于治疗癌症的另外的活性剂。
本发明另一方面还提供了包含至少一种式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其可药用的盐和一种或多种用于治疗癌症的在癌症治疗中常用的另外的活性剂的治疗组合物。
本发明的化合物可用于治疗癌症，包括癌(例如，肺、胰腺、卵巢、甲状腺、膀胱或结肠癌)、黑素瘤、骨髓病症(例如，髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤和红白血病)、腺瘤(例如，绒毛状结肠腺瘤)和肉瘤(例如，骨肉瘤)。
另一方面，本发明涉及抑制个体MAPK信号转导途径中至少一种丝氨酸/苏氨酸激酶或在个体中治疗由MAPK信号转导途径中的丝氨酸/苏氨酸激酶介导的生物学情况的方法，其包括施用包含至少一种可有效抑制个体体内的MAPK信号转导途径的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其可药用盐的治疗组合物。所述治疗组合物可用于治疗对该类抑制剂有需求的患者(例如，患有由MAPK信号转导异常介导的癌症的患者)。在一个实施方案中，本发明涉及抑制个体体内的Raf激酶的方法，其包括施用包含{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺以及其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或者该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐的治疗组合物。
另一方面，本发明涉及抑制个体体内至少一种选自VEGFR-2、PDGFR-β、pERK、bFGF、FGFR1、FGFR2、FGFR3、c-Kit和CSF-1R的酪氨酸激酶受体或治疗由VEGFR-2、PDGFR-β、pERK、bFGF、FGFR1、FGFR2、FGFR3、c-Kit和CSF-1R中的至少一种介导的生物学情况的方法，其包括施用包含可有效抑制个体体内的酪氨酸激酶受体的至少一种式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其可药用盐的治疗组合物。该治疗化合物可用于治疗对该类抑制剂有需求的患者(例如，患有由酪氨酸激酶受体信号转导异常介导的癌症的患者)。在一个实施方案中，本发明涉及抑制个体体内选自VEGFR-2、PDGFR-β、pERK、bFGF、FGFR1、FGFR2、FGFR3、c-Kit和CSF-1R的酪氨酸激酶的方法，其包括施用包含{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐的治疗组合物。
本发明还提供了如本发明详细描述中所述的组合物、应用方法以及生产方法。
附图简要说明 结合附图，通过参考下面的详细描述，本发明的上述方面和许多相伴的优点将变得更易理解，其中

图1是表示当如实施例78所述的那样，用本发明的化合物进行治疗时，小鼠体内A375M人黑素瘤肿瘤体积的平均降低的图； 图2A和2B是一些PAGE图，其表示如实施例79中所述的那样，在用本发明的化合物进行治疗后4-(图2A)和24-小时(图2B)，对小鼠体内A375M人黑素瘤肿瘤细胞中Raf激酶的下游信号转导的抑制； 图3是表示当如实施例80所述的那样，用本发明的化合物进行治疗时，小鼠体内HT29P人结肠癌肿瘤体积的平均降低的图； 图4A、4B和4C是一些PAGE图，其表示如实施例81中所述的那样，在用本发明的化合物治疗后1小时(图4A)、4小时(图4B)和24小时(图4C)，对小鼠体内HT29P人结肠癌肿瘤细胞的下游信号转导的抑制； 图5说明了包括Ras、Raf、MEK和ERK的MAPK信号转导途径和所建议的如实施例82-86所述的那样用实施例1的化合物抑制Raf激酶的下游信号的抑制点； 图6A、6B和6C是一些PAGE图，其表示如实施例83中所述的那样，用一定浓度范围的实施例1的化合物在培养物中培养4小时后，对A375M细胞(图6A)、SK-MEL2细胞(图6B)和CHL-1细胞(图6C)中Raf激酶的下游信号的抑制； 图7A是表示当如实施例84所述的那样，用10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg实施例1化合物的口服剂量进行治疗时，小鼠体内A375M(B-Raf V600E)人黑素瘤肿瘤体积平均降低的剂量响应的图； 图7B是PAGE图，其表示在如实施例84所述的那样用实施例1的化合物进行第14次治疗8小时后，对小鼠体内A375M肿瘤细胞中的Raf激酶的下游信号的抑制； 图7C是PAGE图，其表示在如实施例84所述的那样用实施例1的化合物进行第14次治疗24小时后，对小鼠体内A375M肿瘤细胞中的Raf激酶的下游信号的抑制； 图7D是PAGE图，其表示在如实施例84所述的那样用实施例1的化合物进行第14次治疗24小时后，对A375M肿瘤细胞中Raf激酶下游的标记物的调控； 图8A是表示当如实施例85所述的那样用实施例1的化合物进行治疗时，小鼠体内MEXF276(B-Raf V600E)黑素瘤癌性肿瘤体积的平均降低的图； 图8B是PAGE图，其表示在如实施例85所述的那样用实施例1的化合物第20次治疗4小时后，对小鼠体内MEXF276肿瘤细胞中Raf激酶的下游信号的抑制； 图8C是PAGE图，其表示在如实施例85所述的那样用实施例1的化合物第20次治疗4小时后，对MEXF276肿瘤细胞中Raf激酶下游的标记物的调控； 图9A是表示当如实施例85所述的那样用实施例1的化合物进行治疗时，对小鼠体内MEXF1341(N-Ras Q61K)黑素瘤癌性肿瘤生长的平均抑制的图； 图9B是PAGE图，其表示在如实施例85所述的那样用实施例1的化合物进行第20次治疗4小时后，小鼠体内MEXF1341肿瘤细胞中的Raf激酶的下游信号； 图9C是PAGE图，其表示在如实施例85所述的那样用实施例1的化合物第20次治疗4小时后，对MEXF1341肿瘤细胞中Raf激酶下游的标记物的调控； 图10A是表示当如实施例86所述的那样用实施例1的化合物进行治疗时，小鼠体内HCT-116(K-Ras G13D)结肠直肠癌肿瘤体积的平均降低的图； 图10B是PAGE图，其表示在如实施例86所述的那样用实施例1的化合物进行第3次治疗4小时后，对小鼠体内HCT-116肿瘤细胞中Raf激酶的下游信号的抑制； 图10C是PAGE图，其表示在如实施例86所述的那样用实施例1的化合物进行第3次治疗8小时后，对小鼠体内HCT-116肿瘤细胞中Raf激酶的下游信号的抑制； 图10D是PAGE图，其表示在如实施例86所述的那样用实施例1的化合物进行第3次治疗24小时后，对小鼠体内HCT-116肿瘤细胞中Raf激酶的下游信号的抑制； 图11是表示当如实施例86所述的那样用实施例1的化合物进行治疗时，小鼠体内HT-29(B-Raf V600E)结肠直肠癌肿瘤体积的平均降低的图； 图12A是表示当如实施例86所述的那样用实施例1的化合物进行治疗时，对小鼠体内MV4-11(FLT3 ITD)急性单核细胞性白血病癌性肿瘤生长的平均抑制的图； 图12B是PAGE图，其表示在如实施例86所述的那样用实施例1的化合物进行第3次治疗4小时后，小鼠体内MV4-11肿瘤细胞中Raf激酶的下游信号； 图13是表示在如实施例88所述的那样用10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg实施例1的化合物进行治疗后，对CHO-VEGF Matrigel模型中VEGF-介导的血管发生的抑制的图； 图14A是表示当如实施例89所述的那样用100mg/kg实施例1的化合物用q2d、q3d或q4d的给药方案进行治疗时，小鼠体内A375M黑素瘤肿瘤体积的平均降低的图； 图14B是PAGE图，其表示在如实施例89所述的那样用实施例1的化合物以q2d的给药方案进行第5次治疗8小时、24小时和48小时后，对小鼠体内A375M肿瘤细胞中的Raf激酶的下游信号的抑制； 图14C是PAGE图，其表示在如实施例89所述的那样用实施例1的化合物以q4d的给药方案进行第3次治疗48小时、72小时和96小时后，对小鼠体内A375M肿瘤细胞中的Raf激酶的下游信号的抑制；和 图15是表示如实施例90中所述的那样，用各种浓度实施例1的化合物对A375M肿瘤细胞进行治疗、随着时间的流逝该化合物的血清浓度和目标调节的浓度阈值之间关系的图。
优选实施方案的详细描述 根据本发明的一个方面，提供了式(I)的被取代的苯并咪唑化合物或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐
其中， 各R1独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷基)磺酰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基； R2是C1-6烷基或卤代(C1-6烷基)； 各R3独立地选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基； 各R4独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基羰基、C1-6烷基氨基羰基、氰基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、苯基和杂芳基； 其中R1、R2、R3和R4可任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)、C1-6烷氧基和卤代(C1-6烷氧基)的取代基所取代； a是1、2、3、4或5； b是0、1、2或3；且 c是1或2。
在其它一些实施方案中，提供了式(II)的新型被取代的苯并咪唑化合物或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐
其中， 各R1独立地选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷基)磺酰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基； 各R3独立地选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基； 各R4独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基羰基、氰基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、苯基和杂芳基； 其中R1、R2、R3和R4可任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代； a是1、2、3、4或5； b是0、1、2或3；且 c是1或2。
在其它一些实施方案中，提供了式(III)的新型被取代的苯并咪唑化合物或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐
其中， 各R1独立地选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷基)磺酰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基； 各R4独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基羰基、氰基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、苯基和杂芳基； 其中R1和R4可任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代； a是1、2、3或5；且 c是1或2。
还公开了下面式(IV)的化合物或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐
其中， 各R1独立地选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷基)磺酰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基； R2是C1-6烷基或卤代(C1-6烷基)； 各R3独立地选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基； 各R4独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基羰基、C1-6烷基氨基羰基、氰基、氰基(C1-6烷基)、环烷基、杂环烷基、杂环烷基(C1-6烷基)、杂环烷基羰基、苯基和杂芳基； 其中R1、R2、R3和R4可任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代； a是1、2、3、4或5；且 b是0、1、2或3。
在其它一些实施方案中，提供了式(I)-(IV)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中各R1独立地选自羟基、氯、氟、溴、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、三氟甲硫基、哌啶基、C1-6烷基哌啶基、哌嗪基、C1-6烷基哌嗪基、四氢呋喃基、吡啶基和嘧啶基。在其它一些实施方案中，提供了式(I)-(IV)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中a是1或2，并且至少一个R1是卤代(C1-6烷基)，如三氟甲基。在其它一些实施方案中，提供了式(I)和(IV)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中R2是C1-6烷基，如，例如，甲基或乙基。在另一些实施方案中，提供了式(I)、(II)和(FV)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中b是0，并且因此R3不存在。在另一些实施方案中，提供了式(I)-(IV)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中b是1，且R3是C1-6烷氧基，如，例如，甲氧基。在另一些实施方案中，提供了式(I)-(III)的新型被取代的苯并咪唑化合物，其中c是1或2，并且至少一种R4是卤代(C1-6烷基)，如，例如，三氟甲基。
在一些实施方案中，R1、R2、R3和R4可任选地被一至五个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)、C1-6烷氧基和卤代(C1-6烷氧基)的取代基所取代。
在一些实施方案中，R1、R2、R3和R4可任选地被一至三个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)、C1-6烷氧基和卤代(C1-6烷氧基)的取代基所取代。
在一些实施方案中，R1独立地选自卤素、C1-6烷氧基、卤代(C1-6烷基)、羟基、卤代(C1-6烷氧基)、卤代(C1-6烷基)磺酰基、杂芳基、卤代(C1-6烷基)硫基、杂环烷基和(C1-6烷基)杂环烷基。在一些该类实施方案中，a是1且R1独立地选自2-氯、2-乙基、2-三氟甲基、3-三氟甲基、4-三氟甲基、3-叔-丁基、4-叔-丁基、3-乙基、4-乙基、4-氯、4-溴、4-三氟甲氧基、4-三氟甲硫基、4-三氟甲磺酰基和4-(4-甲基哌嗪基)。在另一些实施方案中，a是2且各R1独立地选自2-氟、2-氯、2-羟基、2-甲氧基、3-甲氧基、5-甲氧基、4-氯、4-氟、3-三氟甲基、4-三氟甲基、5-三氟甲基、5-吡啶基、5-吡啶基-3-基、5-吡啶基-4-基、3-四氢呋喃-3-基、3-异丙基、5-异丙基和5-叔-丁基。
在一些实施方案中，R4选自C1-6烷基、羟基(C1-6烷基)、卤代(C1-6烷基)、卤代(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷氧基)羰基、(C1-6烷基)杂环烷基、氰基、苯基、卤代(C1-6烷基)苯基、(C1-6烷基)杂环烷基羰基和羟基(C1-6烷基氨基羰基)。在一些该类实施方案中，c是1且R4选自三氟甲基、氰基、苯基、三氟甲硫基、甲氧基羰基、4-乙基哌嗪基、4-乙基哌嗪基-1-羰基或2-羟基乙基氨基羰基。在另一些实施方案中，c是2且各R4独立地选自甲基、3-三氟甲基苯基、4-三氟甲基苯基、三氟甲基、乙氧基羰基、羟基甲基和苯基。
在其它一些实施方案中，提供了一种化合物或其可药用的盐，其中该化合物具有下式
或具有下式的该化合物的互变异构体或该互变异构体的可药用的盐
本发明另一方面提供了治疗需要该类治疗的人或动物个体的与Raf有关的病症的方法，其包括给所述个体施用可有效降低或预防个体体内肿瘤生长数量的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物。
本发明另一方面还提供了治疗需要该类治疗的人或动物个体的与Raf有关的病症的方法，其包括给所述个体施用可有效降低或预防个体体内肿瘤生长数量的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物和至少一种用于治疗癌症的另外的活性剂。
本发明另一方面还提供了治疗需要该类治疗的人或动物个体的与Raf有关的病症的方法，其包括给所述个体施用可有效降低或预防个体体内肿瘤生长数量的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物和至少一种用于治疗癌症的另外的活性剂。认为用作联合治疗的许多适宜抗癌剂都可用于本发明的方法。实际上，本发明考虑给予的许多抗癌剂非限制性地是例如诱导细胞凋亡的活性剂；多核苷酸类(例如，核酶类)；多肽类(例如，酶类)；药物；生物学拟似物；生物碱类；烷化剂类；抗肿瘤抗生素；抗代谢物；激素类；铂化合物；与抗癌药、毒素和/或放射性核素轭合的单克隆抗体；生物响应改性剂(例如干扰素类[例如IFN-a等]和白介素类[例如IL-2等]等)；过继性免疫治疗剂；造血的生长因子；诱导肿瘤细胞分化的活性剂(例如全反式-视黄酸等)；基因治疗试剂；反义治疗试剂和核苷酸；肿瘤疫苗；血管发生的抑制剂等。适于与所公开的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物共同给药的化疗化合物和抗癌治疗的许多其它实例是本领域技术人员已知的。
在一些优选的实施方案中，与本发明化合物联用的抗癌剂包括诱导或刺激细胞凋亡的活性剂。诱导细胞凋亡的活性剂非限制性地包括辐射；激酶抑制剂(例如，表皮生长因子受体[EGFR]激酶抑制剂、血管生长因子受体[VGFR]激酶抑制剂、成纤维细胞生长因子受体[FGFR]激酶抑制剂、血小板衍生生长因子受体[PGFR]I激酶抑制剂和Bcr-Abl激酶抑制剂如STI-571、Gleevec和Glivec])；反义分子；抗体[例如，赫赛汀和利妥昔单抗(Rituxan)]；抗-雌激素[例如，雷洛昔芬和他莫昔芬]；抗-雄激素[例如，氟他胺、比卡鲁胺、非那雄胺、氨鲁米特、酮康唑和皮质类固醇]；环氧合酶2(COX-2)抑制剂[例如，塞来考西、美洛昔康、NS-398和非甾体抗炎药(NSAID)]；和癌症化疗药[例如，依立替康(Camptosar)、CPT-11、氟达拉滨(福达华(Fludara))、达卡巴嗪(DTIC)、地塞米松、米托蒽醌、Mylotarg、VP-16、顺铂、5-FU、阿霉素、泰索帝或紫杉酚]；细胞信号分子；神经酰胺和细胞因子；和星孢菌素等。
本发明另一方面提供了包含至少一种式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其可药用的盐和适于给药于人或动物个体的可药用载体的药物组合物，该药物组合物仅包含所述化合物或者还包含其它抗癌剂。
本发明另一方面提供了制备这里所述的式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的方法。
本发明另一方面还提供了作为Raf激酶抑制剂的化合物。因为该酶是p21ras的下游效应器，因此本发明的抑制剂可用于其中需要抑制raf激酶途径的人或兽医用药物组合物中，例如，可用于治疗由Raf激酶介导的肿瘤和/或癌细胞生长。因为这些癌症的进行依赖于所述Ras蛋白信号转导级联并且因此容易受到通过抑制Raf激酶活性来阻断所述级联进行的治疗的影响，所以本发明的化合物特别是可用于治疗人或动物，例如，鼠科动物癌症。因此，本发明的化合物可用于治疗实体癌症，如，例如，癌(例如肺、胰腺、甲状腺、膀胱或结肠的癌症)、骨髓病症(例如，髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤和红白血病)、腺瘤(例如，绒毛状结肠腺瘤)或肉瘤(例如，骨肉瘤)。
这里所用的“Raf抑制剂”指的是就Raf激酶活性而言在用下文一般性描述的Raf/Mek过滤试验进行测量时表现出不高于约100μM并且更典型地不高于约50μM的IC50的化合物。本发明化合物将对其表现出抑制作用的优选的Raf激酶亚型包括A-Raf、B-Raf和C-Raf(Raf-1)。“IC50”是将酶(例如，Raf激酶)活性降低至最高水平一半的抑制剂浓度。已经发现本发明的代表性化合物对Raf表现出抑制活性。在这里所述的Raf激酶试验中进行测量时，本发明的化合物优选地对Raf表现出不高于约10μM的活性，更优选地表现出不高于约5μM，甚至更优选地表现出不高于约1μM，并且最优选地表现出不高于约200nM的活性。
这里所用的短语“MAPK信号转导途径”是代表由Ras-Raf-MEK1-ERK信号分子形成的模块中促细胞分裂剂活化的蛋白激酶信号转导途径的缩写。
“烷基”指的是不包含杂原子的饱和烃基并且包括直链烷基如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。烷基还包括直链烷基的支链异构体，例如非限制性地包括下面的基团-CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH(CH2CH3)2、-C(CH3)3、-C(CH2CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH(CH2CH3)2、-CH2C(CH3)3、-CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH2CH3)2、-CH2CH2C(CH3)3、-CH2CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2、-CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)等。因此，烷基包括伯烷基、仲烷基和叔烷基。短语“C1-12烷基”指的是具有1至12个碳原子的烷基。短语“C1-6烷基”指的是具有1至6个碳原子的烷基。
“链烯基”指的是具有2至6个碳原子并且优选具有2至4个碳原子和具有至少1个并且优选1至2个乙烯基(＞C＝C＜)不饱和部位的直链或支链烃基。该类基团例如有乙烯基、烯丙基和丁-3-烯-1-基。该术语中包括这些异构体的顺式和反式异构体或混合物。
“烷氧基”指的是其中R是烷基的RO-。这里所用的短语“C1-6烷氧基”指的是其中R是C1-6烷基的RO-。C1-6烷氧基的典型实例包括甲氧基、乙氧基、叔-丁氧基等。
“(C1-6烷氧基)羰基”指的是其中R是C1-6烷基的酯-C(＝O)-OR。
“脒基”指的是基团-C(＝NH)NH2。“脒”指的是包含该类基团的化合物。
“氨基羰基”在这里指的是基团-C(O)-NH2。
“C1-6烷基氨基羰基”指的是基团-C(O)-NRR’，其中R是C1-6烷基且R’选自氢和C1-6烷基。
“羰基”指的是二价基团-C(O)-。
“羧基”指的是-C(＝O)-OH。
“氰基”、“甲腈”或“腈”指的是-CN。
“腈(C1-6烷基)”指的是被-CN取代的C1-6烷基。
“环烷基”指的是单-或多环烷基取代基。典型的环烷基具有3至8个环碳原子。代表性的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
“卤素”或“卤代”指的是氯、溴、氟和碘基团。
“卤代(C1-6烷基)”指的是被一个或多个，优选1至5个卤素原子取代的C1-6烷基。更优选的卤代(C1-6烷基)是三氟甲基。
“卤代(C1-6烷基)苯基”指的是被卤代(C1-6烷基)取代的苯基。
“卤代(C1-6烷氧基)”指的是被一个或多个，优选1至5个卤素原子取代的烷氧基。更优选的卤代(C1-6烷氧基)是三氟甲氧基。
“卤代(C1-6烷基)磺酰基”和“卤代(C1-6烷基)硫基”指的是被卤代(C1-6烷基)取代的磺酰基和硫基，其中磺酰基和硫基的定义如这里所述。
“杂芳基”指的是在芳族环中具有1至4个作为环原子的杂原子并且剩余的环原子是碳原子的芳族基团。在本发明化合物中所用的适宜的杂原子是氮、氧和硫，其中氮和硫原子可任选地被氧化。具有5至14个环原子的杂芳基的实例包括例如，苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并唑基、二氮杂基、呋喃基、吡嗪基、吡唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡咯基、唑基、异唑基、咪唑基、吲哚基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噻唑基、噻吩基和三唑基。
“杂环烷基”在这里指的是在环结构中具有1至5个并且更典型的是1至2个杂原子的环烷基取代基。在本发明化合物中所用的适宜杂原子是氮、氧和硫，其中氮和硫原子可任选地被氧化。典型的杂环烷基部分包括例如吗啉代、哌嗪基、哌啶基等。
“(C1-6烷基)杂环烷基”指的是被C1-6烷基取代的杂环烷基。
“杂环烷基(C1-6烷基)”指的是被杂环烷基取代的C1-6烷基。
“杂环烷基羰基”在这里指的是其中R10是杂环烷基的基团-C(O)-R10。
“(C1-6烷基)杂环烷基羰基”指的是其中R11是(C1-6烷基)杂环烷基的基团-C(O)-R11。
“羟基”指的是-OH。
“羟基(C1-6烷基)”指的是被羟基取代的C1-6烷基。
“羟基(C1-6烷基氨基羰基)”指的是被羟基取代的C1-6烷基氨基羰基。
“亚胺酸酯”指的是基团-C(＝NH)O-或包含该类基团的化合物。亚胺酸酯包括例如亚胺酸甲酯-C(＝NH)OCH3。
“硝基”指的是-NO2。
“磺酰基”在这里指的是基团-SO2-。
“硫基”在这里指的是基团-S-。“烷基磺酰基”指的是其中R12是烷基的结构式为-SO2R12的被取代的磺酰基。“烷基硫基”指的是其中R12是烷基的结构式为-SR12的被取代的硫基。在本发明化合物中所用的烷基磺酰基和烷硫基包括(C1-6烷基)磺酰基和(C1-6烷基)硫基。因此，典型的基团包括例如甲磺酰基和甲硫基(即，其中R12是甲基)、乙磺酰基和乙硫基(即，其中R12是乙基)、丙磺酰基和丙硫基(即，其中R12是丙基)等。
“羟基保护基团”指的是OH基团的保护基团。这里所用的该术语还指对酸COOH的OH基的保护。适宜的羟基保护基团以及用于对特定的官能团进行保护和去保护的适宜条件在现有技术中是众所周知的。例如，在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，有机合成中的保护基团(Protecting Groupsin Organic Synthesis)，第3版，Wiley，纽约，1999中对很多该类保护基团进行了描述。该类羟基保护基团包括C1-6烷基醚、苄醚、对-甲氧基苄醚、甲硅烷基醚等。
术语“多晶型物”指的是一种化合物不同的晶形。多晶型物可能在许多物理性质方面彼此不同，例如在其X-射线衍射图、红外吸收光谱图、熔点、稳定性或溶解度方面不同。
“代谢物”指的是在将母体化合物给药后在个体体内产生的任何衍生物。可以通过在个体体内进行的各种生物化学转换例如氧化、还原、水解或共轭来由母体化合物产生衍生物并且包括例如氧化物和去甲基化衍生物。相当于该类衍生物的代谢物还可以用各种体外方法或者通过合成方法来进行制备。在一些实施方案中，式(I)-(IV)化合物的代谢物是氧化物。在一些方面，该氧化物是N-氧化物，其是通过用氧化剂对式(I)-(IV)的化合物进行处理来合成形成的。在一些方面，所述氧化剂是N-甲基吗啉N-氧化物或氢过氧化物如过氧化氢。在一些实施方案中，将式(I)-(IV)的化合物与葡萄糖醛酸轭合，从而形成一种代谢物。另一方面，提供了具有下面结构的代谢物、互变异构体或其立体异构体
“任选地被取代的”或“被取代的”指的是用单价或二价基团代替一个或多个氢原子。
当被取代的取代基包括一种直链基团时，可以在链内发生取代(例如2-羟基丙基、2-氨基丁基等)或者可以在该链的末端发生取代(例如2-羟基乙基、3-氰基丙基等)。被取代的取代基可以是共价结合的碳或杂原子的直链、支链或环状排列。
应当清楚的是，上面的定义不包括不可能的取代方式(例如，被5个氟取代的甲基或被另一个卤素原子取代的卤素原子)。不可能的取代方式对于本领域技术人员而言是众所周知的。
对于本领域技术人员而言显而易见的是，本发明的化合物(包括式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其立体异构体和多晶型物以及任何一种该类化合物可药用的盐、酯、代谢物和前体药物)可以进行互变异构化并且因此可以以其中分子中一个原子的质子转移到另一个原子并且所以该分子原子间的化学键重排的许多互变异构形式存在。见，例如，March，高等有机化学反应，机理和结构(Advanced Organic ChemistryReactions，Mechanisms and Structures)，第4版，John Wiley & Sons，第69-74页(1992)。这里所用的术语“互变异构体”指的是通过质子移动产生的化合物，并且应当清楚的是，只要可以存在，则在本发明中包括所有的互变异构形式。例如，以下的式(Ia)化合物(其是c＝1的式(I)化合物)的互变异构体是式(Ib)的化合物。类似地，式(IVc)化合物的互变异构体是式(IVd)或(IVe)的化合物。

本发明的化合物(包括式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其互变异构体和多晶型物以及其任何一种可药用的盐、酯、代谢物和前体药物)可包含被不对称取代的碳原子。该类被不对称取代的碳原子可使本发明的化合物以对映异构体、非对映异构体和可以根据绝对立体化学进行定义的其它立体异构形式，如(R)-或(S)-形式存在。因此，在本发明中包括本发明化合物的所有该类可能的异构体、其光学纯形式的单个立体异构体、其混合物、外消旋混合物(或“外消旋体”)、非对映异构体的混合物以及单个的非对映异构体。这里所用的术语“S”和“R”构型是由IUPAC 1974RECOMMENDATIONS FOR SECTION E，FUNDAMENTALSTEREOCHEMISTRY，Pure Appl.Chem.4513-30(1976)定义的。对于环状化合物的环位置而言使用术语α和β。参考平面的α-侧是优选的取代基在其上位于较低的标号位置的一侧。位于该参考平面的相对侧上的这些取代基被指定为用β来进行描述。应当注意到，这种用法与环状立体母核(stereoparente)中的用法不同，其中“α”指的是“位于所述平面下”并表示绝对构型。这里所用的术语α和β构型是由CHEMICAL ABSTRACTSINDEX GUIDE-APPENDIX IV(1987)的第203段来进行定义的。
对本领域技术人员还显而易见的是，本发明的化合物(包括式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其立体异构体和互变异构体以及其任何一种可药用的盐、酯、代谢物和前体药物)可以以各种具有不同物理性质的晶形(或“多晶型物”)形式存在。应当清楚的是，只要其可以存在，则本发明中包括为其分离形式或其混合物形式的本发明化合物(包括其代谢物、前体药物、立体异构体和互变异构体以及其任何一种可药用的盐)的所有的多晶型物。
这里所用的术语“可药用的盐”指的是式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的无毒的酸或碱土金属盐。这些盐可以在式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物最终的分离和纯化过程中就地进行制备或者可以通过另外将碱或酸官能团与适宜的有机或无机酸或碱进行反应来制备。代表性的盐非限制性地包括下面的盐乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天门冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、环戊烷丙酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴化物、氢碘化物、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对-甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。还可以用诸如低级烷基卤如甲基、乙基、丙基和丁基氯、溴和碘；二烷基硫酸酯如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯、长链卤化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯、溴和碘、苯基烷基卤化物如苄基和苯乙基溴等之类的物质将包含碱性氮的基团季铵化。从而得到水或油可溶或可分散的产物。
可用于形成可药用的酸加成盐的酸的实例包括无机酸如盐酸、硫酸和磷酸以及有机酸如草酸、马来酸、甲磺酸、琥珀酸和柠檬酸。碱性加成盐可以在式(I)化合物最后的分离和纯化过程中就地进行制备或者可以另外通过将羧酸部分与适宜的碱如可药用金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐或氨水、有机伯、仲或叔胺进行反应来制备。可药用的盐非限制性地包括以碱金属和碱土金属为基础的阳离子的盐如钠、锂、钾、钙、镁、铝盐等以及无毒的铵、季铵和胺阳离子(非限制性地包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等)的盐。用于形成碱加成盐的其它典型的有机胺包括二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。
在于2006年7月21日申请的标题为“苯并咪唑吡啶基醚的制剂”的临时申请(US序号为60/832715；代理人案卷号PP028237.0001)和于2006年8月30日申请的标题为“苯并咪唑吡啶基醚的盐以及其制剂”的临时申请(代理人案卷号PP028258.0001)中也公开了本发明化合物的盐和制剂，其各自在这里都被全部引入作为参考。
这里所用的术语“可药用的酯”指的是在体内可被水解的酯，并且包括那些在人体内可容易地分解从而得到母体化合物或其盐的物质。适宜的酯基包括例如得自可药用的脂族羧酸，特别是链烷酸、链烯酸、环烷酸和链烷双酸的那些，其中各烷基或链烯基部分有利地具有不高于6个碳原子。具体的酯的实例包括甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯。
这里所用的术语“可药用的前体药物”指的是在合理医学判断范围内适于与人和低等动物的组织接触、没有过度的毒性、刺激性、过敏反应等、具有合理的效益/风险比和对其所需应用而言有效的本发明化合物的前体药物以及在可能的情况中本发明化合物的两性离子形式。术语“前体药物”指的是在体内可以容易地转换例如在血液中水解从而产生上面结构式的母体化合物的化合物。在T.Higuchi和V.Stella，“作为新型传递系统的前体药物(Pro-drugs as Novel Delivery Systems)”，the A.C.S.Symposium Series的第14卷和Edward B.Roche编辑，“药物设计中的生物可逆性载体(Bioreversible Carriers in Drug Design)”，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press，1987中提供了详细的讨论，其在这里都被引入作为参考。
对本领域技术人员显而易见的是，本发明的化合物(包括式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其互变异构体、前体药物、立体异构体和多晶型物以及其任何一种可药用的盐、酯和前体药物)可以通过在人或动物体内或细胞中代谢而产生保留了作为抑制剂的活性的药理学活性代谢物。可以用现有技术中已知的常规技术来确定本发明化合物的活性代谢物。见，例如Bertolini，G.等人，J.Med.Chem.402011-2016(1997)；Shan，D.等人，JPharm.Sci.86(7)765-767；Bagshawe K.，Drug Dev.Res.34220-230(1995)；Bodor，N.，Advances in Drug Res.73224-331(1984)；Bundgaard，H.，前体药物的设计(Design of Prodrugs)(Elsevier Press 1985)；和Larsen，I.K.，前体药物的设计和应用，药物设计和开发(Design and Application ofProdrugs，Drug Design and Development)(Krogsgaard-Larsen等人编辑，Harwood Academic Publishers，1991)。应当清楚的是，在本发明中包括是本发明化合物的活性代谢物的各化合物。
术语“癌症”指的是可以通过抑制激酶，特别是Raf激酶而得到有益治疗的癌性疾病，包括例如，实体癌，如癌(例如，肺、胰腺、甲状腺、卵巢、膀胱、乳房、前列腺或结肠的癌症)、黑素瘤、骨髓病症(例如，髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤和红白血病)、腺瘤(例如，绒毛状结肠腺瘤)和肉瘤(例如，骨肉瘤)。
在本发明的代表性实施方案中，本发明的化合物包括例如， {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(4-三氟甲基苯基)-胺， (2-氟-5-吡啶-3-基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (2-氟-5-吡啶-4-基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (4-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(3-三氟甲基-苯基)-胺， (3-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基-氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (4-氯-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (4-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基-氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (4-氯-3-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (4-氟-3-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(4-三氟甲氧基-苯基)-胺， (2-氟-5-三氟甲基-苯基)-(1-甲基-5-{2-[5-甲基-4-(3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-吡啶-4-基氧基}-1H-苯并咪唑-2-基)-胺， (2-氟-5-三氟甲基-苯基)-(1-甲基-5-{2-[5-甲基-4-(4-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-吡啶-4-基氧基}-1H-苯并咪唑-2-基)-胺， 2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-5-三氟甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯， (2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-5-三氟甲基-1H-咪唑-4-基)-甲醇， 2-{4-[1-甲基-2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲腈， (3-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基-氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， {1-甲基-5-[2-(5-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲硫基-苯基)-胺， (3-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， [4-氟-3-(四氢-呋喃-3-基)-苯基]-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (4-溴-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (4-氟-3-异丙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(4-三氟甲硫基-苯基)-胺， (2-氟-5-异丙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (5-叔-丁基-2-氟-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (2-氯-4-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， 2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲腈， (5-叔-丁基-2-氯-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(4-苯基-5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (2-氯-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(4-苯基-5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， {1-甲基-5-[2-(4-苯基-5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(3-三氟甲基-苯基)-胺， (3-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(4-苯基-5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (4-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(4-苯基-5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (2-氯-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (2-氯-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (4-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， {1-甲基-5-[2-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(3-三氟甲基-苯基)-胺， (5-叔-丁基-2-氟-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， [4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， 2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲酸甲酯， 2-{4-[2-(2-氯-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-5-三氟甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯， (2-氟-4-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (2-氯-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (2，5-二甲氧基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (3，5-二甲氧基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(2-三氟甲基-苯基)-胺， (2-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基-氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， (4-乙基-哌嗪-1-基)-(2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-基)-甲酮， 2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺， {1-乙基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-胺， (2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{6-甲氧基-1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺， {6-甲氧基-1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺， (4-乙基-哌嗪-1-基)-(2-{4-[1-甲基-2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-基)-甲酮， {1-乙基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺， 2-{4-[1-甲基-2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺， 2-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基氨基}-5-三氟甲基-苯酚，和 3-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基氨基}-6-三氟甲基-苯酚； 或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐。
另一方面，本发明还涉及制备式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物的方法和用于该类方法中的合成中间体。
如下面详细描述的那样，本发明还涉及制备本发明化合物的方法和用于该类方法中的合成中间体。
合成方法 流程图1说明了本发明化合物的中心二芳基醚部分的构建。将化合物1.1与化合物1.2进行反应(其中L1或L2中的一个是卤素且L1或L2中的另一个是OH)，从而形成醚1.3。该偶合可以在有机溶剂如乙腈或二甲基亚砜中在存在碱的情况下进行并且还可以在升高或回流温度下进行。适宜的碱包括K2CO3、CaCO3、KOH、NaOH或KF·Al2O3(Journal of OrganicChemistry，第63卷，第18期，1998，第6338-6343页)。化合物1.1中的基团Q可以是NH2或氨基前体如NO2或被保护的氨基，该氨基前体其后可以分别通过还原或去保护而被转化成胺。化合物1.2中的Z基团可以是被一个或两个R4基团取代的咪唑基或者可用于形成该类咪唑基的官能团。适宜的官能团包括醛或任何醛前体如其后可以被转化成醛的酯或腈。可以用还原剂如氢化二异丁基铝将该酯和腈基团还原成醛。Z还可以是-CH2OR5，其中R5是羟基保护基团。在稍后的步骤中可以通过将R5去保护和将所得的醇氧化成醛来暴露该醛。如流程图3中所示的那样将该醛转化成被取代的咪唑基。用于形成被取代的咪唑基的其它方法如流程图6中所示。
流程图1
流程图2显示了某些二芳基醚的合成实例。应当清楚的是，为了进行说明，流程图2使用了下面的取代方式Q是NO2，L1是OH，L2是Cl，Z是叔-丁基酯。其中R2是甲基且b是0的醛2.7的合成实例如实施例1中所示。可以通过许多已知的方法将胺2.1转化成烷基胺2.2。一方面，将胺2.1用乙酸酐和甲酸进行处理，从而形成相应的甲酰胺，其可被还原成烷基胺2.2。适宜的还原剂包括存在BF3(OCH2CH3)2情况下的NaBH4。或者，烷基胺2.2可以通过将胺2.1与三氟乙酸酐进行反应，将相应的酰胺用烷化剂如烷基卤烷基化并通过用碱如NaOH进行处理来除去三氟乙酰胺保护基团来进行合成。
氯化物2.5可以通过用过量的亚硫酰氯对吡啶甲酸2.3进行处理，形成酰基氯2.4，然后将其与二碳酸二-叔-丁酯和吡啶接触，从而得到氯化物2.5来进行制备。将烷基胺2.2的醇与氯化物2.5在碱性条件下进行偶合，从而得到醚2.6，可以通过用氢化二异丁基铝进行还原将其直接转化成醛2.7或者可以分两步，通过将酯2.6还原成醇，然后将其氧化成醛来进行转化。
流程图2
流程图3说明了咪唑环的形成。将醛2.7与其中Xb是＝O或＝NHOH且R4p和R4q独立地是H或R4(其中R4的定义如前所述)，前提是R4p和R4q中至少一个是R4的化合物3.1进行反应。该反应可以在极性溶剂如乙酸乙酯/乙醇混合物中和在存在NH4OH的情况下进行，从而得到化合物3.2。可以通过用还原剂如连二亚硫酸钠(Na2S2O4)进行处理来将化合物3.2的硝基还原成胺3.3。
流程图3
流程图4说明了苯并咪唑环的形成。将二胺3.3与硫代异氰酸酯4.1进行反应，从而得到硫脲4.2。用脱硫剂对4.2进行处理，从而得到式(I)的化合物。术语“脱硫剂”指的是适于完成环闭合的物质如FeCl3、2-氯-1-甲基吡啶碘化物(Mukaiyama试剂)、2-氯-1，3-二甲基咪唑氯化物、POCl3或烷基卤如碘甲烷。还可以使用改性的Mukaiyama试剂(Journal ofOrganic Chemistry，第70卷，第7期，2005，第2835-2838页)。
流程图4
或者，可以通过改变偶合反应的顺序来合成本发明的化合物。流程图5说明了作为用于形成完全偶合的五环核的倒数第二步的用于形成醚键的5.1与5.2的偶合和用于形成咪唑环的5.3与3.1的偶合。对于中间体5.1和5.2而言，L3或L4中的一个是卤素且L3或L4中的另一个是OH。这些中间体可以如前面流程图中所示的那样通过在适宜的反应序列中使用适宜的起始材料和/或保护基团来进行制备。该类因素是本领域技术人员的技能。例如，醛5.3可以通过用氢化二异丁基铝对相应的腈(其合成如实施例60中所示)进行还原来制备。根据上面的流程图3将醛5.3与酮3.1进行反应，得到式(I)的化合物。
流程图5
本发明具有三唑端基的化合物可以如流程图6中所示的那样通过将其中Z是腈的化合物6.1与酰肼6.2进行反应来制备。化合物6.3的合成实例如实施例60中所述。
流程图6
应当意识到，该偶合反应中所用的咪唑中间体可以用其它一些合成途径来进行制备。一种该类方法如流程图7中所述。将其中Z是CN的化合物1.3转化成其中Z是脒基的化合物。这种转换可以通过将1.3与醇化物，如甲醇化物反应来进行，从而将该腈转化成亚胺酸酯，接下来将其与铵试剂如醋酸铵或苯甲酸铵进行反应从而形成脒。该脒与其中Xa是离去基团的化合物(Va)的反应提供了烷基化和环化的化合物7.2或其互变异构体。将化合物7.2加热，从而导致消除水(脱水)和形成中间体7.3。其它脱水条件包括用有机酸如乙酸、甲磺酸、樟脑磺酸和三氟乙酸以及无机酸如盐酸和硫酸对7.2进行处理。通常以一罐式序列的形式进行四个反应形成亚胺酸酯、形成脒、烷基化/环化和脱水。
流程图7
本发明的化合物可在体内外用于抑制癌细胞的生长。该化合物可单独使用或与可药用的载体或赋形剂联合使用。适宜的可药用载体或赋形剂包括例如加工剂和药物传递改性剂和增强剂，例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、单糖、二糖、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、葡萄糖、羟丙基-β-环糊精、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡、离子交换树脂等以及其任何两种或多种的组合。在“Remington′s PharmaceuticalSciences”，Mack Pub.Co.，新泽西(1991)中描述了其它适宜的可药用的赋形剂，其在这里被引入作为参考。
本发明化合物的有效量通常包括通过这里所述的试验、已知的或本领域普通技术人员容易确定的其它Raf激酶活性试验或通过探测癌症症状的抑制或缓解足以可察觉地抑制Raf活性的任何数量。
可以与载体物质结合从而产生单一剂型的活性成分的量将根据被治疗的主体和特定给药方式而变化。但是，应当清楚的是，对于任何特定患者而言，特定的剂量水平将取决于许多因素，包括所用具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药物组合和进行治疗的特定疾病的严重程度。可以通过常规实验容易地确定对于给定情况而言的治疗有效量并且其在普通临床医师的技能和判断范围内。
对于本发明的目的而言，治疗有效剂量通常是以单剂量或分割剂量给药于主体的总日剂量，其总计可以为例如0.001至1000mg/kg体重/天和1.0至30mg/kg体重/天。剂量单位组合物可以包含组成日剂量的其约数数量。
本发明的化合物可以以根据需要包含常规无毒可药用载体、助剂和基质的剂量单位制剂的形式被口服给药、胃肠外给药、舌下给药、通过雾化或吸入喷雾进行给药、直肠给药或局部给药。局部给药还可包括使用经皮给药如经皮贴剂或离子电泳装置。这里所用的术语胃肠外包括皮下注射、静脉内、肌内、胸骨内注射或输入技术。
可以用适宜的分散剂或润湿剂和助悬剂根据现有技术来配制可注射制剂，例如可注射的无菌的水性或油性混悬液。可注射的无菌制剂还可以是位于胃肠外可接受的无毒的稀释剂或溶剂中的无菌的可注射的溶液或混悬液，例如可以为位于1，3-丙二醇中的溶液形式。其中，可使用的可接受的基质和溶剂有水、林格氏溶液和等渗的氯化钠溶液。此外，还常用无菌的不挥发油作为溶剂或混悬介质。为此，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的单-或二-甘油酸酯。此外，发现在可注射制剂中还可以使用脂肪酸类如油酸。
可以通过将药物与适宜的无刺激的赋形剂如可可豆脂和聚乙二醇混合到一起来制备用于药物的直肠给药的栓剂，所述赋形剂在常温下是固体，但是在直肠温度下是液体，并且因此将在直肠中熔化和释放药物。
用于口服给药的固体剂型可包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒。在该类固体剂型中，可以将活性成分与至少一种惰性稀释剂如蔗糖、乳糖或淀粉混合到一起。如常规实践中那样，该类剂型除惰性稀释剂外还可包含其它物质，例如润滑剂如硬脂酸镁。在胶囊、片剂和丸剂的情况中，该剂型还可包含缓冲剂。还可以用肠衣对片剂和丸剂进行制备。
用于口服给药的液体剂型包括包含现有技术中常用的惰性稀释剂如水的可药用乳剂、溶液、混悬液、糖浆和酏剂。该类组合物还可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和助悬剂、环糊精和甜味剂、矫味剂以及芳香剂。
本发明的化合物还可以以脂质体的形式进行给药。如现有技术中已知的那样，脂质体通常得自磷脂或其它脂类物质。脂质体是通过分散于含水介质中的单-或多层水合的液晶来形成的。可以使用能形成脂质体的任何无毒的生理学可接受和可代谢的脂质。除本发明的化合物外，脂质体形式的本发明组合物还可包含稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂质是磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，其都可以是天然和合成的。用于形成脂质体的方法在现有技术中是已知的。见，例如，Prescott，Ed.，Methods in Cell Biology，第XIV卷，Academic Press，纽约，N.W.，第33页及以下连续的页(1976)。
虽然本发明的化合物可以作为唯一的活性药物被给药，但是其也可以与一种或多种用于治疗癌症的其它活性剂联用。本发明的化合物还可以与已知的治疗剂和抗癌剂联用，并且本发明所公开的化合物与其它抗癌药或化疗剂的组合也在本发明的范围内。在癌症原理和肿瘤学实践(CancerPrinciples and Practice of Oncology)，V.T.Devita和S.Hellman(编辑)，第6版(2001年2月15日)，Lippincott Williams & Wilkins出版中可以找到该类活性剂的实例。本领域普通技术人员将能根据药物的具体特性和所涉及的癌症辨别活性剂的组合是否有用。该类抗癌剂非限制性地包括下面的物质雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒素/细胞抑制剂、抗增殖剂、异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂和其它血管发生抑制剂、细胞增殖和存活信号的抑制剂、细胞凋亡诱导剂和干扰细胞周期检查点的活性剂。当与放疗共同给药时，本发明的化合物也是有用的。
因此，在本发明的一个实施方案中，本发明的化合物还可以与已知的抗癌剂联用，所述已知的抗癌剂包括例如雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、细胞毒素剂、抗增殖剂、异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其它血管发生抑制剂。
雌激素受体调节剂指的是可以干扰或抑制雌激素与受体结合的化合物，不管其机理如何。雌激素受体调节剂的实例非限制性地包括他莫昔芬、雷洛昔芬、艾多昔芬、LY353381、LY117081、托瑞米芬、氟维司群、4-[7-(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基]-苯基-2，2-二甲基丙酸酯、4，4’-二羟基二苯甲酮-2，4-二硝基苯基-腙和SH646。
雄激素受体调节剂指的是可以干扰或抑制雄激素与受体结合的化合物，不管其机理如何。雄激素受体调节剂的典型实例包括非那雄胺和其它5α-还原酶抑制剂、尼鲁米特、氟他胺、比卡鲁胺、利阿唑和醋酸阿比特龙。
类视色素受体调节剂指的是干扰或抑制类视色素与受体结合的化合物。类视色素受体调节剂的实例包括贝沙罗汀、维甲酸、13-顺式-视黄酸、9-顺式-视黄酸、α-二氟甲基鸟氨酸、IX23-7553、反式-N-(4’-羟基苯基)视黄酰胺(retinamide)和N-4-羧基苯基视黄酰胺。
细胞毒素/细胞抑制剂指的是主要通过直接干扰细胞功能或抑制或干扰细胞有丝分裂而造成细胞死亡或抑制细胞增殖的化合物，包括烷化剂、肿瘤坏死因子、嵌入剂、低氧活化的化合物、微管抑制剂/微管稳定剂、有丝分裂驱动蛋白的抑制剂、有丝分裂进程中所涉及的激酶的抑制剂、抗代谢物；生物响应改性剂；激素/抗激素治疗剂、造血生长因子、单克隆抗体靶向治疗剂、拓扑异构酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂和泛素连接酶抑制剂。
细胞毒素剂的实例非限制性地包括sertenef、恶病质素、异环磷酰胺、他索纳明、氯尼达明、卡铂、六甲密胺、泊尼莫司汀、二溴卫矛醇、雷莫司汀、福莫司汀、奈达铂、奥沙利铂、替莫唑胺、庚铂、雌莫司汀、英丙舒凡甲苯磺酸盐、曲磷胺、尼莫司汀、二溴螺氯铵、嘌嘧替派、洛铂、沙铂、甲基丝裂霉素、顺铂、伊罗夫文、右异环磷酰胺、顺式-胺化二氯(2-甲基-吡啶)铂、苄基鸟嘌呤、葡磷酰胺、GPX100、(反式，反式，反式)-二-mu-(己烷-1，6-二胺)-mu-[二胺-铂(II)]二[二胺(氯)铂(II)]四氯化物、二环乙亚胺基精胺、三氧化二砷、1-(11-十二烷基氨基-10-羟基十一烷基)-3，7-二甲基黄嘌呤、佐柔比星、伊达比星、柔红霉素、比生群、米托蒽醌、吡柔比星、吡萘非特、戊柔比星、氨柔比星、抗瘤酮(antineoplaston)、3’-脱氨基-3’-吗啉代-13-脱氧-10-羟基洋红霉素、安那霉素(annamycin)、加柔比星、依利奈法德、MEN10755和4-脱甲氧基-3-脱氨基-3-环乙亚胺基-4-甲基磺酰基-柔红霉素(见WO 00/50032)。低氧活化的化合物的典型实例是替拉扎明。蛋白酶体抑制剂非限制性地包括乳胞素和硼替佐米(bortezomib)。微管抑制剂/微管稳定剂的实例包括紫杉醇、硫酸长春地辛、3’，4’-二脱氢-4’-脱氧-8’-去长春花碱、多烯紫杉醇、根霉素、多拉司他汀、米伏布林羟乙基磺酸盐、auristatin、西马多丁、RPR109881、BMS184476、长春氟宁、cryptophycin、2，3，4，5，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、无水长春碱(anhydrovinblastine)、N，N-二甲基-L-缬氨酰基-L-缬氨酰基-N-甲基-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-L-脯氨酸-叔-丁酰胺、TDX258、埃博霉素(见例如US专利6,284,781和6,288,237)以及BMS188797。拓扑异构酶抑制剂的典型实例有托泊替康、hycaptamine、伊立替康、卢比替康、6-乙氧基丙酰基-3’，4’-O-外-亚苄基-教酒菌素、9-甲氧基-N，N-二甲基-5-硝基吡唑并[3，4，5-kl]吖啶-2-(6H)丙胺、1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’b，7]-吲嗪并[1，2b]喹啉-10，13(9H，15H)二酮、勒托替康、7-[2-(N-异丙基氨基)乙基]-(20S)喜树碱、BNP1350、BNPI1100、BN80915、BN80942、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、索布佐生、2’-二甲基氨基-2’-脱氧-依托泊苷、GL331、N-[2-(二甲基氨基)乙基]-9-羟基-5，6-二甲基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑-1-甲酰胺、asulacrine、(5a，5aB，8aa，9b)-9-[2-[N-[2-(二甲基氨基)乙基]-N-甲基氨基]乙基]-5-[4-羟基-3，5-二甲氧基苯基]-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并(3’，4’6，7)萘并(2，3-d)-1，3-间二氧杂环戊烯-6-酮、2，3-(亚甲二氧基)-5-甲基-7-羟基-8-甲氧基苯并[c]-啡啶、6，9-二[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]异喹啉-5，10-二酮、5-(3-氨基丙基氨基)-7，10-二羟基-2-(2-羟基乙基氨基甲基)-6H-吡唑并[4，5，1’-de]吖啶-6-酮、N-[1-[2(二乙基氨基)乙基氨基]-7-甲氧基-9-氧代-9H-噻吨-4-基甲基]甲酰胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)吖啶-4-甲酰胺、6-[[2-(二甲基氨基)乙基]氨基]-3-羟基-7H-茚并[2，1-c]喹啉-7-酮和地美司钠。在PCT公开WO01/30768和WO 01/98278、WO 03/050,064(2003年6月19日)、WO03/050,122(2003年6月19日)、WO 03/049,527(2003年6月19日)、WO 03/049,679(2003年6月19日)、WO 03/049,678(2003年6月19日)和WO 03/39460(2003年5月15日)以及未决的PCT申请US03/06403(于2003年3月4日提交)、US03/15861(于2003年5月19日提交)、US03/15810(于2003年5月19日提交)、US03/18482(于2003年6月12日提交)和US03/18694(于2003年6月12日提交)中对有丝分裂驱动蛋白，如人有丝分裂驱动蛋白KSP抑制剂的实例进行了描述。在一个实施方案中，有丝分裂驱动蛋白的抑制剂非限制性地包括KSP的抑制剂、MKLP1的抑制剂、CENP-E的抑制剂、MCAK的抑制剂、Kifl4的抑制剂、Mphosph1的抑制剂和Rab6-KIFL的抑制剂。
在有丝分裂进程中涉及的激酶的抑制剂非限制性地包括极光(aurora)激酶抑制剂、Polo-样激酶抑制剂(PLK)(例如PLK-1的抑制剂)、bub-1的抑制剂和bub-R1的抑制剂。抗增殖剂包括反义RNA和DNA寡核苷酸如G3139、ODN698、RVASKRAS、GEM231和INX3001，以及抗代谢物如依诺他滨、卡莫氟、替加氟、喷司他丁、去氧氟尿苷、曲美沙特、氟达拉滨、卡培他滨、加洛他滨、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠、fosteabine钠水合物、雷替曲塞、paltitrexid、乙嘧替氟、噻唑呋林(tiazofurin)、地西他滨、诺拉曲塞、培美曲塞、奈拉滨(nelzarabine)、2’-脱氧-2’-亚甲基胞苷、2’-氟亚甲基-2’-脱氧胞苷、N-[5-(2，3-二氢-苯并呋喃基)磺酰基]-N’-(3，4-二氯苯基)脲、N6-[4-脱氧-4-[N2-[2(E)，4(E)-十四碳二烯酰基]甘氨酰基氨基]-L-甘油-B-L-甘露糖-吡喃庚糖基]腺嘌呤、aplidine、海鞘素、曲沙他滨、4-[2-氨基-4-氧代-4，6，7，8-四氢-3H-嘧啶并[5，4-b][1，4]噻嗪-6-基-(S)-乙基]-2，5-噻吩酰基(thienoyl)-L-谷氨酸、氨基蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿拉诺新、11-乙酰基-8-(氨基甲酰氧基甲基)-4-甲酰基-6-甲氧基-14-氧杂-1，11-二氮杂四环(7.4.1.0.0)-十四碳-2，4，6-三烯-9-基醋酸酯、苦马豆碱、洛美曲索、右雷佐生、蛋氨酸酶、2’-氰基-2’-脱氧-N4-棕榈酰基-1-B-D-阿糖呋喃糖基(arabinofuranosyl)胞嘧啶和3-氨基吡啶-2-醛缩氨基硫脲。单克隆抗体靶向治疗剂的实例包括具有与癌细胞特异性或靶细胞特异性单克隆抗体相连的细胞毒性剂或放射性同位素的治疗剂。其实例包括Bexxar。HMG-CoA还原酶抑制剂是3-羟基-3-甲基戊二酰基-CoA还原酶的抑制剂。可以用现有技术中众所周知的试验如在US专利4,231,938和WO 84/02131中所述的这些方法来容易地确定对HMG-CoA还原酶具有抑制活性的化合物。可以使用的HMG-CoA还原酶抑制剂的实例非限制性地包括洛伐它汀(MEVACOR；见US4,231,938、4,294,926和4,319,039)、辛伐它汀(ZOCOR；见US4,444,784、4,820,850和4,916,239)、普伐它汀(PRAVACHOL；见US4,346,227、4,537,859、4,410,629、5,030,447和5,180,589)、氟伐它汀(LESCOL；见US 5,354,772、4,911,165、4,929,437、5,189,164、5,118,853、5,290,946和5,356,896)和阿伐它汀(LIPITOR；见US 5,273,995、4,681,893、5,489,691和5,342,952)。可用于本发明方法的这些和其它HMG-CoA还原酶抑制剂的结构式在M.Yalpani，“降低胆固醇的药物(Cholesterol Lowering Drugs)”，Chemistry & Industry，第85-89页(1996年2月5日)的第87页和US专利4,782,084和4,885,314中进行了描述。在一个实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂选自洛伐他汀和辛伐他汀。
异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂是可以抑制任何一种异戊二烯基-蛋白转移酶或任何异戊二烯基-蛋白转移酶的组合的化合物，所说的酶包括法尼基-蛋白转移酶(FPTase)、I型香叶基香叶基-蛋白转移酶(GGPTase-I)和II型香叶基香叶基-蛋白转移酶(GGPTase-1I，也被称为RabGGPTase)。抑制异戊二烯基-蛋白转移酶的化合物的实例包括(±)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮、(-)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮、(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮、5(S)-正-丁基-1-(2，3-二甲基苯基)-4-[1-(4-氰基苄基)-5-咪唑基甲基-2-哌嗪酮、(S)-1-(3-氯苯基)-4-[1-(4-氰基苄基)-5-咪唑基甲基]-5-[2-(乙磺酰基)甲基)-2-哌嗪酮、5(S)-正-丁基-1-(2-甲基苯基)-4-[1-(4-氰基苄基)-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮、1-(3-氯苯基)-4-[1-(4-氰基苄基)-2-甲基-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮、1-(2，2-二苯基乙基)-3-[N-(1-(4-氰基苄基)-1H-咪唑-5-基乙基)氨基甲酰基]哌啶、4-{-[4-羟基甲基-4-(4-氯吡啶-2-基甲基)-哌啶-1-基甲基]-2-甲基咪唑-1-基甲基}苯甲腈、4-{-5-[4-羟基甲基-4-(3-氯苄基)-哌啶-1-基甲基]-2-甲基咪唑-1-基甲基}-苯甲腈、4-{3-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基)苄基]-3H-咪唑-4-基甲基}苯甲腈、4-{3-[4-(5-氯-2-氧代-2H-[1，2′]双吡啶-5′-基甲基]-3H-咪唑-4-基-甲基}苯甲腈、4-{3-[4-(2-氧代-2H-[1，2′]双吡啶-5′-基甲基]-3H-咪唑4-基-甲基}苯甲腈、4-[3-(2-氧代-1-苯基-1，2-二氢吡啶-4-甲基甲基)-3H-咪唑-4-基甲基}苯甲腈、18，19-二氢-19-氧代-5H，17H-6，1012，16-二亚甲基-1H-咪唑并[4，3-c][1，11，4]二氧杂氮杂环十九炔-9-腈、(+-)-19，20-二氢-19-氧代-5H-18，21-桥亚乙基-12，14-亚乙烯基-6，10-亚甲基-22H-苯并[d]咪唑并[4，3-k]-[1，6，9，12]氧杂三氮杂-环十八炔-9-腈，19，20-二氢-19-氧代-5H，17H-18，21-桥亚乙基-6，1012，16-二亚甲基-22H-咪唑并[3，4-h][1，8，11，14]氧杂三氮杂环二十碳炔-9-腈和(+-)-19，20-二氢-3-甲基-19-氧代-5H-18，21-桥亚乙基-12，14-亚乙烯基-6，10-亚甲基-22H-苯并[d]咪唑并[4，3-k][1，6，9，12]氧杂三氮杂环十八炔-9-腈。在下面的公开物和专利中可以找到异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂的其它实例WO 96/30343、WO97/18813、WO 97/21701、WO 97/23478、WO 97/38665、WO 98/28980、WO 98/29119、WO 95/32987、US专利5,420,245、US专利5,523,430、US专利5,532,359、US专利5,510,510、US专利5,589,485、US专利5,602,098、欧洲专利公开0 618 221、欧洲专利公开0 675 112、欧洲专利公开0 604 181、欧洲专利公开0 696 593、WO 94/19357、WO 95/08542、WO 95/11917、WO 95/12612、WO 95/12572、WO 95/10514、US专利5,661,152、WO95/10515、WO 95/10516、WO 95/24612、WO 95/34535、WO 95/25086、WO 96/05529、WO 96/06138、WO 96/06193、WO 96/16443、WO 96/21701、WO 96/21456、WO 96/22278、WO 96/24611、WO 96/24612、WO 96/05168、WO 96/05169、WO 96/00736、US专利5,571,792、WO 96/17861、WO96/33159、WO 96/34850、WO 96/34851、WO 96/30017、WO 96/30018、WO 96/30362、WO 96/30363、WO 96/31111、WO 96/31477、WO 96/31478、WO 96/31501、WO 97/00252、WO 97/03047、WO 97/03050、WO 97/04785、WO 97/02920、WO 97/17070、WO 97/23478、WO 97/26246、WO 97/30053、WO 97/44350、WO 98/02436和US专利5,532,359。对于异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂对血管发生作用的实例而言，可参见European J.ofCancer 55(9)1394-1401(1999)。
血管发生抑制剂指的是可以抑制新血管形成的化合物，不管其机理如何。血管发生抑制剂的实例非限制性地包括酪氨酸激酶抑制剂，如酪氨酸激酶受体Flt-1(VEGFR1)和Flk-1/KDR(VEGFR2)的抑制剂、表皮衍生的、成纤维细胞衍生的或血小板衍生的生长因子的抑制剂、MMP(基质金属蛋白酶)抑制剂、整联蛋白阻滞剂、干扰素-α、白介素-12、戊聚糖聚硫酸酯、环氧合酶抑制剂，包括非甾体抗炎药(NSAID)如阿司匹林和布洛芬以及选择性环氧合酶-2抑制剂如塞来考昔和罗非考昔(PNAS897384(1992)；JNCI 69475(1982)；Arch.Ophthalmol.108573(1990)；Anat.Rec，(238)68(1994)；FEBS Letters 37283(1995)；Clin，Orthop.31376(1995)；J Mol.Endocrinol.16107(1996)；Jpn.J.Pharmacol.75105(1997)；Cancer Res.571625(1997)；Cell 93705(1998)；Intl.J.Mol.Med.2715(1998)；J Biol.Chem.2749116(1999))、甾体抗炎药(如皮质类固醇、盐皮质激素、地塞米松、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙、倍他米松)、羧基酰氨基三唑、考布它汀A-4、角鲨胺、6-O-氯乙酰基-羰基)-烟曲霉醇、沙利度胺、血管他汀、肌钙蛋白-1、血管紧张素II拮抗剂(见Fernandez等人，J.Lab.Clin.Med.105141-145(1985))和VEGF抗体(见NatureBiotechnology，17963-968(October 1999)；Kim等人，Nature，362841-844(1993)；WO 00/44777；和WO 00/61186)。可调控或抑制血管发生并且也可以与本发明的化合物联合的其它治疗剂包括可调控或抑制凝血和纤维蛋白溶解系统的物质(见在Clin.Chem.La.Med.38679-692(2000)中进行的综述)。可以调控或抑制凝血和纤维蛋白溶解途径的该类物质的实例非限制性地包括肝素(见Thromb.Haemost.8010-23(1998))、低分子量肝素和羧肽酶U抑制剂(也被称为活性凝血酶活化的纤维蛋白溶解抑制剂[TAFIa]的抑制剂)(见Thrombosis Res.101329-354(2001))。已经在PCT公开WO 03/013,526和序号为60/349,925(于2002年1月18日申请)的US专利申请中对TAFIa抑制剂进行了描述。本发明还包括本发明化合物与是选择性COX-2抑制剂(通常被定义为对COX-2具有特异抑制性(当用细胞或微生物试验进行评估时，用COX-2的IC50/COX-1的IC50的比例进行测量时，对COX-2的抑制性比对COX-1的抑制性高至少100倍)的物质)的NSAID的联合。该类化合物非限制性地包括在US专利5,474,995(于1995年12月12日公开)、US专利5,861,419(于1999年1月19日公开)、US专利6,001,843(于1999年12月14日公开)、US专利6,020,343(于2000年2月1日公开)、US专利5,409,944(于1995年4月25出版)、US专利5,436,265(于1995年7月25日公开)、US专利5,536,752(于1996年7月16日公开)、US专利5,550,142(于1996年8月27日公开)、US专利5,604,260(于1997年2月18日公开)、US专利5,698,584(于1997年12月16出版)、US专利5,710,140(月1998年1月20)、WO 94/15932(于1994年7月21公开)、US专利5,344,991(于1994年6月6日公开)、US专利5,134,142(于1992年7月28日公开)、US专利5,380,738(于1995年1月10日公开)、US专利5,393,790(于1995年2月20日公开)、US专利5,466,823(于1995年11月14日公开)、US专利5,633,272(于1997年5月27日公开)和US专利5,932,598(于1999年8月3日公开)中所公开的化合物，这些文献在这里都被引入作为参考。用于本发明方法中的COX-2的典型抑制剂包括3-苯基-4-(4-(甲磺酰基)苯基)-2-(5H)-呋喃酮；和5-氯-3-(4-甲磺酰基)苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶。可以在下面的专利、待审的申请和公开物中找到被描述为COX-2的特异性抑制剂并且因此可用于本发明的化合物以及其合成方法(这些文献在这里被引入作为参考)WO 94/15932(于1994年7月21日公开)、US专利5,344,991(于1994年6月6日公开)、US专利5,134,142(于1992年7月28日公开)、US专利5,380,738(于1995年1月10日公开)、US专利5,393,790(于1995年2月20日公开)、US专利5,466,823(于1995年11月14日公开)、US专利5,633,272(于1997年5月27日公开)、US专利5,932,598(于1999年8月3日公开)、US专利5,474,995(于1995年12月12日公开)、US专利5,861,419(于1999年1月19日公开)、US专利6,001,843(于1999年12月14日公开)、US专利6,020,343(于2000年2月1日公开)、US专利5,409,944(于1995年4月25日公开)、US专利5,436,265(于1995年7月25日公开)、US专利5,536,752(于1996年7月16日公开)、US专利5,550,142(于1996年8月27日公开)、US专利5,604,260(于1997年2月18日公开)、US专利5,698,584(于1997年12月16日公开)和US专利5,710,140(于1998年1月20日公开)。血管发生抑制剂的其它实例非限制性地包括内皮他汀、ukrain、豹蛙酶、IM862、5-甲氧基4-[2-甲基-3-(3-甲基-2-丁烯基)环氧乙烷基]-1-氧杂螺环[2，5]辛-6-基(氯乙酰基)氨基甲酸酯、乙酰基地那林、5-氨基-1-[[3，5-二氯-4-(4-氯苯甲酰基)苯基]甲基]-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺、CM101、角鲨胺、考布它汀、RPI4610、NX31838、硫酸化的磷酸甘露五糖、7，7-(羰基-二[亚氨基-N-甲基-4，2-吡咯并羰基亚氨基[N-甲基-4，2-吡咯]-羰基亚氨基]-二-(1，3-萘二磺酸酯)和3-[(2，4-二甲基吡咯-5-基)亚甲基]-2-二氢吲哚酮(SU5416)。
干扰细胞周期检查点的活性剂是可以抑制转导细胞周期检查点信号的蛋白激酶，从而可以使癌细胞对DNA损害剂敏感的化合物。该类物质包括ATR、ATM、Chk1和Chk2激酶的抑制剂以及cdk和cdc激酶抑制剂，并且其特定的例子有7-羟基星孢菌素、黄酮吡醇(flavopiridol)、CYC202(Cyclacel)和BMS-387032。
细胞增殖和存活信号传导途径的抑制剂是抑制细胞表面受体和这些表面受体下游的信号转导级联的药学活性剂。该类物质包括EGFR抑制剂的抑制剂(例如吉非替尼(gefitinib)和埃罗替尼(erlotinib))、ERB-2的抑制剂(例如曲妥单抗)、IGFR的抑制剂、细胞因子受体的抑制剂、MET的抑制剂、PI3K抑制剂(例如LY294002)、丝氨酸/苏氨酸激酶(非限制性地包括Akt的抑制剂如在WO 02/083064、WO 02/083139、WO02/083140和WO 02/083138中所述的这些物质)、Raf激酶的抑制剂(例如BAY-43-9006)、MEK的抑制剂(例如CI-1040和PD-098059)以及mTOR的抑制剂(例如Wyeth CCI-779)。该类物质包括小分子抑制剂化合物和抗体拮抗剂。
细胞凋亡诱导剂包括TNF受体家族成员(包括TRAIL受体)的活化剂。
在本发明某些优选的实施方案中，与本发明化合物联合用于治疗癌症的典型活性剂包括例如依立替康、托泊替康、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、卡铂、顺铂、紫杉烷类、特扎他滨(tezacitabine)、环磷酰胺、长春花生物碱、伊马替尼(Gleevec)、蒽环类抗生素、利妥昔单抗、曲妥单抗、以及其它癌症化疗剂。
与本发明化合物联用的上面的化合物将以医生手册(the Physicians′Desk Reference)(PDR)第47版(1993)(其在这里被引入作为参考)中所示的治疗量进行应用，或者该类治疗应用量将是本领域普通技术人员已知的。
本发明的化合物和其它抗癌剂可以以推荐的最大临床剂量或较低剂量进行应用。可以根据给药途径、疾病的严重程度以及患者响应来改变本发明组合物中活性化合物的剂量水平以获得所需的治疗响应。该组合可以以独立的组合物或者以包含两种活性剂的单一剂型的形式进行给药。当以组合形式进行给药时，所述治疗剂可以被配制为可以在相同的时间或不同的时间被给药的独立的组合物，或者所述治疗剂可以以单一组合物的形式被给予。
抗雌激素药如他莫昔芬通过诱导细胞周期停滞抑制了乳癌生长，其需要细胞周期抑制剂p27Kip的作用。最近，已经表明Ras-Raf-MAP激酶途径的活化改变了p27Kip的磷酸化状态，从而使得其在阻滞细胞周期中的抑制活性被减弱，从而有助于抗雌激素药耐受性(Donovan等人，J Biol.Chem.27(540888，2001)。如Donovan等人所报道的那样，通过用MEK抑制剂进行治疗来抑制MAPK信号改变了用激素难以治疗的乳癌细胞系中p27的磷酸化状态并且由此恢复了激素敏感性。因此，一方面，在激素依赖性癌症如乳癌和前列腺癌的治疗中，可以用式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物或其互变异构体、可药用的盐或其互变异构体可药用的盐的任何实施方案来逆转用使用常规抗癌剂时在这些癌症中常常观察到的激素耐受性。
在血液学癌症，如慢性髓细胞性白血病(CML)中，染色体易位引起了BCR-AB1酪氨酸激酶的组成活化。因为抑制了Ab1激酶活性，所以受病痛折磨的患者对Gleevec(一种小分子酪氨酸激酶抑制剂)有响应。但是，许多患有晚期疾病的患者开始时对Gleevec有响应，但是后来由于引起耐受性的Ab1激酶结构域的突变，其疾病稍后复发。在体外研究中已经证明，BCR-Av1利用Raf激酶途径来引起其作用。此外，在相同途径中抑制一种以上的激酶对引起突变的耐受性提供了另外的保护作用。因此，在本发明的另一方面，在血液学癌症的治疗中，将任何一种实施方案的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其互变异构体、其可药用的盐或其互变异构体可药用的盐与至少一种另外的活性剂，如Gleevec联用以逆转或预防对所述的至少一种另外的活性剂的耐受性。
另一方面，本发明涉及抑制个体体内至少一种MAPK信号转导途径中的丝氨酸/苏氨酸激酶或治疗个体由MAPK信号转导途径中的丝氨酸/苏氨酸激酶介导的生物学情况的方法，其包括施用包含可有效抑制患者体内至少一种MAPK信号转导途径中的丝氨酸/苏氨酸激酶的活性的至少一种式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或互变异构体、其可药用的盐或其互变异构体可药用的盐的治疗组合物。
本发明这方面的治疗组合物可用于治疗对该类抑制剂有需求的患者(例如，患有由MAPK信号异常介导的癌症的患者)。由异常的MAPK信号介导的癌症类型包括例如黑素瘤、乳头状癌、甲状腺癌、卵巢癌、结肠癌、胰腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)和急性髓细胞性白血病。可通过给予抑制野生型或突变型Ras、Raf、MEK或ERK的化合物来抑制异常的MAPK信号。
在一个实施方案中，本发明提供了一种抑制Ras(野生型或突变型Ras)的方法。该方法包括给需要其的个体施用有效量的任何一种实施方案的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其互变异构体、可药用的盐或其互变异构体可药用的盐。
在一个实施方案中，本发明提供了一种抑制Raf(野生型或突变型B-Raf)的方法。该方法包括给需要其的个体施用有效量的任何一种实施方案的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其互变异构体、可药用的盐或其互变异构体可药用的盐。
在一个实施方案中，本发明提供了一种抑制MEK的方法。该方法包括给需要其的个体施用有效量的任何一种实施方案的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其互变异构体、可药用的盐或其互变异构体可药用的盐。
在一个实施方案中，本发明提供了一种抑制ERK的方法。该方法包括给需要其的个体施用有效量的任何一种实施方案的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其互变异构体、可药用的盐或其互变异构体可药用的盐。
如下面实施例82-86和89-90中所述和如图6-12B中所示的那样，用于本发明这一方法中的一种示例性化合物——1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺表现出有效抑制MAPK信号转导途径的作用。如图82中所示的那样，在生物化学试验中，该化合物是有效的B-Raf、c-Raf、突变型B-Raf和突变型Ras的抑制剂，证明了其对突变型B-Raf活性的抑制作用(IC50为0.0053μM)、对B-Raf活性的抑制作用(IC50为0.068μM)和对c-Raf活性的抑制作用(IC50为0.004μM)。用所述化合物进行的治疗在所试验的所有三种突变型B-Raf异种移植物模型(A375M5、MEXF276和HT29)中都造成了肿瘤消退，并且如下面表7中所概述的和如在实施例84、85和86中所述的那样，在K-Ras和N-Ras驱动的异种移植物模型中产生了肿瘤生长抑制。
如图7B、8B和10C中所示的那样，在用{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺治疗后对肿瘤细胞A375M、MEXF276和HCT-116中目标调节进行的分析表明其以剂量和时间依赖性的方式抑制了MEK的磷酸化作用。此外，如图7D、8C和9C中所示的那样，用该化合物对肿瘤细胞A375M、MEXF276和HCT-116进行的治疗调控着Raf的下游标记物，包括BIM、细胞周期蛋白D1、p27Kip和pAKT。在临床前模型中进行的这些试验表明{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺对MEK目标磷酸化作用和MAPK途径中Raf的下游信号分子都表现出剂量和时间依赖性的抑制作用。
另一方面，本发明涉及抑制个体体内至少一种选自VEGFR-2、PDGFR-β、pERK、bFGF、FGFR1、FGFR2、FGFR3、c-Kit和CSF-1R的酪氨酸激酶受体或者治疗由VEGFR-2、PDGFR-β、pERK、bFGF、FGFR1、FGFR2、FGFR3、c-Kit和CSF-1R的至少一种介导的生物学情况的方法，其包括施用包含可有效抑制个体体内的酪氨酸激酶受体的至少一种式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其可药用盐的治疗组合物。
本发明的治疗化合物可用于治疗对该类抑制剂有需求的患者(例如，患有由酪氨酸激酶受体信号转导异常介导的癌症的患者)。由酪氨酸激酶受体信号转导异常介导的癌症包括例如黑素瘤、乳癌、膀胱癌、肺癌、甲状腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肥大细胞白血病、生殖细胞肿瘤、小细胞肺癌、胃肠道间质瘤、急性骨髓性白血病(AML)、成神经细胞瘤和胰腺癌。
在一个实施方案中，本发明提供了一种抑制VEGFR-2的方法。该方法包括给需要其的个体施用有效量的任何一种实施方案的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其可药用的盐。该方法可通过抑制血管发生来用于治疗实体瘤。
在一个实施方案中，本发明提供了一种抑制PDGFR-β的方法。该方法包括给需要其的个体施用有效量的任何一种实施方案的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其可药用的盐。
在一个实施方案中，本发明提供了一种抑制c-Kit的方法。该方法包括给需要其的个体施用有效量的任何一种实施方案的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其可药用的盐。
在一个实施方案中，本发明提供了一种抑制CSF-1R的方法。该方法包括给需要其的个体施用有效量的任何一种实施方案的式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物或其可药用的盐。
在生物化学试验中，用于本发明这一方面的方法的一种示例性化合物——{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-4-三氟甲基-苯基)-胺是有效的酪氨酸激酶受体VEGFR-2、PDGFR-β、pERK、bFGF、FGFR1、FGFR2、FGFR3、c-Kit和CSF-1R的抑制剂。如实施例87中所示，该化合物表现出抑制VEGFR-2活性(IC50为0.07μM)、抑制PDGFR-β(IC50为0.0032μM)、抑制c-Kit(IC50为0.02μM)和抑制CSF-1R(IC50为0.20μM)的作用。此外，如图13所示和如实施例88中所述的那样，该化合物在体内基质胶(matrigel)模型中诱导了血管发生的抑制。
通过参考下面的实施例可以更容易地理解本发明，提供这些实施例是为了进行说明，并不是要用其对本发明进行限制。
在下面的实施例以及本申请的各处中，下面的缩写具有下面的含义。如果没有说明，则该术语具有其通常公认的含义。
APCI 大气压化学电离质谱 aq.含水的 atm大气压 cm 厘米 ℃ 摄氏度 DIPEA 二异丙基乙基胺 DMC2-氯-1，3-二甲基咪唑啉氯化物 DMSO 二甲基亚砜 eq.当量 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH乙醇 G或gm 克 h/hr/hrs小时 HPLC高效液相色谱法 IPA 异丙醇 L 升 LCAP液相色谱面积百分比 LC/MS 液相色谱-质谱 M 摩尔浓度 MeCN乙腈 mL 毫升 NaOMe 甲醇钠 1-PrOH 1-丙醇 TEA 三乙胺 TFAA三氟乙酸酐 THF 氢呋喃 用于下面实施例化合物中的代表性侧链通常可以根据下面的方法来进行制备 实施例1 {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺的制备
步骤1
给一个500mL的三颈烧瓶配上机械搅拌器并加入K2CO3(4.15g，30mmol)。将该烧瓶密封，抽空并将其火焰干燥。使该装置冷却至室温并将其用氩气净化。向该反应烧瓶中加入4-氨基-3-硝基苯酚1a(3.08g，20mmol)、4-氯吡啶-2-甲酸叔-丁酯1b(5.2g，24mmol)和无水DMSO(30mL)。将所得的混合物剧烈搅拌并将其加热至100℃加热约14小时。将该反应倾倒到冰冷的磷酸盐缓冲液(pH＝7)中并将该反应烧瓶用MTBE(甲基叔丁基醚)和水充分进行洗涤。将所合并的二相混合物用硅藻土(＞2cm的垫)过滤。对该层进行分配和分离并将水相用MTBE(3×100mL)进行萃取。将所合并的有机层用水洗涤(5×100mL)，干燥(MgSO4)并蒸发。将该残余物粗品吸附到SiO2上，并用快速柱色谱对其进行纯化(4∶1，2∶1，1∶1己烷-EtOAc(乙酸乙酯))，得到4.92g(14.9mmol，收率为74％)黄褐色固体形式的1c。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.58(d，J＝5.8Hz，1H)，7.90(d，J＝2.8Hz，1H)，7.56(d，J＝2.5Hz，1H)，7.17(dd，J＝2.8，8.8Hz，1H)，6.94(dd，J＝2.8，5.8，Hz，1H)，6.91(d，J＝9.1Hz，1H)，6.15(br s，2H)，1.62(s，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ165.8，164.0，151.8，151.5，143.4，143.2，131.5，129.8，121.0，118.0，114.2，113.1，83.0，28.4；mp 163-166℃。
步骤2
在0℃下，向硝基苯胺1c(5.62g，17mmol)在CH2Cl2(85mL)中的溶液中加入TFAA(2.4mL，3.6g，17mmol)。然后，除去冷却浴并将该反应在室温下维持2小时。将该反应冷却至0℃并向其中加入TBACl(氯化四丁基铵，2.5g，8.5mmol)、Me2SO4(硫酸二甲酯，3.2mL，4.3g，34mmol)和10％NaOH(34mL)。将所得的混合物在室温下剧烈搅拌4小时。将该反应用水稀释并对所得的层进行分配和分离。将水相用CH2Cl2(3×100mL)进行萃取并将所合并的有机层用盐水洗涤(2×100mL)，干燥(MgSO4)并蒸发。将该残余物粗品吸附到硅胶上并用快速柱色谱对其进行纯化(4∶1，2∶1，1∶1，1∶2己烷/EtOAc)，从而得到4.5g(13.0mmol，76％)黄-橙色固体形式的1d。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.54(d，J＝5.5Hz，1H)，8.04(br d，J＝4.7Hz，1H)，7.93(d，J＝2.8Hz，1H)，7.53(d，J＝2.5Hz，1H)，7.25(app dd，J＝2.8，9.1Hz，1H)，6.91(m，2H)，3.04(d，J＝4.9Hz，3H)，1.59(s，9H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ165.9，164.1，151.5，144.7，142.1，130.4，118.8，115.5，114.1，112.9，82.9，30.4，28.5；mp 187-189℃。
步骤3
向一个用N2净化的火焰干燥的500mL三颈圆底烧瓶中加入LAH(氢化铝锂，3.0g，75mmol)和无水THF(240mL)。将所得的混悬液冷却至0℃并在将其内部反应温度保持在5℃下的同时缓慢加入叔-丁基酯1d(20.7g，60mmol)。然后，将该反应混合物在0℃下搅拌2小时，然后将其在室温下搅拌一夜。加入NaBH4(2.27g，60mmol)并将该反应混合物在室温下再搅拌1小时。在判断其反应完全后，相继滴加水(3mL)、15％NaOH(3mL)和水(9mL)对该反应混合物进行处理。将所得的混合物用硅藻土过滤并将剩余的固体用EtOAc和甲醇进行洗涤。将所合并的有机部分蒸发并将所得的残余物粗品吸附到SiO2上并用快速柱色谱对其进行纯化(97∶3CH2Cl2-MeOH)，从而得到7.63g(27.7mmol，46％)红-橙色固体形式的1e。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.40(d，J＝5.5Hz，1H)，8.05(br s，1H)，7.96(d，J＝2.75Hz，1H)，7.29(d，J＝2.75Hz，1H)，6.92(d5 J＝9.35Hz，1H)，6.75(m，2H)，4.68(s，2H)，3.07(d，J＝5.23Hz，3H)。
步骤4
向一个100mL的圆底烧瓶中加入苄醇1e(1.38g，5.0mmol)、MnO2(6.52g，75mmol)和CHCl3(20mL)。将所得的混悬液在室温(rt)下搅拌2天。将该反应混合物用硅藻土过滤，并将剩余的固体依次用CHCl3和EtOH进行洗涤。将所合并的有机部分蒸发，吸附到硅胶上并用快速柱色谱对其进行纯化(98∶2 CH2Cl2/MeOH)，从而得到790mg(2.89mmol，58％)橙色固体形式的1f。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.01(s，1H)，8.64(d，J＝5.5Hz，1H)，8.09(br S，1H)，7.96(d，J＝2.75Hz，1H)，7.37(d，J＝2.48Hz，1H)，7.29(d，J＝2.75Hz，1H)，7.08(dd，J＝2.47，5.5Hz，1H)，6.94(d，J＝9.35Hz，1H)，3.08(d，J＝5.23Hz，3H)。
步骤5
咪唑环形成(Baldwin，J.J.；Engelhardt，E.L.；Hirschmann，R.；Lundell，G.F.；Ponticello，G.S.J.Med.Chem 1979，22，687)将化合物1g(Lancaster(Windham，NH)，25.75mL，136.5mmol)加入到NaOAc(22.4g，273mmol)在H2O(60mL)中的溶液中并将所得的溶液加热至100℃加热40分钟。在冷却至室温(室温)后，将1h的溶液加入到1f(25g，91mmol)在NH4OH(150mL)和甲醇(450mL)中的混悬液中。将所得的混合物在室温下搅拌一夜。TLC(薄层色谱，95∶5 CH2Cl2/MeOH)表明1f被完全消耗。将该粗产物浓缩至含水的浆液，并将其在饱和Na2CO3和CH2Cl2之间进行分配。将水相用CH2Cl2萃取三次，并将所合并的有机物用盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)并对其进行浓缩，从而得到31.6g橙色固体形式的1i(83mmol)(收率为91％)。不需要进一步进行纯化。可以以相似方式制备用于制备被取代的咪唑的其它中间体。例如，中间体1i2是如下面所示的那样按照步骤5用3，3，3-三氟-1-苯基丙烷-1，2-二酮水合物代替1h来合成的(MeOH＝甲醇，RT＝室温，o/n＝一夜，分钟＝分钟)
中间体1i3是如下所示那样按照步骤5用1-苯基-1，2-丙烷二酮代替1b来进行合成的
中间体1i4是如下所示那样按照步骤5用1-(3-三氟甲基-苯基)-1，2-丙烷二酮或1-(4-三氟甲基苯基)-1，2-丙烷二酮代替1h来进行合成的
中间体1i5是如下所示那样按照步骤5，并结合US专利5,374,615中的操作，用由4，4，4-三氟-3-氧代丁酸乙酯制得的(2Z)-4，4，4-三氟-2-(羟基亚氨基)-3-氧代丁酸乙酯代替1h来进行合成的(NMA＝N-甲基乙酰胺)
步骤6
将硝基苯胺1i(45.76g，120mmol)在MeOH(220mL)和EtOAc(200mL)中的浆液用N2喷射20分钟，然后向其中加入10％Pd/C(12.77g，120mmol)在MeOH(60mL)中的混悬液。将该反应用H2净化并将其在H2气氛下维持2天。将该反应用硅藻土垫过滤并将所收集的固体依次用MeOH和EtOAc进行洗涤。将所合并的有机滤液蒸发，将所得的固体与CH2Cl2共沸，然后将其在真空下干燥一夜，从而得到40.17g(115mmol)黄褐色粉末形式的1j(收率为96％)。LC/MS m/z 336.1(MH+)，tR＝1.81分钟。
步骤7
在室温下，将异硫氰酸4-三氟甲基苯基酯(23.37g，115mmol)加入到进行着搅拌的二胺1j(40.17g，115mmol)在MeOH(460mL)中的溶液中。将该反应在室温下维持16小时。在判断其反应完全后，向该反应中加入FeCl3(20.52g，126.5mmol)在MeOH(50mL)中的溶液并将所得的混合物在室温下搅拌一夜。将该反应混合物粗品加入到一个包含EtOAc(750mL)和水(750mL)的3L的分液漏斗中。进行层分离并将水相用EtOAc进行萃取(保存水相)。将有机层合并，用饱和Na2CO3水溶液、水和盐水进行洗涤，然后对其进行干燥(MgSO4)并将其浓缩。通过加入饱和Na2CO3水溶液使所保存的水相成碱性(pH＝10)并将所得的浆液加入到一个包含EtOAc(500mL)的3L的分液漏斗中。将该混合物搅拌并将所得的乳液用滤纸过滤，然后进行层分离并将水相用EtOAc进行萃取(2×500mL)。将有机层合并，用盐水洗涤，然后对其进行干燥(MgSO4)，加入到之前的萃取物质中并对其进行浓缩。将所合并的产物用CH2Cl2(500mL)进行研磨，吸附到SiO2上并用快速柱色谱对其进行纯化。最后用CH2Cl2对该物质进行研磨，制得纯的白色固体形式的{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺。LC/MS m/z 519.1(MH+)；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.44(d，J＝5.5Hz，1H)，7.75(d，J＝8.8Hz，2H)，7.61(dd，J＝2.2，8.5Hz，1H)，7.59(d，J＝8.8Hz，2H)，7.56(d，J＝2.5Hz，1H)，7.38(app d，J＝8.5Hz，1H)，7.23(d，J＝1.9Hz，1H)，6.96(dd，J＝2.2，8.5Hz，1H)，6.93(dd，J＝2.5，5.5Hz，1H)，3.76(s，3H)；LC/MS m/z＝519.0，tR＝2.57分钟(MH+)；C24H16F6N6O的分析计算值C 55.6，H 3.11，N16.21；实测值C 55.81，H 3.43，N 16.42；mp217-220℃。
实施例2 (2-氟-5-吡啶-3-基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺的制备
(2-氟-5-吡啶-3-基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺是如上面实施例1的步骤7所述的那样用3-(4-氟-3-异氰硫基-苯基)-吡啶来进行合成的。LC/MS m/z 546.1(MH+)，Rf1.82分钟。
实施例3 (2-氟-5-吡啶-4-基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺的制备
(2-氟-5-吡啶-4-基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺是如上面实施例1的步骤7所述的那样用4-(4-氟-3-异氰硫基-苯基)-吡啶来进行合成的。LC/MS m/z 546.5(MH+)，Rf1.83分钟。
实施例4 (4-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺的制备
(4-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺是如上面实施例1的步骤7所述的那样用4-叔-丁基苯基异硫氰酸酯来进行合成的。LC/MS m/z 425.4(MH+)，Rf 2.56分钟。
实施例5 {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(3-三氟甲基-苯基)-胺
{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(3-三氟甲基-苯基)-胺是如上面实施例1的步骤7所述的那样用3-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯来进行合成的。LC/MS m/z 519.4(MH+)，Rf2.36分钟。
实施例6 (3-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺的制备
(3-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基-氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺是如上面实施例1的步骤7所述的那样用3-乙基苯基异硫氰酸酯来进行合成的。LC/MS m/z 479.4(MH+)，Rf 2.32分钟。
实施例7 (4-氯-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺的制备
(4-氯-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺是如上面实施例1的步骤7所述的那样用4-氯苯基异硫氰酸酯来进行合成的。LC/MS m/z 485.4(MH+)，Rf 2.23分钟。
实施例8 (4-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺的制备
(4-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基-氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺是如上面实施例1的步骤7所述的那样用4-乙基苯基异硫氰酸酯来进行合成的。LC/MS m/z 479.5(MH+)，Rf 2.31分钟。
实施例9 (4-氯-3-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺的制备
(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺是如上面实施例1的步骤7所述的那样用4-氯-3-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯来进行合成的。LC/MS m/z 553.4(MH+)，Rf 2.51分钟。
实施例10 (4-氟-3-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺的制备
(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺是如上面实施例1的步骤7所述的那样用4-氟-3-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯来进行合成的。LC/MS m/z 537.4(MH+)，Rf 2.40分钟。
实施例11 {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲氧基-苯基)-胺的制备
{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(4-三氟甲氧基-苯基)-胺是如上面实施例1的步骤7所述的那样用4-(三氟甲氧基)苯基异硫氰酸酯来进行合成的。LC/MS m/z 535.4(MH+)，Rf2.24分钟。
实施例12 (2-氟-5-三氟甲基-苯基)-(1-甲基-5-{2-[5-甲基-4-(3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-吡啶-4-基氧基}-1H-苯并咪唑-2-基)-胺的合成
(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-(1-甲基-5-{2-[5-甲基-4-(3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-吡啶-4-基氧基}-1H-苯并咪唑-2-基)-胺是用与上面实施例1所述相似的操作，用2-氟-5-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯来进行合成的。LC/MSm/z 627.5(MH+)，Rf 2.79分钟。
实施例13 (2-氟-5-三氟甲基-苯基)-(1-甲基-5-{2-[5-甲基-4-(4-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-吡啶-4-基氧基}-1H-苯并咪唑-2-基)-胺的制备
(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-(1-甲基-5-{2-[5-甲基-4-(4-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-吡啶-4-基氧基}-1H-苯并咪唑-2-基)-胺是用与上面实施例1所述相似的操作，用2-氟-5-(三-氟甲基)苯基异硫氰酸酯来进行合成的。LC/MSm/z 627.5(MH+)，Rf 2.79分钟。
实施例14 2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-5-三氟甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯的制备
2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-5-三氟甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯是用与上面实施例1所述相似的操作，用2-氟-5-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯来进行合成的。LC/MS m/z609.5(MH+)。
实施例15 (2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-5-三氟甲基-1H-咪唑-4-基)-甲醇的制备
将Red-Al(氢化二(2-甲氧基乙氧基)铝钠，65％的甲苯溶液，0.1mL)滴加到2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-5-三氟甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯(0.0104g，0.017mmol)在甲苯中的溶液中。观察到泡腾并且在20分钟后，将该反应用H2O、NaOH淬熄并用EtOAc对其进行萃取。将有机层用H2O洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并对其进行浓缩，从而得到5.9mg(2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-5-三氟甲基-1H-咪唑-4-基)-甲醇粗品，将其进一步用RP HPLC(反相HPLC)进行纯化，从而得到1.1mg该化合物的纯品(纯度为98％)。LC/MS m/z 567.1(MH+)，Rf 2.40分钟。
实施例16 2-{4-[1-甲基-2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲腈的制备
将根据实施例1制备的{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺(1.83g，3.4mmol)和28％NH4OH(23mL)在MeOH(10mL)中的浆液密封在一根试管中并将其加热至140℃加热3小时。在用LC/MS判断其反应完全后，将该反应混合物粗品加入到分液漏斗中并用EtOAc(50mL)和水对其进行分配(50mL)。进行层分离并将水相用EtOAc进行萃取(2×50mL)。将有机层合并，用盐水洗涤，然后对其进行干燥(MgSO4)并将其浓缩。将该粗品吸附到SiO2上并用快速柱色谱对其进行纯化，从而得到白色固体形式的2-{4-[1-甲基-2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-1H-苯并-咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲腈。LC/MS m/z 476.1(MH+)。
实施例17-59a 下面表1中所示的化合物(实施例17-59a)是按照实施例1-16中所述的操作来进行制备的。在这些化合物的合成中所用的各种起始材料对于本领域技术人员而言将是显而易见的(例如Tordeux，M.；Langlois，B.；Wakselman，C.J Chem Soc.Perkin Trans 1 1990，2293)。
表1




实施例60 (2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-吡啶-2-基-2H-[1，2，4]三唑-3-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺的制备
4-[2-(2-氟-5-三氟-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑5-基氧基]-吡啶-2-甲腈的制备
步骤1.4-(4-氨基-3-硝基-苯氧基)吡啶-2-甲腈的合成
将碳酸钾(9g)在加热的情况下真空干燥，将其在氮气下冷却至室温。加入4-氨基-3-硝基苯酚(3.4g)、4-氯-2-氰基吡啶(3.0g)和二甲基亚砜(30mL，无水的)。将该系统在氮气下进行搅拌，同时将其加热至103℃并将其在这种温度下加热1小时。然后，将该反应冷却至室温，倾倒到冰/H2O(500mL)上，收集沉淀，洗涤(H2O)，溶解(EtOAc)，干燥(Na2SO4)，过滤，除去溶剂，得到一种固体。将其混悬(Et2O)，收集，风干4.1g(73.5％)并收集第二批产物(0.55gm，10％)。m/z＝257(M+1)。
步骤2.N-[4-(2-氰基-吡啶-4-基氧基)-2-硝基-苯基]-2，2，2-三氟-N-甲基-乙酰胺的合成
将碳酸钾(1.6g)在加热的情况下真空干燥，冷却至室温并在氮气下将其与4-(4-氨基-3-硝基-苯氧基)吡啶-2-甲腈(2.0g)一起混悬于二氯甲烷(30mL)中。将其冷却至0℃并向其中加入纯净的三氟乙酸酐(2.2mL)。在进行添加时，起始物质迅速变成溶液。在0℃下10分钟后，将该混合物用二氯甲烷稀释，洗涤(H2O，NaCl水溶液)，干燥(K2CO3)，过滤，除去溶剂，得到一种黄色泡沫。m/z＝353(M+1)。将该产物在不进行纯化的情况下应用。将碘甲烷(0.53mL)在氮气下加入到碳酸钾(1.858g)在二甲基甲酰胺DMF(30mL，包含化合物2，～7.8mmol)中的混悬液中。将该混悬液在室温下搅拌一夜，然后将其倾倒到H2O(300mL)中，萃取(Et2O，3×150mL)，将所合并的萃取物洗涤(H2O，NaCl水溶液)，干燥(碳酸钾)，过滤，除去溶剂，得到一种橙色的油状物(7.4922g)。m/z＝367(M+1)。
步骤3.4-(4-甲基氨基-3-硝基-苯氧基)-吡啶-2-甲腈的合成
在室温下，将NaOH(1mL，1N aq.)滴加到N-[4-(2-氰基-吡啶-4-基氧基)-2-硝基-苯基]-2，2，2-三氟-N-甲基-乙酰胺(3,440mg)在乙醇(6mL)中的溶液中。在40分钟后，将该混合物用H2O(20mL)稀释并将其冷却至0℃。收集亮橙色的晶体，洗涤(H2O)并将其风干311.1mg(94％)。m/z＝271(M+1) 步骤4.4-[2-(2-氟-5-三氟-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-甲腈的合成
将钯披碳(46mg，10％w/w)在氮气下混悬于MeOH(2mL)中。在氮气下，在室温下，将所得的混悬液加入到4-(4-甲基氨基-3-硝基-苯氧基)-吡啶-2-甲腈(311mg)在MeOH(3mL)中的混悬液中。将其气氛换成氢气，并将该系统在1atm氢气下剧烈搅拌1小时。然后，将其气氛换成氮气，将该混合物过滤(硅藻土)并将滤液不进行进一步纯化地用于下一个反应。m/z＝242(M+1)。将2-氟-5-三氟甲基苯基异硫氰酸酯(250mg)加入到化合物5在MeOH(10mL)中的溶液中。将该溶液在回流下搅拌2小时。在判断其反应完全后，向该反应中加入无水FeCl3(1.3 eq.5 244mg)并将所得的混合物在室温下搅拌一夜。将该反应混合物粗品加入到一个包含EtOAc和水的分液漏斗中。进行层分离并将水相用EtOAc进行萃取。将有机层合并，用饱和Na2CO3水溶液、水和盐水进行洗涤，然后对其进行干燥(MgSO4)并将其浓缩。将这种物质用色谱进行处理(在硅胶上，用0-5％MeOH的二氯甲烷溶液梯度洗脱)，以28％的收率(以化合物4计)分离得到所需化合物。m/z＝428(M+1)。
步骤5.(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-吡啶-2-基-2H-[1，2，4]三唑-3-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺
步骤6 将4-[2-(4-氟-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-甲腈溶解于EtOH(0.1M)中并向其中加入NaOEt(1eq.，0.5M EtOH溶液)，然后向其中加入皮考啉基酰肼(1eq.)并将该溶液在微波中在140℃下加热2000秒。然后，将该反应混合物浓缩并用反相HPLC对其进行纯化，从而得到所需产物，m/z＝547(M+1)。
实施例61-64 下面表2中所示的化合物(实施例61-64)是按照实施例60所述的操作来进行制备的。 表2
实施例65 N-(4-羟基-2-硝基苯基)-甲酰胺的制备
N-(4-羟基-2-硝基苯基)-甲酰胺可以根据下面的方法来进行制备 1.建立一个配有内部温度探针、温度控制器、加热套、冷凝器、机械搅拌器、1-L加料漏斗和氮气入口的3-L、5-颈反应烧瓶。将该反应器用氮气充溢5分钟。
2.向该烧瓶中加入乙酸酐(245mL)。将其在氮气下进行搅拌。
3.一次性加入甲酸(125mL)(由于混合以及乙酸酐和甲酸之间的反应，观察到放热)。
4.将内部温度(IT)终点设置至60℃并开始进行加热。在其IT达到60℃后，搅拌并将其再维持2小时。
5.用冰浴对内含物进行冷却。
6.当其IT达到环境温度(约20℃)时，通过1-L的加料漏斗开始分批加入4-氨基-3-硝基苯酚(160g)在700mL无水THF(四氢呋喃)中的溶液，使其IT不超过40℃。产物开始以黄色固体形式沉淀出来。
7.当完全加入时，用加热套代替冰浴。将IT终点设置在60℃并开始进行加热。
8.用HPLC对反应进程进行监测。该反应通常进行不到1小时。
9.当起始材料的面积百分比＜1％时，加入500mL水。将其用冰浴冷却至室温。
10.通过真空过滤来收集产物。将滤饼用3×200mL水进行洗涤。风干，并将其在烘箱中在50℃下在27in.Hg真空下用温和的空气或氮气流进一步干燥，直至达到恒重。
实施例66 4-甲基氨基-3-硝基苯酚的制备
4-甲基氨基-3-硝基苯酚可以根据下面的操作来进行制备 1.建立一个配有内部温度探针和氮气入口的500mL、3-颈反应烧瓶。将该反应器用氮气充溢5分钟。
2.向该反应器中加入N-(4-羟基-2-硝基苯基)-甲酰胺(5g)和无水THF(100mL)。将其在N2下进行搅拌，从而得到一种黄色的浆液。
3.通过注射器缓慢加入三氟化硼二乙醚合物(3.83mL)。
4.将该反应混合物在室温下搅拌30分钟。
5.通过加料漏斗向其中分批加入硼氢化钠(1.04g)。
6.将该反应搅拌1小时并且其后每小时用HPLC对该反应进行监测(反应通常需要3小时)。
7.当HPLC样品表明起始材料低于1.0％时，在10分钟内通过注射器缓慢加入1M HCl(40mL)。
8.搅拌60分钟。
9.根据需要通过注射器向其中加入1M NaOH以将其pH调至7±0.5。
10.将该反应混合物倾倒到一个500mL的圆底烧瓶中并将其减压浓缩(20mm Hg，25℃)直至除去大约100mL澄清的液体。
11.向该反应容器中加入水(100mL)。在搅拌的情况下将其冷却至0±2℃。产物以红色固体的形式沉淀出来。
12.通过粗糙的垂熔漏斗用真空过滤来收集产物。将滤饼用水进行洗涤(2×20mL)。风干，然后将其在烘箱中在50℃/27in.Hg下干燥直至恒重。取样进行分析。
实施例67 4-氯吡啶-2-羰基氯的制备
4-氯吡啶-2-羰基氯可以根据下面的操作来进行制备 1.建立一个配有内部温度(IT)探针、温度控制器、加热套、冷凝器、机械搅拌器、氮气入口、与一个2L的2-颈液体捕集器(其又与一个填充了大约6升8M NaOH溶液的12L的洗涤器相连)相连的位于冷凝器顶部的气体出口的5-L的5-颈反应烧瓶并用磁力搅拌器对其进行搅拌。将该反应器用氮气充溢5分钟，然后将氮气流切断。
2.向该反应器中加入亚硫酰氯(1.18L)，然后向其中加入溴化钾(38.4g)，同时维持适度搅拌(约200rpm)。
3.向该反应器中加入邻吡啶甲酸(397g)。
4.将其IT终点设定在80℃并开始进行加热。
5.取样并用HPLC对反应进程进行监测。该反应进行完全通常需要约14小时。延长加热将导致更多的二氯化作用。
6.当认为反应结束时(在该反应混合物中存在低于1％的吡啶甲酸)，停止加热。除去加热套。
7.当其IT低于30℃时，将该液体转移到一个3-L的反应烧瓶中。用700mL甲苯对该5-L的反应器进行清洗。将清洗液转移到3-L的烧瓶中。在减压下除去过量的SOCl2和甲苯。用2×700mL甲苯重复该过程。除去所有的溶剂，得到一种黄色-橙色的固体。向该反应混合物中加入甲苯(400mL)。用所得的混合物来进行下一步。
实施例68 4-氯吡啶-2-甲酸叔-丁酯的制备
4-氯吡啶-2-甲酸叔-丁酯可以根据下面的操作来进行制备 1.在一个12L的圆底烧瓶(4-颈的)上装配机械搅拌器和温度计。
2.向该反应器中加入甲苯(1L)、吡啶(977.7g)和二碳酸二叔丁酯(BOC)2O(855.5g)。
3.将该反应器冷却，从而使其内部温度是0℃。
4.以使该反应的内部温度低于5℃的速度向该反应器中加入4-氯吡啶-2-羰基氯(686g)。
5.使该反应缓慢升温至室温(～20℃)并将其搅拌16小时。
6.当用HPLC证实该反应结束时(起始材料＜0.5面积％)，将该反应液用水洗涤(2×4L)，然后用1M HCl溶液洗涤(2×2L)。
7.将该反应混合物减压浓缩以除去甲苯和残余的吡啶。
8.加入甲苯(500mL)，然后将该反应混合物减压浓缩，从而得到所需产物。
实施例69 4-(4-甲基氨基-3-硝基苯氧基)-吡啶-2-甲酸叔丁酯的制备
4-(4-甲基氨基-3-硝基苯氧基)-吡啶-2-甲酸叔丁酯可以根据下面的操作来进行制备 1.在一个3L的圆底烧瓶上装配机械搅拌器、温度计和氮气入口。
2.向该反应器中加入K2CO3(123g)。
3.将该反应容器置于惰性气氛下。
4.向该反应器中加入4-甲基氨基-3-硝基苯酚(100g)、4-氯吡啶-2-甲酸叔丁酯(127g)和无水DMSO(1L)。
5.将该反应剧烈搅拌并将其加热至100℃。
6.当经HPLC证实该反应结束时(＜0.5面积％4-氯吡啶-2-甲酸叔丁酯)，将该热反应混合物倾倒到3L的进行着搅拌的冷水(体积)中。
7.通过过滤分离出橙色至橙色-褐色固体形式的所需产物。
8.将分离出来的固体用水(2×200mL)然后用庚烷(2×200mL)进行洗涤。
9.将该物质在真空烘箱中在45-50℃下干燥至恒重。
实施例70 4-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯氧基)吡啶-2-甲醛的制备
4-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯氧基)吡啶-2-甲醛可以根据下面的操作来进行制备 1.在一个1000mL的圆底烧瓶上装配氮气入口、机械搅拌器和温度计。
2.通过填料斗向该反应器中加入4-(4-甲基氨基-3-硝基苯氧基)-吡啶-2-甲酸叔丁酯(10g)。
3.通过填料斗加入2-甲基THF(100mL)。
4.将该反应器冷却至内部温度为-25℃。
5.以将其内部温度保持在-15℃的速率通过加料漏斗加入DIBAL(氢化二异丁基铝，1.5M的甲苯溶液；72mL)。
6.通过HPLC或GC(气相色谱)对该反应进行分析，检查酯是否消失。
7.将该反应在-20℃下进行搅拌，每小时对其进行监测。
8.如果该反应在2小时后没有进展，再向其中加入0.5当量DIBAL(氢化二异丁基铝)并对该反应进行监测。重复这一步直至所有的酯都被消耗。
9.一旦该反应结束，用MeOH(10mL)将其缓慢淬熄。
10.将酒石酸钠钾(40g)加入到200mL水中并搅拌以使其溶解。
11.将该水溶液加入到反应混合物中并使之加温至室温。
12.向该反应容器中加入2-甲基THF(100mL)。
13.在搅拌的情况下将该反应加热至50℃加热1小时。
14.使其进行相分离。
15.除去下面的水层。
16.用硅藻土垫对有机层进行过滤。
17.用2-甲基THF(2×50mL)对该硅藻土进行清洗。
18.将该反应混合物加入到一个500mL的圆底烧瓶中。
19.通过蒸馏将该反应混合物浓缩至～50mL。
20.在搅拌的情况下将该反应混合物冷却至0℃。
21.将该反应混合物在0℃下搅拌1小时。
22.将该反应混合物用粗糙的垂熔滤器过滤。
23.使这些固体在该滤器上干燥30分钟至1小时。
24.用GC和NMR对这些固体进行分析以测定醇％，如果需要除去醇杂质，则将其在30℃下在甲醇中打浆1小时(5mL甲醇/g化合物)。
实施例71 4-(2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基)-N-甲基-2-硝基苯胺的制备
4-(2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基氧基)-N-甲基-2-硝基苯胺可以根据下面的操作来进行制备 1.在一个2L的圆底烧瓶(3颈的)上装配机械搅拌器、内部温度探针、温度控制器和冷凝器。
2.通过填料斗向该反应器中加入水(590mL)。
3.开始对该混合物进行搅拌并向该反应器中加入乙酸钠(240g)。
4.用水(30mL)清洗用于装乙酸钠的烧瓶。
5.将该反应加热至50℃。
6.在50℃下分批加入3，3-二溴-1，1，1-三氟丙-2-酮(395g)，同时将该反应的内部温度保持在100℃下。
7.将该反应加热至100℃的内部温度。
8.在将该反应在100℃下搅拌1小时后，取样进行分析。
9.将该反应在100℃下搅拌至起始材料＜1.5％。
10.一旦该反应结束，将该反应混合物冷却至＜65℃。
11.在对该反应进行冷却的同时，在一个5L的圆底烧瓶(有夹套的4颈烧瓶)上装配内部温度探针、温度控制器、回流冷凝器和机械搅拌器。
12.通过填料斗向一个5L的反应器中加入乙酸乙酯(500mL)并开始进行搅拌。
13.通过填料斗向一个5L的反应器中加入4-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯氧基)吡啶-2-甲醛(200g)。
14.用乙酸乙酯(200mL)冲洗该填料斗并将冲洗液加到5L的反应器中。
15.向该5L的反应器中加入95％的乙醇(1.3L)。
16.将该丙酮醛反应混合物从2L的反应器转移到5L的反应器中。这时该混合物的温度为～35℃。
17.分批缓慢加入浓NH4OH(1.3L)同时对其温度进行监测。该反应是放热的，因此最初500mL应在将其内部温度保持在50℃下的同时分批加入。总加入时间为～25分钟。升高的温度使终产物变成红色。
18.将该5L的反应器加热至50℃。
19.将该反应混合物在50℃下进行搅拌。这时，该溶液的颜色通常为略带红色-橙色。
20.每小时都对该反应进行监测直至其反应完全。
21.在认为其反应完全时，将该反应混合物冷却至0℃冷却2小时。
22.通过粗糙的垂熔玻璃滤器来过滤分离产物。
23.用冷乙醇(150mL)对该反应器进行清洗。将该清洗液转移到滤器中。
24.向一个5L的反应器中加入水(2L)。
25.搅拌并将该反应器冷却至10℃。
26.将该湿滤饼从滤器转移到该5L的反应器中。
27.将其在10℃下搅拌60分钟。
28.通过粗糙的垂熔玻璃滤器将产物滤出。
29.用水(250mL)对该反应器进行清洗。将该清洗液转移到滤器中。
30.将湿滤饼在滤器上干燥1小时。
31.将产物转移到一个2L的圆底烧瓶(单颈)中并用45℃的浴温度用旋转蒸发器将其翻转干燥至记录到恒重。
实施例72 4-(2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基氧基)-N1-甲基苯-1，2-二胺的制备
4-(2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基氧基)-N1-甲基苯-1，2-二胺可以根据下面的操作来进行制备 1.在一个2L的圆底烧瓶(4颈)上装配机械搅拌器、内部温度探针、温度控制器、氮气净化和回流冷凝器。
2.通过填料斗向该反应器中加入EtOH(125mL)。迅速开始搅拌。
3.通过填料斗向该反应器中加入4-(2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基氧基)-N-甲基-2-硝基苯胺(50g)。
4.将该反应加热至50℃。
5.在对该反应进行加热时，通过填料斗向一个250mL的锥形瓶中加入水(75mL)。迅速开始搅拌。
6.通过填料斗向该250mL的锥形瓶中加入3.0eq.碳酸钠(41.92g)。
7.将该混合物搅拌至所有的固体都溶解。
8.一旦该混悬液达到50℃，通过填料斗将该碳酸钠混合物从250mL的锥形瓶转移到反应混合物中。
9.通过填料斗向一个250mL的锥形瓶中加入水(75mL)。迅速开始搅拌。
10.在临加入到该反应烧瓶中前，通过填料斗向该250mL的锥形瓶中加入1.0eq.连二亚硫酸钠(22.95g)。
11.将该固体迅速搅拌，直至其大部分溶解。
12.通过填料斗将该连二亚硫酸钠混合物从250mL的锥形瓶迅速转移到反应混合物中。
13.将该反应在50℃下搅拌30分钟。
14.通过填料斗向一个250mL的锥形瓶中加入水(75mL)。迅速开始搅拌。
15.在临加入到该反应烧瓶中之前，通过填料斗向该250mL的锥形瓶中加入1.0eq.连二亚硫酸钠(22.95g)。
16.将该固体迅速搅拌，直至其大部分溶解。
17.通过填料斗将该连二亚硫酸钠混合物迅速从该250mL的锥形瓶转移到反应混合物中。
18.将该反应在50℃下搅拌30分钟。
19.通过填料斗向一个250mL的锥形瓶中加入水(150mL)。
20.在临加入到该反应烧瓶中前，通过填料斗向该250mL的锥形瓶中加入2.0eq.连二亚硫酸钠(45.90g)。
21.将该固体迅速搅拌，直至其大部分溶解。
22.通过填料斗将该连二亚硫酸钠混合物迅速从该250mL的锥形瓶转移到该反应混合物中。
23.将该反应在50℃下搅拌60分钟。
24.取样以证实其反应完全。
25.如果该反应的完成度＞98％，则进行步骤36。如果没有，则继续步骤26。
26.通过填料斗向一个2L的反应烧瓶中加入1.0eq.连二亚硫酸钠(22.95g)。
27.将该反应混合物在50℃下迅速搅拌60分钟。
28.取样以证实其反应完全。
29.如果该反应的完成度＞98％，则进行步骤36。如果没有，则继续步骤30。
30.通过填料斗向一个2L的反应烧瓶中加入1.0eq.碳酸钠(13.97g)。
31.将该反应混合物在50℃下迅速搅拌15分钟。
32.通过填料斗向一个2L的反应烧瓶中加入1.0eq.连二亚硫酸钠(22.95g)。
33.将该反应混合物在50℃下迅速搅拌60分钟。
34.取样以证实其反应完全。
35.当该反应的完成度＞98％时，进行步骤36。
36.在认为其反应完全时，通过填料斗向一个2L的反应烧瓶中加入水(125mL)。
37.将该反应混合物冷却至10℃并将其搅拌1小时。
38.通过用粗糙的垂熔玻璃滤器过滤将产物分离出来。
39.用水(50mL)对该反应器进行清洗。将该清洗液转移到滤器中。
40.将湿滤饼在该滤器上干燥至其不再滴水。
41.通过填料斗向一个2L的反应烧瓶中加入水(500mL)。
42.通过填料斗将该滤饼转移回反应烧瓶中。
43.将该物质在室温下搅拌60分钟。
44.通过用粗糙的垂熔玻璃滤器过滤将产物分离出来。
45.用水(25mL)对该反应器进行清洗。将该清洗液转移到滤器中。
46.将湿滤饼在滤器上干燥约1小时。
47.将产物转移到一个2L圆底烧瓶(单颈)中并用50℃的浴温，用旋转蒸发器将其缓慢翻转干燥直至记录到恒重。
实施例73 {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺的制备
{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺可以根据下面的操作来进行制备 1.在一个2-L、4-颈的圆底烧瓶上装配机械搅拌器、内部温度探针、温度控制器、氮气净化和冷凝器。
2.通过填料斗向该反应器中加入4-(2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基氧基)-N1-甲基苯-1，2-二胺(200g)。
3.通过填料斗向该反应器中加入乙腈(1L)。
4.开始在环境温度和氮气气氛下对该混合物进行搅拌。
5.在20±5分钟后，通过填料斗向该反应器中加入4-三氟甲基苯基异硫氰酸酯(104g)。
6.在加入异硫氰酸酯后30分钟取样以证实其反应完全。
7.一旦其反应完全，用粗糙的垂熔玻璃滤器对该混合物进行过滤。
8.用MeCN(200mL)对该反应器进行清洗。将该清洗液转移到滤器中。
9.用MeCN(200mL)对取出来的固体进行洗涤。
10.将滤液转移到一个配有机械搅拌器、内部温度探针、温度控制器、氮气净化和冷凝器的3-L、4-颈的圆底烧瓶中。
11.通过填料斗向该反应器中加入N，N-二异丙基乙基胺。
12.每隔10分钟分四等份(总添加时间为30分钟)通过填料斗向该反应器中加入2-氯-1，3-二甲基咪唑啉氯化物。在最后一次加入后，将该反应混合物再搅拌10分钟。
13.将该反应加热至50℃±5℃。
14.在将该混合物加热30分钟后取样以证实其反应完全。
15.一旦其反应完全，通过一种在线的0.2μM膜滤器将该反应混合物转移到一个如步骤10中那样装配的3-L圆底烧瓶中。
16.通过填料斗加入水。
17.将该反应加热至50℃±5℃。
18.在加热2小时后，使该反应混合物冷却至20-25℃并将其再搅拌1小时。
19.通过用中等垂熔玻璃滤器过滤来对产物进行分离。
20.用2∶1的MeCN/水(300mL)对该反应器进行清洗。将该清洗液转移到滤器中。
21.用2∶1的MeCN/水(300mL)对滤饼进行洗涤。
22.将湿滤饼在滤器上干燥约1小时。
23.将产物转移到一个干燥皿上并将该物质在真空烘箱中在70±5℃下用微小的氮气流干燥至残余的MeCN(乙腈)量低于410ppm。
24.为了重结晶，将产物在15倍体积(重量/体积)的EtOH中在配有机械搅拌器、内部温度探针、温度控制器、氮气净化和冷凝器的反应器中加热至回流。
25.当用蒸馏头取代冷凝器时，将该混合物回流30分钟。
26.蒸馏EtOH直至剩余4体积。停止加热并加入1体积水。
27.使该混合物冷却至0-5℃。
28.通过用中等垂熔玻璃滤器过滤来对产物进行分离。
29.用4∶1的EtOH/水(1体积)对该反应器进行清洗。将该清洗液转移到滤器中。
30.用水(1体积)对滤饼进行清洗。
31.将湿滤饼在滤器上干燥约1小时。
32.将产物转移到一个干燥皿中并将该物质在真空烘箱中在50℃±℃下用微小的氮气流干燥至达到恒重。
实施例74 {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺的制备 将4-三氟甲基苯基异硫氰酸酯(200mg，1mmol)加入到4-(2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基氧基)-N1-甲基苯-1，2-二胺(350mg，1mmol)在3mL乙腈中的混合物中。在将其在环境温度下搅拌20分钟后，HPLC分析表明其完全转化。加入三乙胺(0.3mL，2.2mmol)，然后加入2-氯-1-甲基吡啶碘化物(270mg，1.05mmol)。将该反应混合物加热至50℃加热5小时。停止加热并加入1.5mL水。在将该混合物搅拌2小时，通过过滤收集固体并用2∶1的乙腈/水对其进行洗涤(3×1mL)，从而得到317mg(61％)标题化合物。
实施例74a 4-(2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基氧基)-N-甲基-2-硝基苯胺的制备
将NaOMe(1.5mL，6.3mmol，25重量％的MeOH溶液)加入到4-(4-(甲基氨基)-3-硝基苯氧基)吡啶-2-甲腈(1.72g，6.3mmol)在1-PrOH(10mL)中的混合物中。将该混合物加热至50℃(内部温度)。在将其加热1小时后，HPLC分析表明起始材料完全转化。加入NH4OAc(1.46g，18.9mmol)并将该混合物加热至70℃。在将其在70℃下加热1小时后，将该混合物加热至85℃。同时，每隔30分钟以每份0.2-mL的量分4份加入3-溴-1，1，1-三氟丙酮(0.8mL，7.56mmol)。将该混合物在85℃下加热20小时。然后，使该混合物冷却至环境温度并加入水。在搅拌数小时后，将该混合物在冰/水浴上冷却。在将其在冰/水浴中冷却1小时后，通过过滤收集固体并用1∶1的1-PrOH/水(2×7mL)对其进行洗涤。将该固体在真空烘箱中在50℃下干燥大约16小时，从而得到0.982g(41％)标题化合物。
实施例74b 4-氯-2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶的制备
将NaOMe(0.46mL，2mmol，25重量％的MeOH溶液)加入到4-氯-2-氰基-吡啶(277mg，2mmol)在1-PrOH(3mL)中的混合物中。将该混合物加热至50℃(反应-阻断温度)。在加热1小时后，HPLC分析表明起始材料完全转化。将该混合物加热至70℃并加入NH4OAc(462mg，6mmol)。在70℃下1小时后，将该混合物加热至85℃。同时，每隔30分钟以每份0.063mL的量分4份加入3-溴-1，1，1-三氟丙酮(0.25mL，2.4mmol)。将该混合物在85℃下加热大约20小时。HPLC表明该该粗品为72.4％(LCAP)并且用LC-MS分析来对其进行证实。
实施例74c 4-氯-2-氰基-吡啶
通过外部的冷却单元将4-氯-2-吡啶甲酰胺(93.9g，0.6摩尔)和TEA(125mL，0.9摩尔)在EtOAc(500mL)中冷却至0.2℃。通过加料漏斗在40分钟内加入TFAA(92mL，0.66摩尔)。在加入期间，其内部温度升至10℃。在完全加入时，其温度为0.0℃。在加入后，关掉冷却器。在又过了30分钟后，HPLC分析表明剩余的起始材料为4.3％(LCAP)。再向其中加入8.3mL(0.06摩尔)TFAA。在将该反应混合物再搅拌20分钟后，HPLC分析表明其完全转化。加入10％K2CO3水溶液(w/v，500mL)。其内部温度从13.7升至22.0℃。在搅拌20分钟后，将该混合物转移到一个分液漏斗中。进行层分离并将水层用EtOAc进行萃取(150mL)。将所合并的有机层用10％柠檬酸水溶液(w/v，300mL)进行洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将该粗品在真空烘箱中在50℃下干燥16小时，从而得到72.85g(87％)标题化合物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.6(m，1H)，7.7(m，1H)，7.5(m，1H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ151.8，145.3，134.9，128.7，127.4，116.1；HPLC＞99％(LCAP)。
实施例74d 4-(4-甲基氨基-3-硝基-苯氧基)-吡啶-2-甲腈
将4-氯-2-氰基-吡啶(6.9g，0.05摩尔)、4-甲基氨基-3-硝基苯酚(8.4g，0.05摩尔)和K2CO3(10.4g，0.075摩尔)在DMSO(80mL)中的混合物加热至60℃。在11.5小时后，HPLC分析表明两种起始材料都完全转化。在冷却至20℃后，向该反应混合物中加入水(240mL)。其温度升至40℃，然后降至环境温度。通过过滤收集固体并用水对其进行洗涤(2×40mL)。然后，将该固体在庚烷(40mL)中形成浆液。收集固体并用庚烷(40mL)对其进行洗涤。将该粗品在真空烘箱中在50℃下干燥16小时，从而得到10.33g(76％)标题化合物1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.5(m，1H)，8.2(m，1H)，7.9(m，1H)，7.7(m，1H)，7.5(m，1H)，7.2(m，1H)，7.1(m，1H)，3.0(s，3H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ165.1，152.9，144.4，140.6，134.1，130.4，130.1，117.9，117.1，117.0，116.5，114.9，29.8；APCI MS[M+H]+＝271；HPLC＞99％(LCAP)。
实施例74e 4-(4-甲基氨基-3-氨基-苯氧基)-吡啶-2-甲腈
将4-(4-甲基氨基-3-硝基-苯氧基)-吡啶-2-甲腈(5.0g，0.019摩尔)在EtOH(15mL)中加热至40℃。加入Na2CO3(4.7g，0.044摩尔)，然后加入H2O(8.4mL)。加入Na2S2O4(3.3g，0.019摩尔)，然后加入H2O(10mL)。其温度从41.7升至49.5℃。在冷却至41.7℃后，加入Na2S2O4(3.3g，0.019摩尔)，然后加入H2O(10mL)。其温度升至44.5℃。在冷却至36.7℃后，加入Na2S2O4(6.6g，0.038摩尔)，然后加入H2O(20mL)。其温度升至44.0℃。HPLC分析表明起始材料为4.1％(LCAP)。再向其中加入一些Na2S2O4(3.3g，0.019摩尔)。在将其再搅拌15分钟后，除去加热并加入H2O(12.5mL)。在25℃下，再加入一些Na2CO3(1.3g，0.012摩尔)并将该混合物在冰/水浴上冷却。在低于5℃时，使该混合物老化30分钟(最终的温度为1.5℃)。通过过滤收集固体并用H2O(10mL，然后5mL)对其进行洗涤。将该固体在滤器上干燥30分钟，然后将其转移到反应烧瓶中并向其中加入H2O(50mL)。将该混合物搅拌45分钟。然后，通过过滤收集固体并用H2O对其进行洗涤(2×10mL)。将该粗品在真空烘箱中在50℃下干燥16小时，从而得到3.50g(76％)标题化合物1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.5(m，1H)，7.5(m，1H)，7.1(m，1H)，6.4(m，1H)，6.3(m，2H)，4.8(s，2H)，4.7(s，1H)，2.7(s，3H)；APCI MS[M+H]+＝241；HPLC＞99％(LCAP)。
实施例74f 4-[1-甲基-2-(4-(三氟甲基)苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-甲腈
将4-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯(9.65g，0.0475摩尔)加入到4-(4-甲基氨基-3-氨基-苯氧基)-吡啶-2-甲腈(12.0g，0.05摩尔)在MeCN(60mL)中的溶液中。在40分钟后，HPLC分析表明该胺完全转化。将该混合物过滤并将取出来的固体用MeCN(2×12mL)进行洗涤。向滤液中加入DIPEA(17.5mL，0.1摩尔)。每隔10分钟以每份2.11g的量分4份加入2-氯-1，3-二甲基咪唑啉氯化物(DMC)。在最后一次加入后，将该混合物再搅拌10分钟，这时HPLC分析表明其完全转化。然后，将该混合物加热至50℃(内部温度)。在50℃下45分钟后，HPLC分析表明其完全转化成产物。将该混合物冷却至环境温度，然后向其中加入H2O(45mL)。该反应混合物开始变均匀，然后化合物开始从该混合物中沉淀出来。在将其搅拌2小时后，通过过滤收集固体并用2∶1的MeCN/H2O(2×20mL)对其进行洗涤。将该粗品在真空烘箱中在50℃下干燥16小时，从而得到16.10g(78％)标题化合物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.5(m，1H)，8.5(m，1H)，8.0(m，2H)，7.7(m，2H)，7.6(m，1H)，7.4(m，1H)，7.3(m，1H)，7.1(m，1H)，6.9(m，1H)，3.7(m，3H)；APCI MS[M+H]+＝410；HPLC＞99％(LCAP)。
实施例74g {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺
将NaOMe(0.23mL，1mmol，25重量％的MeOH溶液)加入到实施例74f(409mg，1mmol)在MeOH(4mL)中的混合物中。在环境温度下1小时后，HPLC分析表明起始材料为46.2％(LCAP)。将该混合物加热至50℃(反应-阻断温度)。在加热1小时后，HPLC分析表明剩余的起始材料为4.1％(LCAP)。加入NH4OAc(231mg，3mmol)，然后加入3-溴-1，1，1-三氟丙酮(0.13mL，1.2mmol)。将该混合物在50℃下加热约20小时。再加入一些3-溴-1，1，1-三氟丙酮(0.06mL，0.58mmol)并将该混合物加热至60℃。在60℃下24小时后，使该混合物冷却至环境温度。加入水(4mL)，然后加入EtOAc(4mL)。进行层分离并将水层用EtOAc进行萃取。将所合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并将其浓缩。将该粗品溶解于IPA(4mL)中。向1mL该IPA溶液中加入甲磺酸(0.020mL)。将该混合物加热至80℃加热一夜。然后，将该混合物冷却至环境温度并对其进行浓缩，从而得到标题化合物APCI MS[M+H]+＝519。
实施例74h {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺
将NaOMe(0.23mL，1mmol，25重量％的MeOH溶液)加入到实施例74f(409mg，1mmol)在1-PrOH(2mL)中的混合物中。将该混合物加热至50℃(反应-阻断温度)。在加热1小时后，HPLC分析表明起始材料完全转化。将该混合物加热至70℃并向其中加入NH4OAc(231mg，3mmol)。在70℃下1小时后，将该混合物加热至85℃。同时，每隔30分钟以每份0.033mL的量分4份加入3-溴-1，1，1-三氟丙酮(0.13mL，1.2mmol)。将该混合物在85℃下加热大约20小时。将该混合物冷却至环境温度并向其中加入水(2mL)。在搅拌数小时后，通过过滤收集固体并用1∶1的1-PrOH/水对其进行洗涤(2×3mL)。将该固体在真空烘箱中在50℃下干燥大约16小时，从而得到0.11g(21％)标题化合物。
实施例75 {1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺的制备 将4-三氟甲基苯基异硫氰酸酯(200mg，1mmol)加入到4-(2-(5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基)吡啶-4-基氧基)-N1-甲基苯-1，2-二胺(350mg，1mmol)在3mL乙腈中的混合物中。在将其在环境温度下搅拌20分钟后，HPLC分析表明其完全转化。将硫脲(553mg，1mmol)在POCl3(3mL)中的混合物在环境温度下进行搅拌。在4小时后，将该混合物加热至大约50℃。在加热2小时后，HPLC分析表明其反应完全。
实施例76 Raf/Mek过滤试验 缓冲液 试验缓冲液50mM Tris，pH7.5，15mM MgCl2，0.1mM EDTA，1mMDTT 洗涤缓冲液25mM Hepes，pH7.4，50mM焦磷酸钠，500mM NaCl 终止试剂30mM EDTA 材料 Raf，有活性的Upstate Biotech #14-352 Mek，无活性的Upstate Biotech #14-205 33P-ATPNEN Perkin Elmer #NEG 602h 96孔试验板Falcon U型-底聚丙烯板#35-1190 过滤装置微孔#MAVM 096 OR 96孔过滤板微孔Immobilon 1 #MAIP NOB 闪烁液Wallac OptiPhase″SuperMix″#1200-439 试验条件 Raf大约120pM Mek大约60nM 33P-ATP 100nM 反应时间为在室温下45-60分钟 试验方案 将Raf和Mek以2倍的终浓度合并到试验缓冲液(50mM Tris，pH7.5，15mM MgCl2.0.1mM EDTA和1mM DTT)中并将其以15μL/孔的量分散到聚丙烯试验板(Falcon U型-底聚丙烯96孔试验板#35-1190)中。在包含Mek和DMSO并且不包含Raf的孔中测定背景水平。
向包含Raf/Mek的孔中加入3μL 10倍的用100％DMSO稀释的raf激酶抑制剂试验化合物。通过加入12μL/孔2.5倍的用试验缓冲液稀释的33P-ATP来开始raf激酶活性反应。在45-60分钟后，通过加入70μL终止试剂(30mM EDTA)来终止该反应。将过滤板用70％乙醇预润湿5分钟，然后通过用洗涤缓冲液过滤来对其进行清洗。然后，将得自反应孔的样品(90μL)转移到过滤板中。将该过滤板用微孔过滤装置用洗涤缓冲液洗涤6次。将这些板干燥并加入100μL/孔的闪烁液(Wallac OptiPhase″SuperMix″#1200-439)。然后，用Wallac Microbeta 1450读数器来测定其CPM。实施例77 试验2生物素化的Raf筛选 体外Raf筛选 通过提供ATP、MEK底物并分析磷酸根部分向MEK残基的转移来测量Raf丝氨酸/苏氨酸激酶各种亚型的活性。通过由用人Raf重组的杆状病毒表达载体转染的sf9昆虫细胞进行纯化来获得Raf的重组亚型。将重组的无激酶活性的MEK在大肠杆菌中表达并在纯化后用生物素进行标记。对于各试验而言，将试验化合物连续用DMSO进行稀释，然后将其与Raf(0.50nM)和无激酶活性的生物素-MEK(50nM)在反应缓冲液加ATP(1μM)中混合到一起。随后，将该反应在室温下培养2小时并通过加入0.5M EDTA来终止反应。将终止的反应混合物转移到neutradavin-涂覆的板(Pierce)上并将其培养1小时。用兔抗-p-MEK(Cell Signaling)作为初级抗体并用铕标记的抗-兔作为次级抗体，用DELFIA时间分辩荧光系统(Wallac)来测量被磷酸化的产物。在Wallac 1232 DELFIA荧光计上对时间分辩的(time resolved)荧光进行读数。用XL Fit数据分析软件通过非线性回归来机算各化合物50％抑制的浓度(IC50)。
用实施例76或77的操作，实施例1-64的化合物均显示具有raf激酶抑制活性，其IC50低于5μM。
实施例78 黑素瘤肿瘤生长的抑制 将3×106个A375M人黑素瘤细胞皮下移植到体重约24g的10-12周大的雌性Nu/Nu小鼠的右胁腹中。当肿瘤平均体积达到大约150mm3(移植后17天)时，根据肿瘤体积将小鼠随机分成4组，每组9只小鼠并开始用本发明的化合物对其进行治疗。每天仅用基质或用10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg实施例25的化合物通过口服管饲法来对小鼠进行给药，给药14天，给药体积都为0.2mL。每周用数字卡钳测量两次肿瘤体积。平均肿瘤体积如图1所示。实施例79 黑素瘤细胞中Raf激酶信号的抑制 如实施例78中那样，将3×106个A375M人黑素瘤细胞皮下移植到体重约24g的10-12周大的雌性Nu/Nu小鼠的右胁腹中。当肿瘤平均体积达到大约150mm3(移植后17天)时，根据肿瘤体积将小鼠随机分成4组，并且每天仅用基质或者用10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg实施例25的化合物通过口服管饲法来进行给药，给药体积都为0.2mL。在给药后4和24小时时，将小鼠安乐死，收获肿瘤并将其快速冷冻。
将被冷冻的肿瘤在冰上融解，称重，然后将其在具有Roche Complete，Mini无EDTA的蛋白酶抑制剂合剂片剂(2片/25mL缓冲液)、1mM苯基甲磺酰氟(PMSF)和1X Sigma磷酸酶抑制剂合剂II的RIPA缓冲液中用Roche Magna-lyser进行匀化(在6500rpm下，在4℃下，2个1分钟的周期)。对于每100mg肿瘤组织而言，加入1mL RIPA溶解缓冲液。将该匀浆在14K RPM下在4℃下在台式微量离心机中离心20分钟，然后用Qiagen Qiashredders进一步对其进行匀化(在4℃下，9K RPM，2分钟)。用Pierce BCA蛋白试验来测定蛋白浓度，然后以20μg/孔的数量将各样品负载到4-20％Tris-甘氨酸SDS-聚丙烯酰胺凝胶中。在PAGE后，将蛋白转移到硝基纤维素膜上，将其在室温下阻断(5％脱脂乳粉的TBST溶液)1小时，然后用1∶1000稀释的(在阻断缓冲液中)兔多克隆抗-磷酸-ERK1/2抗体(Cell Signalling #9101)、兔多克隆抗-磷酸-MEK抗体(Ceu Signaling#9121)、兔多克隆抗-ERK1/2抗体(Cell Signalling #9102)或兔多克隆抗-MEK抗体(Cell Signalling #9122)在4℃下探测一夜。然后，在室温下将这些膜用TBST洗涤5次(每次5分钟)，向所有的印迹中以1∶5000的稀释度加入HRP-标记的山羊-抗-兔抗体(在阻断缓冲液中)并将其在室温下培养1小时。然后，将这些膜用TBST洗涤5次(每次5分钟)，将这些膜用PierceSuper-Signal培养4分钟，然后使其曝光在胶片上，曝光时间为1秒至20分钟。给药后4和24小时取样的结果分别如图2A和2B中所示。 实施例80 结肠癌肿瘤生长的抑制 将2×106个HT29P人结肠癌细胞皮下移植到体重约24g的10-12周大的雌性Nu/Nu小鼠的右胁腹中。当肿瘤平均体积达到大约250mm3(移植后14天)，根据肿瘤体积将小鼠随机分成4组，每组10只小鼠并开始用本发明的化合物对其进行治疗。仅用基质或用10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg实施例25的化合物通过每天口服管饲法来对小鼠进行给药，给药14天，给药体积均为0.2mL。每周用数字卡钳测量两次肿瘤体积。平均肿瘤体积如图3中所示。实施例81 结肠癌细胞中Raf激酶信号的抑制 将3×106个HT29P人结肠癌细胞皮下移植到体重约24g的10-12周大的雌性Nu/Nu小鼠的右胁腹中。当肿瘤平均体积达到大约150mm3(移植后17天)，根据肿瘤体积将小鼠随机分成四组并开始用本发明的化合物对其进行治疗。仅用基质或者用10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg实施例25的化合物通过每天口服管饲法来对小鼠进行给药，给药5天，给药体积均为0.2mL。在给药后1、4和24小时时，将小鼠安乐死，收获肿瘤并将其快速冷冻。然后，根据实施例79的操作对被冷冻的肿瘤进行处理。给药后1、4和24小时样品的结果分别如图4A、4B和2C中所示。
实施例82 在体外生物化学试验中实施例1的化合物对Raf激酶信号的抑制体外Raf试验 用下面的生物素化的试验测定了实施例1的化合物{1-甲基-5-[2-(5-三氟-甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺对野生型B-Raf、野生型c-Raf和突变型B-Raf(V600E)的抑制作用。通过提供ATP、重组的无激酶活性的MEK底物并对磷酸根部分向MEK残基的转移进行分析来测量Raf丝氨酸/苏氨酸激酶的各种亚型的激酶活性。将具有灭活K97R ATP结合部位突变(使其无激酶活性)的重组的全长MEK在大肠杆菌中表达并在纯化后用生物素对其进行标记。用N-末端(his)6标记对MEK cDNA进行亚克隆，将其在大肠杆菌中表达并通过镍亲合色谱，然后通过阴离子交换由大肠杆菌溶胞产物中纯化重组的MEK底物。将最终的MEK底物制剂生物素化(Pierce EZ-Link Sulfo-NHS-LC-生物素)并将其浓缩至11.25μM。通过由用相应人Raf重组表达载体感染的sf9昆虫细胞进行纯化来获得重组的B-Raf、c-Raf和突变型B-Raf。通过Glu抗体相互作用或金属离子色谱法来对重组的Raf亚型进行纯化。
对于各试验而言，将实施例1的化合物用DMSO连续稀释，然后将其与B-Raf、c-Raf或突变型B-Raf(各0.50nM)混合到一起。在加有ATP(1μM)的反应缓冲液中加入无激酶活性的生物素-MEK底物(50nM)。该反应缓冲液包含30mM Tris-HCl，pH7.5、10mM MgCl2，2mM DTT、4mMEDTA，25mM β-甘油磷酸酯、5mM MnCl2和0.01％BSA/PBS。随后，将该反应在室温下培养2小时并通过加入0.5M EDTA终止反应。将被终止的反应混合物转移到neutradavin-涂覆的板(Pierce)中并将其培养1小时。用兔抗-p-MEK(Cell Signaling)作为初级抗体并用铕标记的抗-兔作为次级抗体，用DELFIA时间分辩荧光系统(Wallac)来测量被磷酸化的产物。在Wallac 1232 DELFIA荧光计上读取时间分辩的荧光。用XL Fit数据分析软件，通过非线性回归来计算对于50％的抑制而言实施例1化合物的浓度(IC50)。
结果 如下面的表3中所示，实施例1的化合物对B-Raf、c-Raf和突变型B-Raf(V600E)活性表现出有效的抑制作用(IC50＜0.1μM)。
表3实施例1的化合物对Raf活性的体外效力 如上面表3中所示，实施例1的化合物对野生型B-Raf亚型、野生型c-Raf亚型和突变型B-Raf(V600E)Raf激酶表现出有效的抑制活性。如图5中所示，认为Raf激酶是MAPK(Ras/Raf/MEK/ERK)信号转导途径中的初级Ras效应器。Raf激酶被Ras活化并磷酸化和激活Mek1和Mek2，其接下来在MAPK途径中又活化了促细胞分裂剂活化的激酶1和2(MAPK)。已知Raf激酶影响和调节细胞增殖、分化、存活、致癌性转化和细胞凋亡。已经表明B-Raf亚型是参与信号转导的Raf最有活性的形式并且在Ras信号传播中很关键。
如下面表4中所示，在许多人类癌症中都涉及MAPK信号转导途径。在全部人类癌症的15％中都发现了Ras突变(活化的)。在全部人类癌症的30％中都发现了ERK突变(过活化的)。与癌症有关的致癌基因突变在这种途径的一些成员中是常见的，例如突变型B-Raf(V600E)发生于约70％的黑素瘤中和约12％的结肠癌中(Davies等人，同上；Yuen等人，同上和Brose等人，同上)。
表4MAPK途径中的突变型信号分子和临床结果差之间的关系 见Sebolt-Leopole和Herrera，Nature Reviews Cancer(4)937(2004)。
如上面表4中所示，有活性的B-Raf(V600E)的突变型是癌症治疗的重要靶点，这是因为其表达是预后差的指示剂，其是组成活性的，并且驱动了一些肿瘤，包括黑素瘤、乳头状甲状腺癌、卵巢癌和结肠癌。之前已经证明也抑制突变型B-Raf的野生型Raf激酶的抑制剂在癌症治疗中是有前途的治疗剂。例如，已经表明siRNA对突变型B-Raf的消耗损害了黑素瘤细胞系中的ERK信号和增殖(Dibb，NJ.等人，Nature Reviews Cancer(4)718，2004)。因此，值得注意的是实施例1的化合物对突变型B-Raf的抑制甚至比对野生型B-Raf更高，从而证明了该化合物在Raf-介导的疾病(包括黑素瘤、卵巢癌、乳头状甲状腺癌和结肠癌)的治疗中抑制Raf的效用。
实施例83 在以细胞为基础的试验中实施例1的化合物对突变型B-Raf激酶信号 的抑制 1.ERK磷酸化的抑制作用 方法 在一种以细胞为基础的试验中，用两种黑素瘤细胞系——A375M(突变型B-Raf V600E)和SKMEL-28(突变型B-Raf V600E)来测量实施例1化合物的抑制作用。在SKMEL-28细胞和A375M细胞中，在用实施例1化合物{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺的系列稀释物进行处理后，对ERK磷酸化作用进行分析。通过将数据拟合到四参数曲线中来测定EC50值。
结果 如下面的表5中所示，在通过磷酸-ERK降低进行测量时，实施例1的化合物抑制了SKMEL-28细胞和A375M细胞中突变型B-Raf(V600E)激酶的活性。
表5实施例1化合物在表达突变型Raf-B的黑素瘤细胞系中的抑制作用 2.MEK磷酸化的抑制作用 方法 在一种以细胞为基础的试验中，用三种黑素瘤细胞系——A375M(突变型B-Raf V600E)、SKMEL-2(野生型Raf，突变型N-Ras)和CHL-1(野生型Raf，野生型Ras)来测量实施例1化合物的抑制作用。将三种细胞系在37℃下在含有浓度为0.1μM、0.5μM、1μM、5μM和10μM的实施例1的化合物的0.1％胎牛血清中进行培养。在培养4小时后，用蛋白印迹分析对MEK磷酸化作用进行分析。
结果 结果如图6A、6B和6C中所示。如图6A中所示，实施例1的化合物在0.1μM至10μM的浓度范围内是A375M细胞(图6A)、SKMEL-2细胞(图6B)和CHL-1细胞(图6C)中Raf下游信号有效的抑制剂。
3.非固着依赖性细胞生长的抑制作用 为了证明Raf的抑制被翻译成抗增殖活性，用在软琼脂中生长的如下表6中所列的各种细胞系和人肿瘤分离物对实施例1的化合物进行试验。
软琼脂增殖试验对于下表6中所列的各细胞系而言，将其以500个细胞/100μL的量接种到Corning 96孔平底Ultra Low Attachment Micro板(Corning #3474)中。向完全培养基中加入1％Seakem GTG琼脂糖(50μL/孔)，使其固化，然后向各孔中加入100μL完全培养基。以5％DMSO的终浓度在不含血清的培养基中制备实施例1的化合物{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺的系列稀释物，并向各孔中加入25μL被稀释的化合物(DMSO终浓度为0.5％)。在该试验中还包括没有化合物的包含0.5％DMSO的对照孔。在将细胞用该化合物培养7天后，向各孔中加入25μL Alamar Blue(Trek Diagnostic Systems #00-100)并将其在37℃下培养4小时。用荧光板读数器对该板进行读数，激发波长为530nm，发射波长为590nm。通过将数据拟合到一种四参数曲线中来测定EC50值。
还用在软琼脂(Oncotest，GmbH，Freiburg，德国)中生长的一组人肿瘤分离物对实施例1的化合物进行了试验。将肿瘤从患者体内分离出来，然后使其以肿瘤碎片的形式在免疫妥协的小鼠体内传代并用上述方法对其进行分析。
结果如下面的表6中所示，实施例1的化合物对表达突变型B-Raf、突变型K-Ras和突变型N-Ras的细胞系和人肿瘤分离物都具有有效的抗增殖作用。
表6软琼脂增殖试验用实施例1化合物的抑制 实施例1的化合物对上面表6中所示的许多细胞系和人肿瘤分离物的抑制活性证明了该化合物在表达突变型B-Raf的肿瘤细胞系中有效的抗增殖活性。该化合物在＜0.0098至0.07μM的范围内对突变型B-Raf黑素瘤细胞表现出有效的抑制作用。该化合物在0.026μM至0.13μM的范围内对突变型B-Raf结肠直肠细胞系表现出相似的抑制程度。还证明该化合物在所试验的表达突变型K-Ras(0.07μM至0.016μM)的两种结肠直肠癌细胞中具有有效的抗增殖活性，证实在上游K-Ras突变的背景中B-Raf/c-Raf的抑制产生了抗增殖活性。
与得自上述细胞系的结果相一致，实施例1的化合物对人肿瘤分离物的作用证明了其对突变型B-Raf黑素瘤(EC50＝0.055μM和0.20μM)具有最强的抑制作用，其次是对N-Ras突变型黑素瘤(EC50＝0.57μM)的抑制作用。一种胰腺肿瘤和一种结肠直肠肿瘤具有1μM范围的EC50。剩余的肿瘤给出了高于1μM的EC50值。因为将肿瘤从患者体内分离出来并以肿瘤碎片的形式使其在免疫妥协的小鼠体内传代，因此认为从患者体内分离出来的人肿瘤代表了一种比细胞系更准确的疾病模型。因此，不选择使其在塑料上进行生长并且其仍然保持了一些原发的肿瘤体系结构。
有趣的是，注意到实施例1的化合物在肾细胞癌肿瘤分离物中具有范围高于1μM的抑制活性。虽然在这些特定的肿瘤中没有测得该基因型，但是已知肾细胞癌肿瘤通常不表达突变型Ras或突变型B-Raf。因此，实施例1的化合物似乎特定抑制MAPK途径的信号分子，特别是Raf和Ras激酶分子。
实施例84 用实施例1的化合物进行的处理造成了A375M(B-Raf V600E)人黑素瘤异种移植物模型中的肿瘤消退 方法将3×106个A375M人黑素瘤细胞皮下移植到体重约24g的10-12周大的雌性Nu/Nu小鼠的右胁腹中。当肿瘤平均体积达到大约150mm3(移植后17天)时，根据肿瘤体积将小鼠随机分成4组，每组9只小鼠并开始用实施例1的化合物进行治疗。仅用基质或用10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg实施例1的化合物通过每天口服管饲法来对小鼠进行给药，给药14天，给药体积均为0.1mL。在100％PEG中对实施例1的化合物{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺进行配制。每周用数字卡钳测量两次肿瘤体积。
蛋白印迹分析 在第14次给药后8和24小时，将小鼠安乐死，收获肿瘤并将其快速冷冻。将被冷冻的肿瘤在冰上融解，称重，然后将其在具有Roche Complete，Mini无EDTA的蛋白酶抑制剂合剂片剂(2片/25mL缓冲液)、1mM苯基甲磺酰氟(PMSF)和1X Sigma磷酸酶抑制剂合剂II的RIPA缓冲液中用Roche Magna-lyser进行匀化(在6500rpm下，在4℃下，2个1分钟的周期)。对于每100mg肿瘤组织而言，加入1mL RIPA溶解缓冲液。将该匀浆在14K RPM下在4℃下在台式微量离心机中离心20分钟，然后用Qiagen Qiashredders进一步对其进行匀化(在4℃下，9K RPM，2分钟)。用Pierce BCA蛋白试验来测定蛋白浓度，然后以20μg/孔的数量将各样品负载到4-20％Tris-甘氨酸SDS-聚丙烯酰胺凝胶中。在PAGE后，将蛋白转移到硝基纤维素膜上，将其在室温下阻断(5％脱脂乳粉的TBST溶液)1小时，然后用1∶1000稀释的(在阻断缓冲液中)兔多克隆抗-磷酸-ERK1/2抗体(Cell Signalling #9101)、兔多克隆抗-磷酸-MEK抗体(Cell Signaling#9121)、兔多克隆抗-ERK1/2抗体(Cell Signalling #9102)或兔多克隆抗-MEK抗体(Cell Signalling #9122)在4℃下探测一夜。用1∶1000稀释的抗-Bim抗体(Chemicon，#AB 17003)、抗-细胞周期蛋白D1抗体克隆5D4(Upstate，#05-263)、抗-p27Kip-1(182-198)抗体(Calbiochem，#506127)、抗-磷酸-AKT(S473)抗体(Cell Signaling，#9271)、抗-磷酸-Akt(T308)抗体(Cell Signaling #9275)和抗-磷酸-总Akt抗体(Cell Signaling #9272)对下游标记物的调节进行分析。
然后，在室温下将这些膜用TBST洗涤5次(每次5分钟)，向所有的印迹中以1∶5000的稀释度加入HRP-标记的山羊-抗-兔抗体(位于阻断缓冲液中)并将其在室温下培养1小时。然后，将这些膜用TBST洗涤5次(每次5分钟)，将这些膜用Pierce Super-Signal培养4分钟，然后使其曝光在胶片上，曝光时间为1秒至20分钟。
结果 图7A是表示当用10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg实施例1化合物的口服剂量进行处理时，小鼠体内A375M(B-Raf V600E)人黑素瘤肿瘤体积平均降低的剂量响应的图。如图7A中所示，实施例1的化合物以口服剂量依赖性方式具有有效的抗肿瘤活性。在该化合物100mg/kg的口服剂量下，在所试验的全部9只小鼠中都观察到了肿瘤消退。
在图7B和图7C中分别表示了在以10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg的剂量将实施例1的化合物第14次给药后8小时和24小时蛋白印迹分析的结果。该蛋白印迹数据表明该化合物在100mg/kg剂量下抑制了MEK磷酸化作用(其诱导了肿瘤消退)并且如图7C中所示，在最后一次给药后，该MEK抑制作用持续24小时以上。
如图7D中所示，在第14次给药后24小时对肿瘤溶胞产物下游生物标记调节的分析表明BIM(细胞凋亡的标记)和p27Kip(细胞周期停滞的标记)增加，而细胞周期蛋白D(细胞周期抑制)降低。这些结果证实了实施例1的化合物抑制了MAPK途径中的Raf信号。 实施例85 用实施例1的化合物进行的治疗抑制了黑素瘤肿瘤生长 对实施例1的化合物在黑素瘤肿瘤模型MEXF276(突变型B-RafV600E)和黑素瘤肿瘤模型MEXF 1341野生型B-Raf、突变型N-Ras(Q61K)中的抑制活性进行了试验。
方法将连续传代的人黑素瘤MEXF276(突变型B-Raf V600E)肿瘤细胞皮下移植到10-12周大的雌性Nu/Nu小鼠的后胁腹中。当肿瘤平均体积达到大约65mm3时，根据肿瘤体积将这些小鼠随机分组并开始用实施例1的化合物{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺进行治疗。因为已知MEXF276模型在一定程度上是恶病质的，在未进行治疗的对照小鼠中预期有一些毒性，为了预防药物治疗组中严重的体重降低，如下那样使用间歇给药方案。仅用基质或用实施例1化合物下面的给药方案通过口服管饲法对小鼠进行给药在第0、2、4、6、14、16和20天10mg/kg；在第0、2、14、16和20天30mg/kg；和在第0、2、14、16和20天100mg/kg。
对于MEXF1341模型而言，将连续传代的人黑素瘤MEXF1341肿瘤细胞皮下移植到雌性Nu/Nu小鼠的后胁腹中。当肿瘤平均体积达到大约78mm3时，根据肿瘤体积将小鼠随机分组并开始用实施例1的化合物进行治疗。仅用基质或用实施例1化合物下面的给药方案通过口服管饲法对小鼠进行给药在第0、2、4、6、10、12、18和20天10mg/kg；在第0、2、4、6、10、12、18和20天30mg/kg；和在0、2、4、6、10、12和20天100mg/kg。
在最后一次给药后4小时时，将得自MEXF276和MEXF1341模型的小鼠安乐死，收获肿瘤并将其快速冷冻。随后，如上面实施例84中所述的那样，用蛋白印迹对得自这些肿瘤的溶胞产物的目标调节(pMEK)和下游标记(BIM，p27Kip和pAKT)的调节进行分析。
结果 图8A是表示当用实施例1的化合物进行治疗时，小鼠体内MEXF276(B-Raf V600E)黑素瘤癌性肿瘤体积的平均降低的图。图8A中所示的结果表明实施例1的化合物在10mg/kg下在MEXF276分离物中表现出显著的肿瘤生长抑制，并且在30mg/kg和100mg/kg下在全部8只小鼠中均表现出高于或等于50％的肿瘤消退。对肿瘤溶胞产物中pMEK磷酸化作用(图8B)以及下游和下游生物标记调节的分析(图8C)证明，如图8B中磷酸-MEK的降低所示的那样，MEXF276肿瘤中的突变型B-Raf活性被抑制。如图8C中所示，观察到BIM(细胞凋亡的标记)和p27Kip(细胞周期停滞)增加和磷酸-AKT(存活途径信号)降低，证实抑制了MAPK途径中的Raf激酶活性。
图9A是表示当用实施例1的化合物进行治疗时，对小鼠体内MEXF1341(N-Ras Q61K)黑素瘤癌性肿瘤生长的平均抑制的图。图9A中所示的结果表明实施例1的化合物在MEXF 1341突变型N-Ras(N-Ras Q61K)黑素瘤肿瘤模型中在30mg/kg和100mg/kg的剂量下造成了显著的肿瘤生长抑制(高至70％抑制)，但是没有诱导肿瘤消退。如图9B中所示，在用100mg/kg所述化合物进行治疗后20天对磷酸-MEK的分析表明，与在MEXF276(突变型B-Raf)模型中获得的结果相反，没有观察到磷酸-MEK降低。此外，虽然有一些迹象表明其影响了MEXF 1341模型中MAPK途径Raf下游中的一些信号分子，但是其作用显著低于在MEXF276模型中观察到的作用。例如，如图9C中所示，在30mg/kg和100mg/kg组中p27Kip水平(细胞周期停滞)增加，其表明生长抑制，并且观察到细胞凋亡标记BIM的轻微增加。因此，似乎实施例1的化合物在MEXF276(突变型B-Raf)异种移植物模型中具有有效的活性，造成了肿瘤消退，在MEXF1341(野生型B-Raf，突变型N-Ras)异种移植物模型中也有显著的但是效力较低的活性(造成了肿瘤生长抑制)。
实施例86 用实施例1的化合物进行的治疗抑制了人结肠直肠癌肿瘤生长 对实施例1的化合物在结肠直肠癌异种移植物模型HCT-116(突变型K-Ras G13D)、HT-29(B-Raf V600E)和急性白血病异种移植物模型MV4-11(FLT3 ITD)中的抑制活性进行了试验。
方法将5×106个HCT-116(突变型K-Ras G13D)人结肠直肠癌细胞皮下移植到体重约24g的10-12周大的雌性Nu/Nu小鼠的后胁腹中。当肿瘤平均体积达到大约212mm3时，仅用基质或者按照实施例1化合物下面的给药方案通过口服管饲法对小鼠进行给药在第1天和每隔2天(q2d)以10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg口服管饲，共计28天。在第3次给药后第4小时、8小时和24小时将卫星(Satellite)小鼠安乐死并收获肿瘤。随后，如上面实施例84中所述的那样，用蛋白印迹对得自这些肿瘤的溶胞产物的目标调节(pMEK)进行分析。
如下那样对第二种人结肠直肠癌模型——HT-29(B-Raf V600E)进行试验。将2×106个HT-29细胞皮下移植到体重约24g的10-12周大的雌性Nu/Nu小鼠的后胁腹中。当肿瘤平均体积达到大约167mm3时，仅用基质或者按照实施例1化合物下面的给药方案通过口服管饲法对小鼠进行给药在第1天和每隔2天(q2d)以10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg口服管饲，共计28天。
如下那样对人急性单核细胞性白血病异种移植物模型——MV4-11(FLT3 ITD)进行试验将5×106个MV4-11细胞皮下移植到体重约24g的10-12周大的雌性Nu/Nu小鼠的后胁腹中。当肿瘤平均体积达到大约190mm3时，仅用基质或者按照实施例1化合物下面的给药方案通过口服管饲法对小鼠进行给药在第1天和每隔2天(q2d)以10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg口服管饲，共计16天。在第3次给药后4小时将卫星小鼠安乐死并收获肿瘤。随后，如上面实施例84中所述的那样，用蛋白印迹对得自这些肿瘤的溶胞产物的目标调节(pMEK)进行分析。
结果 在图10A-D中表示了HCT-116研究的结果。图10A是表示当用100mg/kg实施例1的化合物进行治疗时，小鼠体内HCT-116(K-Ras G13D)结肠直肠癌肿瘤体积的平均降低的图。如图10B-10D中所示，在第3次给药后4小时(图10B)、8小时(图10C)和24小时(图10D)进行的磷酸-MEK分析表明观察到了磷酸-MEK的降低。
图11是表示当用实施例1的化合物进行治疗时，HT-29(B-Raf V600E)结肠直肠癌肿瘤体积的平均降低的图。如图11中所示，在30mg/kg和100mg/kg下观察到肿瘤消退。
在图12A-B中表示了MV4-11研究的结果。图12A是表示当用实施例1的化合物进行治疗时，MV4-11急性单核细胞性白血病癌肿瘤在小鼠中生长的平均抑制的图。MV4-11肿瘤细胞是由突变型受体酪氨酸激酶(MV4；11，FLT3 ITD)驱动的。如所示的那样，实施例1的化合物在MV-11模型中造成了显著的肿瘤生长抑制，但是，既没有肿瘤消退的迹象(图12A)，也没有观察到MEK信号的抑制(图12B)。虽然不希望受任何理论的束缚，但是如实施例87-88中所述的那样，在MV4-11模型中，肿瘤生长抑制的功效可能是该化合物抗-血管生成活性的结果，其主要是通过VEGFR-2的抑制。在下面的表7中提供了由在上述黑素瘤、结肠直肠癌和白血病异种移植物模型中对实施例1的化合物的功效进行的评估获得的数据的概述。
表7实施例1的化合物在各种异种移植物模型中的活性的概述 从表7中概括的数据来看，如图6-12所示，并且如实施例82-86中所述，实施例1的化合物在所试验的其中B-Raf发生了突变的每一种异种移植物模型中都是有效的，在所试验的所有三种模型(A375M、MEXF276和HT29)中都造成了肿瘤消退和目标调节。实施例87酪氨酸激酶抑制试验 1.生物化学试验 通过提供ATP和适宜的肽或包含用于磷酸化的酪氨酸氨基酸残基的蛋白并对磷酸根部分向酪氨酸残基的转移进行分析来测量许多蛋白酪氨酸激酶的激酶活性。相当于VEGFR2、PDGFRβ、CSF-1R和c-Kit的胞质结构域的重组蛋白是通过由用相应的人VEGFR2、PDGFRβ、CSF-1R和c-Kit重组杆状病毒表达载体转染的Sf9昆虫细胞进行纯化获得的。对于各试验而言，将实施例1的化合物{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺在DMSO中连续稀释，然后将其与适宜的激酶反应缓冲液加ATP(ATP的浓度等于各自的Km值或者仅略低于所述的Km值)混合到一起。加入所述激酶蛋白和适宜的生物素化的肽底物，从而得到50-100μL的终体积。将这些反应在室温下培养1-3小时，然后通过加入25-50μL 45mM EDTA、50mM Hepes pH7.5来终止该反应。将被终止了的反应混合物(75μL)转移到抗生物素蛋白链菌素-涂布的微量滴定板(Boehringer Mannheim)中并将其培养1小时。在进行了一些修改的情况下(用于抗体稀释的DELFIA试验缓冲液补加了1mMMgCl2)，用铕标记的抗-磷酸酪氨酸抗体PT66，用DELFIA时间分辩荧光系统(Wallac或PE Biosciences)来测量磷酸化的肽产物。在Wallac 1232DELFIA荧光计或PE Victor II多重信号读数器上读取时间分辩的荧光。使用XL Fit数据分析软件，用非线性回归来计算对于50％抑制而言各化合物的浓度(IC50)。
在50mM Hepes pH7.0、2mM MgCl2、10mM MnCl2、1mM NaF、1mM二硫苏糖醇(DTT)、1mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、1至30μM ATP和0.25μM生物素化的肽底物“GGGGQDGKDYIVLPI”(SEQ ID NO1)中对VEGFR2激酶(0.05μg/mL)进行试验。
对于PDGFR激酶试验而言，使用具有与上述缓冲液条件相同的缓冲液条件的120μg/mL酶，只是将ATP和肽底物浓度变成1.4μM ATP，和使用0.25μM生物素化的肽底物“GGGGQDGKDYIVLPI”(SEQ IDNO1)。
在试验缓冲液(50mM HEPES pH7.0、5mM MgCl2，10mM MnCl2、0.1％BSA，1mM DTT、0.01％吐温，最终pH为7.5)、1μM ATP和50nM生物素化的肽底物“EEEEAYGWLNF”(SEQ ID NO2)中对CSF-1R的激酶活性进行试验。
通过提供ATP和相当于c-Kit受体的胞质结构域的重组蛋白(得自Proquinase)来测量c-Kit的激酶活性。将c-Kit激酶蛋白(2nM)和生物素化的肽底物(1μM)“GGLFDDPSWNVQNL”(SEQ ID NO3)加入到反应缓冲液加ATP(8μM)中，从而得到100μL的终体积。用于c-Kit的反应缓冲液是50mM HEPES pH7.5、1mM NaF、2mM MgCl2、10mM MnCl2和1mg/mL BSA。将该反应在室温下培养2小时并通过加入50μL 45mMEDTA、50mM HEPES，pH7.5来终止该反应。将被终止了的反应混合物(75μL)转移到抗生物素蛋白链菌素-涂布的微量滴定板(BoehringerMannheim)中并将其培养1小时。在进行了一些修改的情况下(用于抗体探测的DELFIA试验缓冲液补加了1mM MgCl2)，用铕标记的抗-磷酸酪氨酸抗体PT66，用DELFIA时间分辩荧光系统(Wallac或PE Biosciences)来测量磷酸化的肽产物。在Wallac 1232 DELFIA荧光计或PE Victor II多重信号读数器上读取时间分辩的荧光。使用XL Fit数据分析软件，用非线性回归来计算对于50％抑制而言实施例1的化合物的浓度(IC50)。
结果如下面表8中所示，实施例1的化合物是有效的VEGFR-2、c-Kit、PDGFR-β和CSF-1R抑制剂。
表8实施例1的化合物对酪氨酸激酶的抑制 如下那样，还用以细胞为基础的试验测量了实施例1的化合物对表8中所示目标分子的活性。
在用实施例1的化合物进行处理后，如用蛋白印迹测量到的磷酸-VEGFR降低所测量的那样(未示出)，HMVEC细胞的目标调节表明其以0.03μM的EC50抑制了VEGF介导的VEGFR-2磷酸化作用。
如用ELISA测量到的磷酸-c-Kit降低所测量的那样，在用实施例1的化合物进行治疗后，对Mo7e细胞中c-Kit的抑制进行的分析表明其以1.1μM的EC50抑制了c-Kit磷酸化作用。
如用ELISA测量到的磷酸-PDGFR-β降低所测量的那样，在用实施例1的化合物进行治疗后，对MG63细胞中PDGFR-β的抑制进行的分析表明其以0.7μM的EC50抑制了磷酸-PDGFR-β。
实施例88血管发生的抑制 为了进一步对实施例1的化合物对VEGFR-2的作用进行研究，用CHO-VEGF Matrigel血管发生模型对该化合物进行了评估。
方法在开始研究前，使110Nu/Nu小鼠(n＝10/组)适应一周。在第1天，将位于0.5mL Matrigel中的5×106个VEGF-CHO细胞皮下注射到小鼠的上腹部。在第1天，根据qdx5的给药方案，给小鼠口服基质、10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg实施例1的化合物。在5天后，从小鼠体内取出该Matrigel塞并对其中的血红蛋白浓度进行定量。
结果 图13是表示在用10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg实施例1的化合物进行治疗后对CHO-VEGF Matrigel模型中VEGF-介导的血管发生的抑制作用的图。如图13中所示，将该化合物给药5天显著抑制了VEGF-介导的血管发生。
实施例89 给药方案的影响 为了对突变型B-Raf抑制、肿瘤响应和血浆中化合物浓度之间的关系进行评估，在A375M人黑素瘤异种移植物模型中进行实施例1化合物的给药方案研究。
如图7A中所示，已经在A375M模型中建立了实施例1化合物清楚的剂量-响应关系。图7A中的数据表明，当每天给药时，实施例1的化合物在100mg/kg下诱导了肿瘤消退，并且肿瘤消退与突变型B-Raf的持续抑制有关(如图7B中磷酸-MEK的降低所示)。但是，在这种给药方案中，实施例1的化合物在30mg/kg和100mg/kg的剂量水平下不能被良好耐受，这是因为到第14天时，小鼠最初的体重平均丧失了10％。因此，如下所述那样进一步对最有效的100mg/kg的剂量进行了评估。
方法 与实施例84一样，将3×106个A375M人黑素瘤细胞皮下移植到体重约24g的10-12周大的雌性Nu/Nu小鼠的右胁腹中。当肿瘤平均体积达到大约200mm3时，根据肿瘤体积将小鼠随机分成4组，每组9只小鼠并开始用实施例1的化合物进行治疗。仅用基质或以下面的给药方案用实施例1的化合物通过口服管饲法来对小鼠进行给药，给药32天q2d，q3d或q4d，100mg/kg，给药28天。
在该研究中，对荷瘤小鼠的卫星组进行给药以监测肿瘤中的目标调节。在q2d组给药5次和在q4d组给药3次后，在各时间点从小鼠体内收集肿瘤和血浆。如实施例84中所述的那样对肿瘤进行处理以对磷酸-MEK水平进行蛋白印迹分析，并且分离血浆以测量药物水平。
结果 图14A是表示当以q2d、q3d或q4d的给药方案用100mg/kg实施例1的化合物进行治疗时，小鼠A375M黑素瘤肿瘤体积的平均降低的图。如图14A中所示，实施例1的化合物以q2d、q3d或q4d的方案以100mg/kg口服给药产生了显著的功效。图14B中所示的蛋白印迹分析表明在q2d样品中，在给药后48小时，相对于基质处理的对照而言，用所述化合物进行治疗的小鼠体内的肿瘤具有降低的磷酸-MEK水平。在q4d样品中，至72小时时，三个肿瘤中仅一个肿瘤具有降低的磷酸-MEK水平，至96小时时，用化合物进行处理的所有肿瘤都具有与基质处理的肿瘤相当的磷酸-MEK水平。如图7B中所示，这些结果与根据q2d给药方案获得的结果一致。
如下面的表9中所示，在通过体重降低进行衡量时，q3d和q4d的给药方案可以更好地被试验小鼠耐受。
表9用100mg/mL实施例1化合物进行的A375M异种移植物给药研究 总之，当综合考虑目标调节数据和功效数据时，q2d或q3d的给药方案在具有最大主体耐受性的情况下产生了最有效的肿瘤消退。
实施例90 目标血浆浓度研究 如上面实施例89中所述，从用实施例1的化合物进行治疗的小鼠体内取血清样品。测定这些血清样品中的药物浓度并以图15中的化合物浓度-时间图的形式来对结果进行表示。可以通过考虑图14A和图14B中所示的目标调节数据，由图15来估算目标调节的药物阈值浓度。如图14B中所示，在给药后至48小时的所有时间点，相对于基质处理的肿瘤而言，在化合物处理的肿瘤中磷酸-MEK水平降低，因此，相应的药物浓度一定高于这一阈值。如图14C中所示，在给药后72和96小时，没有目标调节，因此相应的药物浓度一定低于这一阈值。总之，估计所述化合物的阈值应为约50,000至80,000ng/mL，如大约70,000ng/mL(135μM)。
有趣的是，注意到上述小鼠异种移植物研究中的目标血浆浓度比体外A375M细胞(.16μM)中目标调节的EC50(见表5)高大约1000倍。这种差异在很大程度上可以用血浆蛋白结合来进行解释，这是因为实施例1的化合物99.9％以上在血浆中是蛋白结合的。考虑到这一点，粗略估计游离药物浓度为大约0.135μM，其接近于A375M细胞中目标调节测得的0.16μM的体外EC50。
为了进一步研究血浆蛋白结合对实施例1化合物的活性的影响，进行了一系列体外实验，其中将该化合物在50％得自小鼠、大鼠、狗、猴子或人的血清中预培养，然后将其应用到A375M细胞或Mo7e细胞中。在培养一夜后，测量A375M细胞中的磷酸-MEK和磷酸-ERK水平(以对突变型B-Raf抑制进行分析)。在培养后4小时，测量Mo7e细胞中的磷酸-c-Kit水平(以对c-Kit抑制进行分析)。在下面的表10中概括了这些试验的结果。
表10得自各种种属的血清对实施例1化合物的活性的影响 可以用表10中的数据来估计实施例1的化合物与得自不同物种的血浆蛋白的相对结合并用其作为用于将在小鼠体内测得的目标血浆浓度外推至其它种属的校正因子的基础。例如，根据这些数据，可以估计大鼠体内的目标血浆浓度比小鼠体内低大约5-倍，并且人体内的目标血浆浓度比小鼠体内低大约10-倍。
虽然已经对本发明优选的实施方案进行了说明和描述，但是应当意识到可以在不脱离本发明主旨和范围的情况下对其进行各种变化。
权利要求
1.式(I)的化合物或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐
其中，
各R1独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷基)磺酰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基；
R2是C1-6烷基或卤代(C1-6烷基)；
各R3独立地选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
各R4独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基羰基、C1-6烷基氨基羰基、氰基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、苯基和杂芳基；
其中R1、R2、R3和R4可任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基、卤代(C1-6烷基)、C1-6烷氧基和卤代(C1-6烷氧基)的取代基所取代；
a是1、2、3、4或5；
b是0、1、2或3；且
c是1或2。
2.如权利要求1所述的化合物，其中各R1独立地选自羟基、氯、氟、溴、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、哌啶基、C1-6烷基哌啶基、哌嗪基、C1-6烷基哌嗪基、四氢呋喃基、吡啶基和嘧啶基。
3.如权利要求1所述的化合物，其中a是1或2，并且至少一个R1是卤代(C1-6烷基)。
4.如权利要求3所述的化合物，其中至少一个R1是三氟甲基。
5.如权利要求1所述的化合物，其中R2是C1-6烷基。
6.如权利要求1所述的化合物，其中R2是甲基或乙基。
7.如权利要求4所述的化合物，其中R2是甲基。
8.如权利要求1所述的化合物，其中b是0且R3不存在。
9.如权利要求1所述的化合物，其中b是1且R3是C1-6烷氧基。
10.如权利要求9所述的化合物，其中R3是甲氧基。
11.如权利要求1所述的化合物，其中c是1或2且至少一个R4是卤代(C1-6烷基)。
12.如权利要求11所述的化合物，其中至少一个R4是三氟甲基。
13.具有式(II)的如权利要求1所述的化合物或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐
其中，
各R1独立地选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷基)磺酰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基；
各R3独立地选自卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基；
各R4独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基羰基、氰基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、苯基和杂芳基；
其中R1、R2、R3和R4可任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代；
a是1、2、3、4或5；
b是0、1、2或3；且
c是1或2。
14.式(III)的化合物或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐
其中，
各R1独立地选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、羟基、卤素、(C1-6烷基)硫基、(C1-6烷基)磺酰基、环烷基、杂环烷基、苯基和杂芳基；
各R4独立地选自羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基羰基、氰基、环烷基、杂环烷基、杂环烷基羰基、苯基和杂芳基；
其中R1和R4可任选地被一个或多个独立地选自羟基、卤素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代；
a是1、2、3、4或5；且
c是1或2。
15.如权利要求14所述的化合物，其中各R1独立地选自羟基、氯、氟、溴、甲基、乙基、丙基、丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、哌啶基、C1-6烷基哌啶基、哌嗪基、C1-6烷基哌嗪基、四氢呋喃基、吡啶基和嘧啶基。
16.如权利要求15所述的化合物，其中a是1或2并且至少一个R1是卤代(C1-6烷基)。
17.如权利要求16所述的化合物，其中至少一个R1是三氟甲基。
18.如权利要求14所述的化合物，其中a是1。
19.如权利要求18所述的化合物，其中R1是三氟甲基。
20.如权利要求14所述的化合物，其中c是1或2并且至少一个R4是卤代(C1-6烷基)。
21.如权利要求20所述的化合物，其中至少一个R4是三氟甲基。
22.如权利要求21所述的化合物，其中c是1。
23.选自下列的化合物
{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(4-三氟甲基苯基)-胺，
(2-氟-5-吡啶-3-基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2-氟-5-吡啶-4-基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(4-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(3-三氟甲基-苯基)-胺，
(3-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基-氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(4-氯-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(4-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基-氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(4-三氟甲氧基-苯基)-胺，
(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-(1-甲基-5-{2-[5-甲基-4-(3-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-吡啶-4-基氧基}-1H-苯并咪唑-2-基)-胺，
(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-(1-甲基-5-{2-[5-甲基-4-(4-三氟甲基-苯基)-1H-咪唑-2-基]-吡啶-4-基氧基}-1H-苯并咪唑-2-基)-胺，
2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-5-三氟甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯，
(2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-5-三氟甲基-1H-咪唑-4-基)-甲醇，
2-{4-[1-甲基-2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲腈，
(3-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基-氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
{1-甲基-5-[2-(5-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲硫基-苯基)-胺，
(3-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
[4-氟-3-(四氢-呋喃-3-基)-苯基]-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(4-溴-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(4-氟-3-异丙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(4-三氟甲硫基-苯基)-胺，
(2-氟-5-异丙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(5-叔-丁基-2-氟-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2-氟-5-吡啶-3-基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲腈，
(2-氯-4-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(5-叔-丁基-2-氯-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2-氟-5-吡啶-4-基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(4-苯基-5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(4-苯基-5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
{1-甲基-5-[2-(4-苯基-5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(3-三氟甲基-苯基)-胺，
(3-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(4-苯基-5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(4-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(4-苯基-5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2-氯-5-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(4-叔-丁基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
{1-甲基-5-[2-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(3-三氟甲基-苯基)-胺，
(5-叔-丁基-2-氟-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-甲基-4-苯基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲酸甲酯，
2-{4-[2-(2-氯-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-5-三氟甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯，
(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2-氯-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(2，5-二甲氧基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(3，5-二甲氧基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(2-三氟甲基-苯基)-胺，
(2-乙基-苯基)-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基-氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
(4-乙基-哌嗪-1-基)-(2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-基)-甲酮，
2-{4-[2-(2-氟-5-三氟甲基-苯基氨基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺，
{1-乙基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-胺，
(2-氟-5-三氟甲基-苯基)-{6-甲氧基-1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-胺，
{6-甲氧基-1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺，
(4-乙基-哌嗪-1-基)-(2-{4-[1-甲基-2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-基)-甲酮，
{1-乙基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基}-(4-三氟甲基-苯基)-胺，
2-{4-[1-甲基-2-(4-三氟甲基-苯基氨基)-1H-苯并咪唑-5-基氧基]-吡啶-2-基}-3H-咪唑-4-甲酸(2-羟基-乙基)-酰胺，
2-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并-咪唑-2-基氨基}-5-三氟甲基-苯酚，和
3-{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基氨基}-6-三氟甲基-苯酚；
或其互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物或该化合物、互变异构体、立体异构体、多晶型物、酯、代谢物或前体药物的可药用的盐。
24.如权利要求23所述的化合物或其可药用的盐，其中该化合物具有下式
或具有下式的该化合物的互变异构体或该互变异构体的可药用的盐
25.一种包含如权利要求1或24所述的化合物、互变异构体、其可药用的盐或其互变异构体的可药用的盐和可药用载体的组合物。
26.一种治疗人或动物个体的癌性病症的方法，其包括给人或动物个体施用包含如权利要求1或24所述的化合物、互变异构体、其可药用的盐或其互变异构体的可药用的盐的组合物。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述的组合物抑制了Raf激酶或突变型B-Raf激酶。
28.如权利要求26所述的方法，其进一步包括给人或动物个体施用至少一种用于治疗癌症的另外的活性剂。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述至少一种用于治疗癌症的另外的活性剂选自依立替康、托泊替康、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、卡铂、顺铂、紫杉烷类、特扎他滨、环磷酰胺、长春花生物碱、伊马替尼、蒽环类抗生素、利妥昔单抗和曲妥单抗。
30.如权利要求26所述的方法，其中所述的癌性病症是黑素瘤。
31.如权利要求26所述的方法，其中所述的癌性病症是乳癌或前列腺癌。
32.如权利要求1或24所述的化合物、互变异构体、其可药用的盐或其互变异构体的可药用的盐用于治疗癌症的应用。
33.如权利要求1或24所述的化合物、互变异构体、其可药用的盐或其互变异构体的可药用的盐在制备治疗癌症的药物中的应用。
34.一种抑制个体体内至少一种MAPK信号转导途径中的丝氨酸/苏氨酸激酶或治疗个体体内由MAPK信号转导途径中的丝氨酸/苏氨酸激酶介导的生物学情况的方法，其包括给所述个体施用包含如权利要求1或24所述的化合物、互变异构体、其可药用的盐或其互变异构体的可药用的盐的组合物。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述的组合物抑制Raf激酶。
36.如权利要求34所述的方法，其中所述的组合物抑制突变型B-Raf激酶。
37.如权利要求34所述的方法，其中所述的生物学情况选自黑素瘤、乳头状甲状腺癌、卵巢癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌和白血病。
38.如权利要求34所述的方法，其中所述组合物包含{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基苯基)-胺或其可药用的盐、其互变异构体或其互变异构体的可药用的盐。
39.一种抑制个体体内的受体酪氨酸激酶或治疗个体的由受体酪氨酸激酶介导的生物学情况的方法，其包括给所述个体施用包含如权利要求1或24所述的化合物、互变异构体、其可药用的盐或其互变异构体的可药用的盐的组合物，其中所述受体酪氨酸激酶选自VEGFR-2、FGFR-3、c-Kit、PDGFR-β和CSF-1R。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述的生物学情况选自肥大细胞白血病、红白血病、生殖细胞肿瘤、小细胞肺癌、胃肠道间质瘤、急性骨髓性白血病、成神经细胞瘤、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌和乳癌。
41.如权利要求39所述的方法，其中所述组合物包含{1-甲基-5-[2-(5-三氟甲基-1H-咪唑-2-基)-吡啶-4-基氧基]-1H-苯并咪唑-2-基}-(4-三氟甲基苯基)-胺或其可药用的盐、其互变异构体或其互变异构体的可药用的盐。
全文摘要
提供了式(I)的新型被取代的苯并咪唑化合物、组合物和抑制与人或动物个体体内肿瘤生成有关的激酶活性的方法。在某些实施方案中，该化合物和组合物可有效抑制至少一种丝氨酸/苏氨酸激酶或受体酪氨酸激酶的活性。该新化合物和组合物可单独使用或者与至少一种用于治疗丝氨酸/苏氨酸激酶或受体酪氨酸激酶介导的病症如癌症的另外的活性剂联用。
文档编号C07D401/00GK101253168SQ200680031748
公开日2008年8月27日 申请日期2006年8月30日 优先权日2005年8月30日
发明者M·E·艾卡娃, P·阿米里, J·H·达夫, B·H·莱文, C·麦克布赖德, T·E·皮克, D·J·蓬, S·拉默西, P·A·伦豪威, C·谢弗, D·斯图尔特, S·苏布拉马尼安 申请人:诺瓦提斯公司