糖基转移酶的多核巧酸可W优选是SEQIDNO. 2的核巧酸序列表示 的多核巧酸，并且还没有限制地包括与SEQIDNO. 2的核巧酸序列具有70%或更高、优选 80 %或更高、更优选90 %或更高、还更优选95 %或更高和最优选98 %或更高的序列同源性 的任何核巧酸序列，只要它能基本上编码具有UDP-糖基转移酶活性的蛋白质。
[0042] 包括本发明的多核巧酸的表达载体是能在合适的宿主细胞中表达祀蛋白质的表 达载体，并指DNA构建体，其包括可操作地连接W表达核酸插入物的必要调控元件。祀蛋白 质可通过将制备的重组载体转化或转染进宿主细胞而获得。
[0043] 包括本发明中提供的多核巧酸的表达载体包括，但不限于，源自大肠杆菌 巧.coli)的质粒（PYG601BR322、地R32、PUC118 和PUC119)、源自枯草杆菌炬acillus subtilis)的质粒（pUBllO和pTP5)、源自酵母的质粒（YEpl3、YEp24和YCp50)和±壤杆菌 属（Agrobacterium)-介导的转化中使用的Ti-质粒。瞻菌体DNA的具体实例包括A-瞻菌 体（〇131'〇114八、〇131'〇1121八、6]\?1^3、6]\?1^4、^径110、^径111和^2八口）。进一步，可使用动物病 毒如反转录病毒、腺病毒或牛痘病毒，昆虫病毒如杆状病毒、双链植物病毒（例如，CaMV)、 单链病毒或源于双生病毒的病毒载体。
[0044] 而且，作为本发明的载体，可使用转录激活因子，如B42-连接的融合质粒（例如， PJG4-5)。为了促进本发明中获得的祀蛋白质的纯化，需要时质粒载体可进一步包括其它序 列。融合质粒可包括标签如GST、GFP、化S-标签Myc-标签等，但是本发明的融合质粒不限 于该些实例。在本发明的一个实施例中，PGEX4T-1 --其是GST基因融合的载体一一用于 包括编码UDP-糖基转移酶的多核巧酸的表达载体的构建。
[0045] 此外，包括融合序列的载体表达的融合蛋白质可通过亲和色谱来纯化。例如，如果 谷脱甘肤-S-转移酶将与其它序列融合，则可使用作为该酶底物的谷脱甘肤。如果六聚组 氨酸用作祀蛋白质标签，则祀蛋白质可通过利用Ni-NTA化S-结合树脂柱（Novagen，USA) 被容易地纯化。
[0046] 为了将本发明的多核巧酸插入载体，纯化的DM可利用合适的限制酶切割，并插 入合适的载体DNA的限制位点或克隆位点。
[0047] 编码本发明的UDP-糖基转移酶的多核巧酸可W可操作地连接于载体。除了启动 子和本发明的核酸，本发明的载体可进一步包括顺式元件如增强子、剪接信号、多聚腺巧酸 添加信号、选择标记、核糖体结合序列（SD序列）。作为选择标记的实例，可使用氯霉素抗性 基因、氨节西林抗性基因、二氨叶酸还原酶、新霉素抗性基因等，但是将可操作地连接的另 外元件的类型不限于该些实例。
[0048] 如本文所用，术语"转化"指将DNA导入宿主细胞W便DNA可作为染色体外元件或 通过染色体整合被复制。目P，转化指通过将外源DNA导入细胞引起的基因的合成改变。
[0049] 本发明的转化可通过任何转化方法进行，并可遵循本领域已知的通常方法而容 易地进行。一般而言，转化方法的实例包括化C12沉淀、Han址an方法一一其是通过利用 DMSO(二甲基亚讽）作为还原物质的改进的化C12方法、电穿孔、磯酸巧沉淀、原生质体融 合、利用碳化娃纤维的振荡、±壤杆菌属-介导的转化、PEG-介导的转化、硫酸葡聚糖-介导 的转化、阳离子脂质体-介导的转化和脱水/抑制-介导的转化。包括编码本发明的UDP-糖 基转移酶的多核巧酸的载体的转化方法不限于该些实例，并且可没有限制地使用本领域通 常使用的转化或转染方法。
[0化0] 在本发明中，宿主细胞的种类没有特别地限制，只要它能表达本发明的多核巧酸。 将用于本发明的宿主细胞的具体实例包括属于埃希氏菌属巧scherichia)的细菌如大肠 杆菌；属于芽抱杆菌属炬acillus)的细菌如枯草杆菌；属于假单胞菌属（Pseudomonas) 的细菌如恶臭假单胞菌（Pseudomonasputida);酵母如啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)和粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomycespombe);动物细胞、植物细胞和昆虫 细胞。将用于本发明的大肠杆菌菌株的具体实例包括化41 0E3)、化21和皿101，并且枯草 杆菌菌株的具体实例包括WB700和LKS87。导入有包括本发明的多核巧酸的表达载体的植 物转化体没有特别地限制，只要它能表达本发明的糖基转移酶。其实例包括烟草、拟南芥、 马铃馨、人参、芝麻、构檢、维菊属炬ellis)等，但不限于此。
[0051] 任何启动子可用作本发明的启动子，只要它能在宿主细胞中驱动本发明的核酸表 达。例如，可使用源自大肠杆菌或瞻菌体的启动子如trp启动子、lac启动子、化启动子和 PR启动子；源自大肠杆菌感染瞻菌体的启动子如T7启动子、CaMV35S、MS或组蛋白质启动 子。还可使用合成修饰的启动子如tac启动子。
[0化2] 通过W上方方法导入有包括编码本发明的UDP-糖基转移酶蛋白质的多核巧酸的 表达载体的转化体具有通过在PPD型人参皂巧C-3位置的0-糖巧键的形成而转移葡萄糖 的生物活性。优选，转化体指具有能将人参皂巧PPD转化成人参皂巧化2,或将C-K转化成 人参皂巧巧能力的转化体，但不限于此。
[005引作为另一方面，本发明提供制备UDP-糖基转移酶蛋白质的方法。
[0化4]UDP-糖基转移酶与上面所描述的相同。
[0化5] 优选，制备方法包括（a)培养导入有包括编码UDP-糖基转移酶的多核巧酸的载体 的转化体；化）从培养的转化体产生UDP-糖基转移酶；和（C)回收产生的UDP-糖基转移酶。 [0056] 转化体的培养可通过遵循本领域使用的通常方法来进行。用于转化体的生长培养 基中包括的碳源可根据转化体的类型由本领域技术人员选择。可采用合适的培养条件W便 调节培养时间和量。
[0057] 作为另一方面，本发明提供通过利用UDP-糖基转移酶、转化体或其培养物而转化 PPD(原人参二醇）型人参皂巧来制备糖基化人参皂巧的方法。
[005引 UDP-糖基转移酶、转化体、PPD型人参皂巧和糖基化人参皂巧与上面所描述的相 同。
[0化9] 更具体地，该方法包括在UDP-糖的存在下使PPD型人参皂巧与SEQIDNO. 1的氨 基酸序列表示的UDP-糖基转移酶蛋白质、导入有包括编码该蛋白质的多核巧酸的表达载 体的转化体或转化体的培养物反应的步骤。
[0060] 如本文所用，术语"转化体的培养物"指根据已知的培养微生物的方法通过培养转 化体而获得的产物。培养物包括本发明的SEQIDNO. 1的UDP-糖基转移酶，因此它能将 PPD型人参皂巧转化成糖基化人参皂巧，例如，将人参皂巧PPD转化成人参皂巧化2,或将化 合物K转化成人参皂巧巧。
[0061] 作为在本发明中用作起始材料的PPD型人参皂巧，可使用分离和纯化的人参皂 巧、或包括在人参粉末或提取物中的人参皂巧。目P，包括人参皂巧的人参粉末或提取物可直 接用作起始材料来进行本发明的方法。用于本发明的人参包括已知的多种类型的人参，如 高丽参、西洋参化quiquefolius)、S^;：；参化]1〇1:〇肖;[]136]1肖）、竹节参化^'3口〇11；[州3)、^叶 参化trifolium)、假人参化pseudoginseng)和越南人参化vietnamensis)，但不限于 此。
[0062] 优选，转化可通过由本发明的UDP-糖基转移酶、导入有包括编码UDP-糖基转移酶 的多核巧酸的表达载体的转化体、或转化体的培养物引起的PPD型人参皂巧（生物转化成 糖基化人参皂巧而发生，并且它可通过将糖转移至在人参皂巧的C-3位置的哲基（-0H)而 实现。本发明的SEQIDNO. 1的氨基酸序列表示的蛋白质能将在C-3位置具有哲基的PPD 型人参皂巧，优选PPD或C-K，转化成糖基化人参皂