S确定反应完成。将反应混合物倾倒至75mL饱和 的NaHC0 3/H20中并且用二氯甲烷（3X50mL)萃取。将合并的有机层经Na2S0 4干燥并且真 空浓缩。将粗物质通过快速色谱纯化（硅胶，24g，15%至50%在己烷中的乙酸乙酯），得到 278mg的2-溴-6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基）-8- (6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞 嗪-2-基）-4-甲基-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮，为白色固体。 产物 LC/MS 观察值[M+H]+652、654。4 NMR(300MHz,氯仿-d) Sppm-〇. 13(s，3H)-0.02(s，3 H) 0. 77 (s, 9H) 1. 44 (s, 9H) 2. 19 (br. s. , 1H) 2. 66 (br. s. , 2H) 3. 02 (d, J = 13. 97Hz, 1H) 3. 84 ( s, 3H) 4. 60-5. 06 (m, 1H) 7. 27-7. 61 (m, 5H) 7. 90 (s, 1H) 8. 23 (br. s.，1H)。
[0271] 步骤11.制备6_(叔丁基-二甲基娃烷基氧基）_8_(6_叔丁基_8_氣-1_氧 代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-2- [5-(吗啉-4-羰基）-吡啶-2-基氨基]-4, 5, 6, 7-四氢 苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮
[0272]
[0273] 在氩气下，在（6-氨基吡啶-3-基）（吗啉代）甲酮（87. Omg，420 y mol)和 2_溴_6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基）-8-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞 嗪-2-基）_4-甲基-4,5,6,7-四氢-苯并[3,4]环庚烷[1，2-13]吡啶-3-酮（2741^， 420 ymol)的二$香烷（7mL)溶液中加入碳酸铯（410mg，1.26mmol)、4,5-二（二苯基膦 基）-9,9_二甲基咕吨（36.4mg，63.0ymol)和三（二亚苄基丙酮）二钯（0) (19.2mg， 21. 0 y mol)。将反应混合物在100°C加热14小时，然后使其冷却至室温。将反应混合物用 二氯甲烷稀释，经Na2S0 4干燥并且通过硅藻土过滤。将硅藻土垫用二氯甲烷洗涤。将合并 的滤液和洗涤液浓缩并且将粗物质通过快速色谱纯化（硅胶，40g，l %在二氯甲烷中的甲 醇；然后1%至4%在二氯甲烷中的甲醇梯度），得到270mg的6-(叔丁基-二甲基硅烷基氧 基）-8- (6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-2- [5-(吗啉-4-羰基）-吡 啶-2-基氨基]_4, 5, 6, 7四氢苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮（83%产率）。产品 LC/MS 观察值[M+H]+779。虫 NMR(300MHz,氯仿-d)Sppm-0.14(s，3H)-0.02(s，3H)0.76( s, 9H) 1. 44 (s, 9H) 2. 25 (br. s. , 1H) 2. 64 (br. s. , 2H) 3. 00 (d, J = 14. 35Hz, 1H) 3. 71 (d, J = 8. 69Hz, 8H) 3. 86 (s, 3H) 4. 58-5. 08 (m, 1H) 6. 84 (d, J = 8. 31Hz, 1H) 7. 28-7. 75 (m, 6H) 8. 23 (d ，J = 2. 27Hz 和覆盖 br. S. , 2H) 8. 35 (br. s. , 1H) 8. 77 (br. s. , 1H)。
[0274] 实施例1
[0275] 步骤12.制备8-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-6-羟基-4-甲 基-2-[5-(吗啉-4-羰基）-吡啶-2-基氨基]-4, 5, 6, 7-四氢苯并[3, 4]环庚烷[l，2-b] 吡啶-3-酮
[0276]
[0277] 在100mL圆底烧瓶中，将6_(叔丁基-二甲基硅烷基氧基）-8_(6_叔丁 基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-2-[5-(吗啉-4-羰基）-吡啶-2-基氨 基]-4, 5, 6, 7-四氢苯并[3, 4]环庚烷[l，2-b]吡啶-3-酮与四氢呋喃（6. OmL)合并，得 到黄色溶液。加入四丁基氟化铵溶液（514yL，lM，在四氢呋喃中，514ymol)。将反应混 合物在室温搅拌2小时，倾倒至75mL H20中并且用乙酸乙酯（2X75mL)和二氯甲烷（IX) 萃取。将合并的有机层经MgS04干燥并且真空浓缩。将粗物质通过快速色谱纯化（硅胶， 4(^，5%至30%(60 :10:1二氯甲烷：甲醇：见14011)，在二氯甲烷中），得到玻璃状物。将该 玻璃状物溶于少量的二氯甲烷中并且加入醚。将产生的沉淀的固体通过过滤收集并且用醚 研磨，得到135mg纯产物8-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-6-羟基-4-甲 基-2-[5-(吗啉-4-羰基）-吡啶-2-基氨基]-4, 5, 6, 7-四氢苯并[3, 4]环庚烷[l，2-b] 吡啶-3-酮，为白色粉末。产物LC/MS观察值[M+H]+665。4 NMR(300MHz，氯仿-d) S ppm 1. 43 (s, 9H) 2. 14-2. 88 (m, 3H) 3. 17 (d, J = 12. 46Hz, 1H) 3. 71 (d, J = 9. 06Hz, 8H) 3. 83 (s, 3H) 3. 95-4. 20 (m, 1H) 4. 39 (br. s. , 1H) 6. 83 (d, J = 8. 31Hz, 1H) 7. 32 (d, J = 7. 18Hz, 1H) 7. 45-7 .73 (m，5H) 8. 03-8. 43 (m，3H) 8. 77 (s，1H)。浓缩滤液，得到另外的84mg纯产物，为白色固体。 总产率为219mg(96%产率）。
[0278] 实施例2
[0279]
[0280] 8-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-6-羟基-4-甲 基-2- [5- ((S) -1-甲基-吡咯烷-2-基）-吡啶-2-基氨基]-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4] 环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮
[0281] 通过实施例1的类似方法制备，除了在步骤11中用5-((S)_l-甲基-吡咯 烷-2-基）-吡啶-2-基胺（（其可以如Berthel，S. J.等人US 2011-497093P描述的制备， 实施例1-18中的中间体）代替（6-氨基吡啶-3-基）（吗啉代）甲酮，得到55mg标题化合 物，为白色固体。产物LC/MS观察值[M+H] +635。
[0282] 实施例3
[0283]
[0284] (S) -8- (6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-6-羟基-4-甲基-2- [5-(吗 啉-4-羰基）-吡啶-2-基氨基]-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮
[0285] 在10mL圆底烧瓶中，将6_(叔丁基-二甲基-娃烷基氧基）_8_ (6_叔丁 基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b] P比啶-3-酮（490mg，854ymol)与二氯甲烧（18. 8mL)合并，得到无色溶液。加入HBr(151mg， 101yL，897ymol)，然后立即加入亚硝酸异戊酯（210mg，241yL，1. 79mmol)。将反应混合物 在室温搅拌4小时，直至通过TLC显示完成。将反应混合物倾倒至75mL饱和的NaHC03/H20 中并且用二氯甲烷（3X50mL)萃取。将有机层经Na2S04干燥，过滤并且将滤液真空浓缩。将 物质溶于乙酸乙酯并且再次浓缩，得到560mg(100% )的2-溴-6-(叔丁基-二甲基-硅烷 基氧基）-8- (6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-4,5, 6, 7-四氢-苯并 [3,4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮，为淡黄色固体。将该外消旋2-溴_6_(叔丁基-二甲 基-硅烷基氧基）-8-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-4,5, 6, 7-四 氢-苯并[3,4]环庚烧[1，2-b]P比啶-3-酮（360mg)用于手性分离。
[0286]手性分离应用超临界流体色谱，应用KROMASIL 0D柱（30%甲醇，在C(V冼脱中）， 得到170mg的（S) -2-溴-6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基）-8- (6-叔丁基-8-氟-1-氧 代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-4,5, 6, 7-四氢-苯并[3,4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮， 为第一洗脱峰和173mg的（R)-2-溴_6_(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基）-8-(6_叔丁 基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-4,5, 6, 7-四氢-苯并[3,4]环庚烷[1，2-b] 吡啶-3-酮，为第二洗脱峰。
[0287] 在氩气下，在（6-氨基吡啶-3-基）（吗啉代）甲酮（8. 89mg，42. 9 y mol)和 (S)-2-溴-6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基）-8-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞 嗪-2-基）-4-甲基-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮（28mg， 42.9ymol)的二5恶烷（715yL)溶液中加入碳酸铯（41.9mg，129ymol)、4,5 二（二苯基 膦基）-9,9_二甲基咕吨（3.72mg，6.44ymol)和三（二亚苯基丙酮）二钯（0) (1.96mg， 2. 15 y mol)。将混合物在100°C加热14小时，然后将其冷却至室温。将粗反应混合物用二氯 甲烷（15mL)稀释并且用Na 2S04干燥。将固体过滤并且用二氯甲烷洗涤。将合并的滤液和洗 涤液真空浓缩。将粗产物通过快速色谱纯化（硅胶，12g，1 %，然后1 %至4%在二氯甲烷中 的甲醇），得到24. 5mg的（S) -6-(叔丁基-二甲基硅烷基氧基）-8- (6-叔丁基-8-氟-1-氧 代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-2- [5-(吗啉-4-羰基）-吡啶-2-基氨基]-4, 5, 6, 7四氢苯并 [3,4]环庚烷[l，2-b]吡啶-3-酮，其本身用于下面的步骤。产物LC/MS观察值[M+H]+779。 在50mL圆底烧瓶中，将（S)_6_(叔丁基-二甲基娃烷基氧基）-8_(6_叔丁基_8_氣-1-氧 代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-2-[5-(吗啉-4-羰基）-吡啶-2-基氨基]-4, 5, 6, 7四氢 苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮（24. 5mg，31. 5 ymol)与 THF(1. 5mL)合并，得到黄 色溶液。加入四丁基氟化铵溶液（47. 2 y L，1M，在四氢呋喃中，47. 2 y mol)。将反应混合物 在室温搅拌2小时，直至通过LCMS显示完成。将反应混合物倾倒至75mL H20中并且用乙 酸乙酯（2X75mL)和IX二氯甲烷萃取。将有机层经MgS04干燥并且真空浓缩。将粗物质 通过快速色谱纯化（硅胶，40g，5%至30% (60:10:1二氯甲烷：甲醇：NH40H)，在二氯甲烷 中），得到纯产物，为玻璃状物。将产物溶于小体积的二氯甲烷中并且加入醚。白色固体沉 淀出来，得到18mg(63% )的⑶-8-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-111-酞嗪-2-基）-6-羟 基-4-甲基-2-[5-(吗啉-4-羰基）-吡啶-2-基氨基]-4, 5, 6, 7-四氢苯并[3, 4]环庚烷 [1，2-b]吡啶-3-酮，为白色固体。产物LC/MS观察值[M+H]+665。
[0288] 实施例4
[0289]
[0290] (R) -8- (6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-6-羟基-4-甲基-2- [5-(吗 啉-4-羰基）-吡啶-2-基氨基]-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮
[0291] 在氩气下，在（6-氨基吡啶-3-基）（吗啉代）甲酮（7. 94mg，38. 3 y mol)和 (R)-2-溴-6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基）-8-(6-叔丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞 嗪-2-基）-4-甲基-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮（在实施例 3中制备，25mg，38.3 y mol)的二5恶烷（638 yL)溶液中加入碳酸铯（37. 4mg，115 y mol)、 4,5二（二苯基膦基）-9,9-二甲基咕吨（3.3211^，5.75^111〇1)和三（二亚苯基丙酮）二钯 (0) (1. 75mg，1. 92 y mol)。将混合物在100°C加热14小时，然后将其冷却至室温。将粗反应 混合物用二氯甲烷（15mL)稀释并且用Na 2S04干燥。将固体过滤并且用二氯甲烷洗涤。将 合并的滤液和洗涤液真空浓缩。将粗产物通过快速色谱纯化（硅胶，12g，l%，然后1%至 4 %在二氯甲烷中的甲醇），得到21. 3mg的（R) -6-(叔丁基-二甲基硅烷基氧基）-8- (6-叔 丁基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-2-[5-(吗啉-4-羰基）-吡啶-2-基氨 基]-4, 5, 6, 7四氢苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮，其本身用于下面的步骤。产物 LC/MS 观察值[M+H]+779。
[0292] 在50mL圆底烧瓶中，将（R) -6-(叔丁基-二甲基硅烷基氧基）-8- (6-叔丁 基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-2-[5-(吗啉-4-羰基）-吡啶-2-基 氨基]_4,5,6,7 四氢苯并[3,4]环庚烷[l，2-b]吡啶-3-酮（21.3mg，27.3ym〇l)与 THF(1.5mL)合并，得到黄色溶液。加入四丁基氟化铵溶液（41.0yL，lM在四氢呋喃中， 41. 0 y mol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，直至通过LCMS显示完成。将反应混合物 倾倒至75mL H20中并且用乙酸乙酯（2X75mL)和IX二氯甲烷萃取。将有机层经MgS04 干燥并且真空浓缩。将粗物质通过快速色谱纯化（硅胶，40g，5%至30% (60:10:1二 氯甲烷：甲醇：NH40H)，在二氯甲烷中），得到纯产物，为玻璃状物。将产物溶于小体积 的二氯甲烷中并且加入醚。白色固体沉淀出来，得到15mg(59% )的（R)-8-(6-叔丁 基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-6-羟基-4-甲基-2- [5-(吗啉-4-羰基）-吡啶-2-基 氨基]-4, 5, 6, 7-四氢苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮，为白色固体。产物LC/MS观 察值[M+H]+665。
[0293] 实施例5
[0294]
[0295] 8- (8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-6-羟基-4-甲基-2- [5-(吗啉-4-羰基）-吡 啶-2-基氨基]_4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮
[0296] 通过实施例1的类似方法制备，除了在步骤1中用（2_(乙氧基甲 基）-3_(8-氟-1-氧代酞嗪-2(1H)_基）苯基）三氟硼酸钾代替（2_(乙氧基甲 基）-3- (6-叔丁基-8-氟-1-氧代酞嗪-2 (1H)-基）苯基）三氟硼酸钾，得到60mg的标题 化合物，为淡棕色固体。产物LC/MS观察值[M+H] +609。
[0297] 实施例6
[0298]
[0299] (S)-8-(8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-6-羟基-4-甲基-2-[5-(吗啉-4-羰 基）_吡啶-2-基氨基]-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮
[0300] 通过实施例3的类似方法制备，除了用6_(叔丁基-二甲基-硅烷基氧 基）-8-(8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷 [1，2-b]吡啶-3-酮代替6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基）-8-(6-叔丁基-8-氟-1-氧 代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮， 得到87mg的标题化合物，为淡棕色固体。产物LC/MS观察值[M+H]+609。
[0301] 实施例7
[0302]
[0303] (R)-8-(8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-6-羟基-4-甲基-2-[5-(吗啉-4-羰 基）_吡啶-2-基氨基]-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b]吡啶-3-酮
[0304] 通过实施例4的类似方法制备，除了用（R)-6_(叔丁基-二甲基-硅烷基氧 基）-8_(8_氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-4_甲基-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环 庚烷[l，2-b]吡啶-3-酮代替（R)-6-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基）-8-(6_叔丁 基-8-氟-1-氧代-1H-酞嗪-2-基）-4-甲基-4, 5, 6, 7-四氢-苯并[3, 4]环庚烷[1，2-b] 吡啶-3-酮，得到llmg的标题化合物，为淡棕色固体。产物LC/MS观察值[M+H]+609。
[0305] 牛物学实施例
[0306] 布鲁顿氏酪氨酸激酶（BTK)抑制测定
[0307] 该测定是通过过滤捕获放射性33P磷酸化产物。BTK、生物素化的SH2肽底物（Src 同源性）与ATP的相互作用导致肽底物的磷酸化。生物素化的产物是结合的链霉亲和素琼 脂糖珠。所有结合的、放射性标记的产物通过闪烁计数器检测。
[0308] 测定的板是96-孔聚丙稀（Greiner)和96孔1. 2 ym亲水性PVDF过滤 板（Mi 11 ipore)。在此处报道的浓度是最终测定浓度：在DMSO (Burdick和Jackson) 中的10-100 y M化合物、5-10nM BTK酶（His-标记的，全长）、30 y M肽底物（生物 素-Aca-AAAEEnGEI-NH2)、100 y M ATP (Sigma)、8mM 咪唑（Sigma，pH 7. 2)、8mM 甘油-2-磷 酸（Sigma)、200iiM EGTA(Roche Diagnostics)，lmM MnCl2(Sigma)，20mM MgCl2(Sigma)， 0.1mg/mL BSA(Sigma)，2mM DTT(Sigma)、liiCi 33P ATP(Amersham)、20% 链霉亲和素琼 脂糖珠（Amersham)、50mM EDTA(Gibco)、2M NaCl(Gibco)、2M NaCl w/1% 磷酸（Gibco)， microscint-20(Perkin Elmer)。
[0309] 使用从标准的96孔板测定模板产生的数据，从每个化合物的10个数据点计算IC5。 测定值。在每个板上测试一种对照化合物和七种未知抑制剂，并且每个板进行两次。典型 地，以半对数（half-log)稀释化合物，从100 yM开始并且以3nM结束。对照化合物是星形 孢菌素。在不存在肽底物时计数背景。在存在肽底物时，测定总活性。使用下列方法来测 定BTK抑制。
[0310] 1)样品制备：将试验化合物以半对数增量，在测