专利名称：Fbxl15蛋白片段及其编码基因和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及FBXL15蛋白片段及其编码基因和应用。
背景技术：
蛋白质是构成生命体内细胞和组织的基本物质，几乎所有的蛋白质都处在不断合成与降解的动态平衡之中。与蛋白质的合成相比，蛋白质的降解同样重要，机体内短寿命的、错误折叠的以及机体自身不需要的蛋白都需要通过降解途径来清除。其中泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-Proteasome System,UPS)就是真核生物体内普遍存在的具有高度选择性的蛋白质降解系统，主要由蛋白质泛素化和蛋白酶体降解两个过程组成。该系统的生物学功能非常广泛，参与调控细胞内几乎各个方面的生命活动，其异常与炎症、癌症及神经退行性疾病等密切相关。泛素化修饰通过由泛素激活酶(ubiquitin activating enzyme，El)、泛素结合 Sl (ubiquitin conjugating enzyme, E2)禾口泛素连接 Sl (ubi qui tin-protein ligase, E3) 参与介导的酶促级联反应完成，最后经蛋白酶体降解。其中E3决定底物识别的特异性，是蛋白质泛素化领域的研究热点。E3可以分为两大类含有RING(really interesting new gene)锌指结构和 HECT (homologous to E6AP C-terminus)结构域的 E3。RING类E3中的大多数是基于Cullins蛋白的多亚基复合体，其中基于Cullinl 所形成的SCF(Skpl-Cullinl-F-b0X)复合体是研究最多、最深入的RING类E3复合体。它以支架蛋白Cullinl为中心，C端结合RING锌指蛋白Rocl，N端结合接头蛋白Skpl，Skpl 又进一步募集不同的F-box蛋白，F-box蛋白担当底物识别亚基的角色，这样SCF复合体就利用不同的F-box蛋白形成不同复合体，从而结合不同的底物，在细胞周期调控、细胞生长及肿瘤发生等多种生物学过程中发挥着重要作用。F-box蛋白是一个大的蛋白家族，其家族成员数量在不同的物种中差别很大，酵母中约有20种，果蝇中有27种，而在人中则有69个成员。人中的F-box蛋白家族根据其C端所含结构域的不同，可以分为三类含有WD40结构域的FBXW亚家族，含有LRR区的FBXL亚家族，以及含有其它结构域的统称为FBXO亚家族，它们分别通过WD40、LRR及其它结构域与底物蛋白发生相互作用，介导SCF复合体的结
I=I O
发明内容
本发明的目的是提供FBXL15蛋白片段(FBXL15-AF)及其编码基因和应用。 本发明提供的FBXL15蛋白片段，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质(序列表的序列3所示的 FBXL15蛋白自N末端第71至300位氨基酸残基)；(b)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/ 或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列1衍生的蛋白质。为了使(a)中的蛋白质便于纯化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。表1标签的序列
权利要求
1.一种蛋白片段，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列1衍生的蛋白质。
2.权利要求1所述蛋白片段的编码基因。
3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于所述蛋白的编码基因是如下(1)或(2) 或⑶所述的DNA分子(1)序列表中序列2所示的DNA分子；(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能的蛋白的DNA分子；(3)与(1)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且编码具有相同功能的蛋白的 DNA分子。
4.含有权利要求2或3所述编码基因的表达盒、重组载体、转基因细胞系或重组菌。
5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于所述重组载体为在pFlag-CMV-2表达载体的多克隆位点插入序列表的序列2所示的DNA片段得到的重组质粒。
6.如下(I)或(II)或(III)在抑制成骨细胞的分化中的应用(I)权利要求1所述蛋白片段；(II)权利要求2或3所述编码基因；(III)权利要求4或5所述重组载体。
7.如下(i)或(ii)或(iii)在制备抑制成骨细胞分化的产品中的应用 (i)权利要求1所述蛋白片段；( )权利要求2或3所述编码基因； (iii)权利要求4或5所述重组载体。
8.如权利要求6或7所述的应用，其特征在于所述成骨细胞为UMR106细胞。
9.抑制成骨细胞分化的产品，它的活性成分为如下①或②或③①权利要求1所述蛋白片段；②权利要求2或3所述编码基因；③权利要求4或5所述重组载体。
10.如权利要求9所述的产品，其特征在于所述成骨细胞为UMR106细胞。
全文摘要
本发明公开了FBXL15蛋白片段及其编码基因和应用。本发明公开的蛋白片段，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列1衍生的蛋白质。所述蛋白片段或其编码基因可用于抑制成骨细胞的分化，对于石骨症的治疗具有潜在应用价值。
文档编号C12N15/63GK102382187SQ20111035018
公开日2012年3月21日 申请日期2011年11月8日 优先权日2011年5月3日
发明者何珊, 崔宇, 张令强, 贺福初, 邢桂春 申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所